siRNA沉默PPARγ基因对大鼠心肌细胞缺血再灌注致胰岛素抵抗现象的影响

目的 观察小干扰RNA（siRNA）沉默过氧化物酶体增殖物激活受体基因（PPARγ）的表达对成年大鼠缺血再灌注损伤（IRI）心肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法 培养成年大鼠心肌细胞,构建沉默大鼠心肌细胞PPARγ基因特异siRNA,以脂质体介导转染离体培养的大鼠心肌细胞。制备心肌细胞IRI模型。采用RT-PCR检测PPARγ和葡萄糖转运蛋白4（GLUT-4） mRNA表达,Western blot检测PPARγ蛋白表达;同位素示踪法检测细胞葡萄糖（Glu）摄取率变化。结果 IRI模型组心肌细胞PPARγ mRNA及蛋白表达较空白组不同程度增加（P均<0.05）;siRNA-PPARγ组,PPARγ mRNA及蛋白表达量较空载体组和IRI模型组明显下降（P<0.01）,空载体组PPARγ mRNA及蛋白表达接近IRI模型组水平;GLUT-4 mRNA表达量空白组各时间点无明显差别,IRI模型组0 min表达量明显降低,之后随着再灌注时间增加逐渐恢复至空白组水平,空载体组GLUT-4 mRNA表达与IRI模型组无明显差别;沉默PPARγ后,细胞GLUT-4 mRNA表达较IRI模型组和空载体组减低更明显（P<0.05）,恢复较IRI模型组更慢。在胰岛素刺激下,与IRI模型组比较,siRNA-PPARγ组各时间点Glu摄取率均降低（P<0.05）,0 min下降49.78%,15 min、1 h 、2 h分别降低38.94%、18.61%、11.54%,6 h开始恢复至IRI模型组水平。空载体组与模型组比较Glu摄取率无明显差异。结论 沉默PPARγ的表达,可加重IRI心肌细胞胰岛素抵抗,其可能的机制是PPARγ基因沉默导致的GLUT-4 mRNA表达下降或转位障碍。     

肌钙蛋白I对不稳定型心绞痛诊断及预后判断的临床意义

不稳定型心绞痛(UA)是一种严重的心血管疾病。肌钙蛋白I(cTnI)是高度特异性的心肌结构蛋白,检测血清cTnI含量,对于微小心肌损伤的判断比其它心肌酶类具有更高的敏感性和特异性。本研究通过定量测定血清cTnI,并结合测定血清磷酸肌酸同工酶(CK-MB)观察不稳定型心绞痛患者血清cTnI含量的变化及其与患者预后的关系,报告如下。     

游泳对大鼠左心室心肌超微结构的影响

目的 探讨不同运动量游泳运动对大鼠左心室心肌细胞超微结构的影响,以期为运动对心肌的生理和病理变化研究提供参考资料.方法 SD大鼠分为不同运动量运动组和力竭运动组,前者进行12周的低、中和高运动量游泳运动,后者进行1次力竭游泳运动.取左心室心肌组织进行常规透射电镜样品制备,透射电镜观察左心室心肌细胞超微结构的变化.结果 低运动量运动对大鼠左心室心肌细胞结构影响不大;中运动量运动提高心肌肌节长度,线粒体数量和体积增加,嵴变得较密集;高运动量运动对心肌细胞产生轻微破坏,肌节变短,核膜内陷,核质凝缩,线粒体嵴疏松模糊.力竭运动后即刻,对心肌细胞的细胞核和线粒体影响较大,肌节长度缩短.力竭后24 h,心肌细胞出现细胞核和线粒体损伤减轻,肌节长度增加的变化,但肌纤维排列严重紊乱.结论 高运动量和力竭运动可以导致左心室心肌细胞超微结构破坏.     

