脐血来源的间充质干细胞生物学特性与向成骨细胞分化能力的研究

目的研究人脐血来源的间充质干细胞（UCBMSC）的免疫表型、生物学特性及其向成骨细胞分化的能力。方法分离脐血单个核细胞，以干细胞培养液培养间充质干细胞（MSC），观察其体外生长特性；用流式细胞术进行免疫表型测定和细胞周期分析；以含地塞米松、β-磷酸甘油和维生素C的诱导液定向诱导向成骨细胞分化；以碱性磷酸酶染色、矿化结节染色、骨桥蛋白mRNA的表达以及I型胶原表达鉴定MSC向成骨细胞分化的潜能。结果从脐血中可以培养出MSC，为成纤维细胞样的贴壁细胞。免疫表型分析显示CD45、CD34、CD11a、CD14、HLA．DR阳性细胞占1％～3％；CD166、CD44、CD106、CD29、CD105、CD49e、CD90、CD73表达率达91％～98％。细胞周期分析显示95％以上的细胞处于G0／G1期。定向成骨细胞诱导后，可以检测到碱性磷酸酶、I型胶原的表达，矿化结节的形成和骨桥蛋白mRNA的表达。结论UCBMSC是基质细胞的祖细胞，在合适的条件下可被诱导向成骨细胞分化，因此有可能作为有潜力的骨组织工程的种子细胞来源。     

成骨细胞与血管内皮细胞联合培养的生物学特性

目的探讨成骨细胞与血管内皮细胞联合培养的生物学特性. 方法取2周龄乳兔颅盖骨及肾脏皮质传代培养制备成骨细胞(A组)、血管内皮细胞(B组)及成骨细胞与血管内皮细胞联合培养(C组),用Ⅰ型胶原和血管Ⅷ因子免疫细胞化学染色鉴定成骨细胞和血管内皮细胞,倒置相差显微镜和组织学染色观察细胞的生长特性和细胞相容性,检测碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP)活性,观察血管内皮细胞对成骨细胞产生的ALP活性有无影响,MTT法检测细胞活力,分析细胞生长和增殖情况. 结果免疫细胞化学染色证实,培养的细胞为成骨细胞和血管内皮细胞.倒置相差显微镜、HE和Masson染色均显示两种细胞混合生长良好.ALP检测结果:C组ALP活性明显高于A组和B组(P＜0.01),A组高于B组(P＜0.05).MTT检测结果表明:C组细胞早期增殖较慢,而后期增殖较快. 结论成骨细胞与血管内皮细胞具有良好的相容性,血管内皮细胞能够增强成骨细胞的ALP活性,提高成骨细胞的增殖能力.联合培养细胞具有很强的增殖潜能.     

60Coγ射线对体外培养成骨细胞作用的实验研究

目的：研究放射性骨损伤的发病机制，探讨骨折合并射线损伤愈合能力下降的原因。方法：将体外培养的成骨细胞用^60Coγ射线一次性照射3、6、9、12Gy，以建立体外培养成骨细胞受射线作用的实验模型；同时，观察成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性改变，骨形态发生蛋白（BMP）和转化生长因子β1（TGF-β1）的胞质内表达量，以及细胞内钙离子的含量。结果：成骨细胞受射线照射后，其ALP活性明显降低，且与照射剂量呈明显量效关系，3Gy组抑制率为31.59%，而12Gy组则为84.95%；BMP、TGF-β1的表达量下降，但与照射剂量无明显量效关系；胞质内钙含量亦降低，但受照各组间的抑制率无明显统计学差异。结论：射线对成骨细胞具有直接损害作用，放射性骨损伤的重要方面就是射线对成骨细胞的主要功能酶ALP活性的损害，抑制BMP、TGF-β1等生长因子的合成，且干扰细胞内第二信使钙离子，从而致骨组织的再生重建机能下降。     

失重对成骨细胞基因表达和细胞功能影响的研究进展

骨骼可以适应包括重力在内的各种机械刺激，并对骨形成与骨吸收之间的平衡进行调整。失重状态下的骨质减少主要归因于骨形成的减少，这与成骨细胞功能下降有关，表现为细胞增殖粘附能力下降，与分化成熟相关的物质(碱性磷酸酶，骨钙素和I型胶原)的mRNA及蛋白合成均减少，多种生长因子的分泌量以及细胞对其反应性下降。成骨细胞功能下降的机制尚不明确，有假说认为失重时细胞形态的改变导致了基因表达与功能的变化。     

Hippo信号通路在骨质疏松症中作用机制的 研究进展

骨质疏松症（osteoporosis,OP）多发于中老年人群,属世界性公共健康问题。研究发现OP受多条信号通路调控,而Hippo信号通路对骨代谢具有重要调节作用,且可与多条信号通路发生相互作用,从而平衡成骨细胞和破骨细胞。本文对Hippo信号通路在OP中作用机制的研究进展进行综述,为该疾病的临床诊疗提供理论依据。     

PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的:探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞(MSC)分化为成骨细胞的影响。方法:采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC,体外扩增,应用地塞米松、β-甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD98059,观察其对成骨细胞形成的影响。结果:MSC体外扩增15代可获得(3-4)×10¹²个细胞。在成骨诱导液作用下,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD98059均可抑制MSC分化为成骨细胞,并有剂量依赖关系;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论:ERK信号传导途径可能在MSC分化为成骨细胞和脂肪细胞过程中起关键作用。     

兔骨髓基质细胞诱导成骨细胞复合同种异体生物衍生骨实验研究

目的探讨体外培养的骨髓基质细胞与自体来源的生物衍生骨复合后的生长特性，为进一步研究骨髓基质细胞作为种子细胞，以及探索一种良好的支架材料提供实验依据。方法分离纯化兔骨髓基质细胞并诱导成成骨细胞后与同种异体来源的生物衍生骨复合后体外培养，并在相差显微镜和扫描电镜下观察其生长情况。结果骨髓基质细胞在生物衍生骨上贴附生长、增殖良好。结论骨髓基质细胞可作为骨组织工程的理想种子细胞，与生物衍生骨复合后可作为骨组织工程的载体。     

极低频脉冲电磁场对新生大鼠成骨细胞的影响

目的：观察极低频脉冲电磁场（pulsed electromagnetic fields，PEMF）对体外培养成骨细胞增殖、分化、体外矿化的影响。方法：采用频率为15Hz、强度为5mT、占空比为15％的PEMF作用于成骨细胞，检测成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性以及体外矿化指标。结果与结论：PEMF显著促进成骨细胞增殖和体外矿化，抑制ALP活性作用。     

隔膜条件下骨再生成骨细胞来源的实验观察

目的:研究在隔膜条件下引导性骨再生过程中成骨细胞的来源,进一步认识引导性骨再生的机制.方法:以成年新西兰兔为研究对象,在双侧挠骨中段制作标准骨缺损不愈合模型,用硅胶膜成管状包裹一侧骨缺损,另一侧无特殊处理为对照.术后分别进行X线检查、常规HE染色以及SP方法BMP、BGP抗体的免疫组化染色.结果:硅胶膜在骨缺损处形成隔离密闭的腔室,将周围组织阻挡于骨缺损之外.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞大量增殖,形成肉芽组织占据骨缺损.骨再生过程中表现出明显的组织学特征:骨痂表面为2～3层成骨细胞,骨缺损中央为肉芽组织,两者之间为数层细胞形成的移行区,细胞排列疏松.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞BMP、BGP呈强阳性染色,骨痂生长过程中,移行区部分细胞呈阳性染色.结论:结果表明在隔膜条件下骨再生的成骨细胞在早期来源于髓内的骨内膜和骨髓基质细胞,骨痂形成后,成骨细胞则来源于骨内膜、骨髓、骨膜增殖细胞共同形成的肉芽组织中的间质细胞或成纤维细胞.     

诱导成骨的组织学及超微结构

选用免32只,手术截除桡骨2cm。缺损区充填DGB,手术后2、3、6、9周分别杀死动物作光镜及电镜观察。结果在电镜下发现有三类细胞,即成骨系、破基质系细胞和血管内皮细胞,并见到非成骨性结缔组织的间充质细胞分化为前成骨细胞→成骨细胞→骨细胞以及其同时分化为血管内皮细胞的全部过程。表实验从组织学和细胞学二方面证实DGB确有诱导成骨的作用。