Activated Notch1 reduces myocardial ischemia reperfusion injury in vitro during ischemic postconditioning by crosstalk with the RISK signaling pathway

Background Ischemic postconditioning （IPost）,able to significantly attenuate myocardial ischemia reperfusion injury,is dependent on RISK signaling.Studies have shown that Notch signaling repairs damaged myocardium,and this study aimed to investigate the effect of Notch signaling in myocardial IPost.Methods We used H9c2 cells to establish the myocardial IPost and Hypoxia/Reoxygenation （H/R） model in vitro,which were randomly divided into control,H/R,IPost,Hepatocyte growth factor （HGF）＋IPost and DAPT＋IPost,N1ICD＋IPost,miRNA＋lPost,and Mock treatment groups.The myocardial cell viability was assessed by MTT,the cell apoptosis was detected using Annexin V/PI double staining and flow cytometry analyses.The expression of N1ICD,Hes1,PTEN Phospho-Akt/Akt,Phospho-GSK-3β/GSK-3β were detected by Western blotting.Finally,we assessed the changes in Ψm using the potential-sensitive dye JC-1 and measured using flow cytometry analyses.Results The Notch1 signaling is activated by HGF and ectopic expression of N1ICD during myocardial IPost,which increased myocardial cell viability,prevented cardiomyocyte apoptosis,and reduced loss of the mitochondrial membrane potential.However,myocardial ischemia reperfusion injury was increased in IPost when Notch1 signaling was inhibited using DAPT or with knockdown by Notch1-miRNA.Western blotting found that PTEN was down-regulated by Hes1 when Notch1 was activated,which consequently promoted Akt and GSK-3β phosphorylation.Conclusions Notch1 crosstalk with RISK signaling may be dependent on PTEN,which plays a cardioprotective role during IPost.This mechanism could provide a promising therapeutic target for the treatment of ischemic heart disease.     

心肌细胞凋亡对老年大鼠心脏功能的影响

目的 观察心肌细胞凋亡在老年大鼠心功能降低中的作用. 方法 将大鼠分为成年组（n=10）、老年组（n=10）以及广谱的caspase抑制剂Z-VAD-FMK组（n=10）.MS2000生物信号记录分析系统记录各组大鼠的心脏功能,用TUNEL和caspase-3活性检测各组大鼠的凋亡情况;并分析老年大鼠凋亡与心功能的关系. 结果 与成年大鼠相比,老年大鼠的心重/体重比显著下降,心肌收缩及舒张功能均明显降低,老年大鼠心肌细胞的凋亡明显增加.并且,caspase-3的水平与心肌收缩指数呈负相关（r=-0.772,P＜0.01）,与左室舒张压呈正相关（r=0.718,P＜0.01）.阻断老年大鼠心肌的凋亡后,心肌的收缩和舒张功能明显改善. 结论 心肌细胞凋亡在老年大鼠心功能下降中发挥着重要作用,提示临床可以通过抗凋亡措施来减少心肌细胞丢失进而延缓心功能的下降.     

银杏内酯A对缺血/再灌注损伤的大鼠心功能的影响

目的探讨银杏内酯A(Ginkgolide A,GA)对离体大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的心功能的影响。方法 Langendorff灌注离体大鼠心脏,用停灌复灌的方式制备心肌缺血/再灌注损伤模型,记录左心室收缩峰压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、收缩压和舒张压最大变化速率(±LVdp/dtmax)和心率(HR)的变化,并测定复灌后冠状动脉流出液中LDH和SOD的含量及心肌梗死面积。分离单个细胞进行GA预处理,模拟缺血/再灌注培养后检测心肌细胞存活率和单个心肌细胞的收缩幅度。结果 GA预处理以后,LVSP、-dp/dtmax和HR在复灌10 min时较缺血/再灌注组具有明显的改善(P<0.05),并增加心率,减少LDH的生成,增加SOD的活性,降低心肌梗死面积。经GA预处理的心肌细胞存活率明显提高,10μmol.L-1GA能够明显提高缺血后单个心肌细胞的收缩幅度。结论 GA对缺血/再灌注损伤的心肌具有一定的改善作用。     

CaMKⅡ信号通路在黄芪多糖抑制异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大中的作用

目的从钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-de-pendent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)信号通路角度探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)对异丙肾上腺素(isoprot-erenol,Iso)诱导心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,应用Iso 10μmol·L-1诱导心肌细胞肥大,观察β受体阻断剂普萘洛尔及不同浓度APS对肥大心肌细胞的影响。用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;Bradford法测心肌细胞总蛋白含量;ELISA法检测细胞外液中IL-6和TNF-α的含量;RT-PCR法检测ANP mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞CaMKⅡδ蛋白的表达。结果普萘洛尔(propranolol,PRO)和APS均能有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,表现为体积减小、总蛋白含量降低及ANP mRNA表达降低,并能有效减少炎症反应,表现为细胞外液中IL-6、TNF-α的含量明显减少,CaMKⅡδ蛋白含量减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对Iso诱导的乳鼠心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能与抑制CaMKⅡ信号通路及减少炎症反应有关。     

切莫将心肌炎认作感冒——浅谈心肌炎的临床诊断

前不久,一位年仅25岁的电台女主播猝死家中。由于是猝死,很难认定其确切死因,有人说其是过劳死、心肌梗死或因重症心肌炎致死。这位女主播猝死前半个月有感冒、扁桃体发炎病史,后来出现过胸闷、心跳加快,又进行过剧烈健身运动。据此,可以初步判断其可能得了重症心肌炎,这种病发病迅速,且治疗效果差、死亡率高。冬季气温低,对于城市中的白领上班族来讲,为了保持靓丽的外形,她们普遍穿得比较单薄,而室内与室外温差又很大,很容易让人患上感冒。最近接诊到几例感冒后怀疑心肌炎的患者,有些是在感冒后因运动出现心慌、胸闷,有些是感冒后突发胸闷等症状。     

TNF-α对原代培养大鼠心肌细胞β_3-AR表达的影响及意义

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对心脏β3-肾上腺素能受体(β3-AR)表达的影响及其在心衰治疗中的意义。方法培养生后2 d SD大鼠心肌细胞,取第4天的细胞加入含不同浓度TNF-α的培养液,检测不同时间作用下β3-AR mRNA及蛋白表达。结果心肌细胞受TNF-α刺激后,β3-AR mRNA及蛋白随着TNF-α作用时间的延长、作用浓度的增加,表达量增加,至作用浓度为1.6 ng/mL、作用时间为12 h达峰值。结论TNF-α作用下心肌β3-AR上调,且有时间及浓度依赖性,这可能是引起心衰的原因之一。     

过氧化氢诱导心肌细胞氧化应激中心肌蛋白变化规律的研究

目的探讨过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞氧化应激中心肌蛋白的变化规律。方法采用原代分离小鼠心肌细胞,H2O2刺激心肌细胞,分别于不同浓度H2O2刺激不同时段后,采用MTT法分析细胞活力变化,流式细胞仪测定细胞凋亡情况,ELISA试剂盒测定细胞内GSH和MDA水平,并采用蛋白印迹方法测定心肌细胞内心肌蛋白心肌肌钙蛋白T(cTnT)和间隙连接蛋白43(connexin 43)的变化规律。结果高浓度H2O2较低浓度降低心肌细胞细胞活力显著,H2O2刺激2h后细胞活力降低显著(P<0.05);高浓度H2O2刺激2h后细胞凋亡率显著升高(P<0.05);H2O2刺激减少心肌细胞谷胱甘肽(GSH)水平,增加丙二醛(MDA)含量(P<0.05);H2O2刺激增加心肌细胞内cTnT和connexin 43蛋白表达,呈现一定量效关系。结论 H2O2刺激心肌细胞,可抑制心肌细胞活力,促进细胞凋亡,造成心肌细胞氧化应激损伤,H2O2引起心肌细胞内cTnT和connexin 43表达代偿增高。提示减少氧化应激,提高抗氧自由基防御机制与疾病转归密切相关。