骨髓间充质干细胞治疗组织损伤的线粒体转移机制

背景：骨髓间充质干细胞对多种疾病具有治疗价值,其治疗疾病的线粒体转移机制是近年来被提出的新概念,具体作用机制及调控因素尚不明确。
　　目的：对现有关于干细胞及线粒体转移相关文章进行综述,并对其未来临床实际应用进行展望。
　　方法：第一作者应用计算机检索PubMed数据、维普、万方数据库中所有关于干细胞与线粒体转移相关文章。中文检索词为“干细胞、胚胎干细胞、祖细胞、线粒体”,英文检索词为“Stem Cel [s],Mother cel [s],Progenitor cel [s],Colony-Forming Unit[s],Colony Forming Unit[s],Mitochondria[l] transfer”,共检索到13篇文章,结合引文追踪法共纳入42篇文章进行综述。
　　结果与结论：骨髓间充质干细胞可以将具有正常功能的线粒体转移至损伤细胞,重建其有氧呼吸功能。细胞间通过形成连接管道结构进行线粒体转移,线粒体转移具有一定方向性。钙敏感性衔接蛋白 Miro1对线粒体转移具有加速与引导作用。线粒体的成功转移可能伴随受体细胞内损伤线粒体的清除。早期防止线粒体损伤可能对包括急性肺损伤在内的很多疾病具有治疗意义。     

传统中医推拿滚法生物动力学实验的研究方法及装置研制

背景：手法力学刺激能经过与各种细胞结合产生多类型丰富的转换结果从而启动机体多种生理调节功能。目的：分析推拿滚法能够提高细胞Ca2+通道的原因。方法：建立通过一套生物动力学实验装置,由压力发生装置、压强形成装置、压强显示装置以及相关的压强数据记录装置构成。通过压强显示、数据传输及数据记录、信号采集及处理、压强信号的采集、信号采集的控制及处理、信号无线传输及接收系统、显示系统、存储系统、系统实现功能及系统软件工作设计等环节完成推拿滚法应用生物力学对骨骼肌正常细胞和损伤细胞内Ca 2+浓度的影响。结果与结论：实验结果表明,滚法样刺激对于骨骼肌正常细胞和损伤细胞内Ca 2+浓度均有降低效果。提示由于滚法样刺激干预,使损伤细胞中细胞内的Ca2+超载得以改善,细胞内Ca2+浓度降低。在滚法样刺激与正弦力学刺激比较中,滚法样刺激的作用效果明显优于正弦力学刺激。     

胶原/生物活性玻璃/壳聚糖增强型复合支架

背景：生物活性玻璃/胶原复合材料具有优良的成骨活性和的生物学性能,然而其在人体环境中易降解而导致支架溃散、力学性能下降。 目的：构建具有良好力学性能、抗降解性能和骨修复特性的胶原/生物活性玻璃/壳聚糖增强型复合支架。 方法：以壳聚糖作为分散剂,将生物活性玻璃粉体预先在壳聚糖溶液中均匀分散,然后与胶原溶液混合,结合冷冻干燥法制备多孔胶原/生物活性玻璃/壳聚糖增强型复合骨修复支架。采用傅里叶变换红外光谱仪、场发射扫描电子显微镜、X射线衍射仪、动态生物力学试验机等对复合支架的结构和性能进行表征。 结果与结论：由于壳聚糖和生物活性玻璃粉体在微酸性环境下的电荷吸引,使在壳聚糖中预分散的生物活性玻璃颗粒在复合支架中分散更均匀;壳聚糖的引入大量增加了机体中的羟基和氨基,使分子间的相互作用增强,显著提高了材料的抗压模量和强度;壳聚糖和胶原在分子尺度的混合,使胶原分子被壳聚糖包裹,降低了胶原酶对胶原分子的酶切能力,显著提高了复合支架的抗胶原酶解性;壳聚糖分子使生物活性玻璃颗粒更均匀的包裹在大分子基相中,减少了生物活性玻璃颗粒的团聚和暴露,导致复合支架在模拟体液中的矿化活性略微降低。     

植物凝集素刺激外周血单个核细胞增殖及分泌因子表达的变化

背景：植物凝集素可以刺激外周血单个核细胞分裂并引起免疫细胞的活化,是常用的细胞增殖模型。但是全血中的非外周血单个核细胞成分（血浆和无核细胞）在植物凝集素参与的体外培养过程中起到什么作用,以及内皮分泌因子的表达情况尚不明确。目的：在体外单独培养或全血培养外周血单个核细胞过程中,观察植物凝集素对其增殖和凋亡的影响,以及相关炎症因子以及内皮分泌因子的表达变化。方法：分离正常核型成人的外周血单个核细胞,应用无植物凝集素培养基和加入植物凝集素培养基分别进行单独培养,观察细胞形态学变化。收集全血培养或不同条件单独培养的外周血单个核细胞,提取mRNA,荧光定量RT-PCR检测细胞增殖、凋亡,以及炎症因子和内皮分泌因子的表达变化,并进行统计学分析。结果与结论：外周血单个核细胞单独培养和全血培养存在差异,植物凝集素会促进外周血单个核细胞Ki67、增殖细胞核抗原、蛋白水解酶3、γ-干扰素、肿瘤坏死因子β和白细胞介素6的基因表达,抑制蛋白C表达。提示植物凝集素促进体外培养外周血单个核细胞的增殖及凋亡,促使炎症因子表达上调,部分血液生物学相关的内皮分泌因子下调。     

冻干去抗原羊松质骨支架的生物相容性评价

背景：异种骨具有与人类骨类似的天然多孔结构,在治疗骨缺损时可引导骨组织再生,但植入过程中也会引起不同程度的免疫反应。目的：采用冻干法制备去抗原羊脊椎松质骨支架材料,并评价其生物相容性。方法：取羊脊椎松质骨,制备两组去抗原异种骨支架,化学组经H2O2、甲醇/氯仿混合液等化学试剂处理;冻干组将经化学处理的羊松质骨在-80℃冰箱中低温冷冻4周,真空干燥,60结果与结论：冻干组支架无细胞毒性、急性毒性及热源反应,皮内刺激实验阴性;化学组支架有细胞毒性及轻微急性毒性反应,有致热源作用及轻度皮肤刺激性。结果表明经过化学处理羊脊椎松质骨支架的生物相容性相对较差,而化学处理配合低温冷冻、真空干燥及Co照射消毒。①细胞毒性实验：分别采用化学组材料浸提液、冻干组材料浸提液与DMEM/F12培养基培养羊骨髓间充质干细胞。②热源实验、急性毒性实验：从兔耳缘静脉分别注射化学组材料浸提液、冻干组材料浸提液与生理盐水。③皮内刺激实验：分别在兔脊柱背部皮下注射化学组材料浸提液、冻干组材料浸提液、生理盐水及乙醇。60 Co照射的羊脊椎松质骨生物相容性较好,基本能达到骨组织工程支架材料的要求。     

复合壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥的细胞相容性及毒性

背景：磷酸钙骨水泥具有良好的生物相容性和骨传导性,已被应用于临床,但其不良的力学性能和缺乏骨诱导性限制了其进一步发展和应用。目的：制备壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥,验证其细胞相容性及细胞毒性。方法：分别以含体积分数10%胎牛血清和1%双抗的α-MEM培养基、苯酚、100%及50%复合壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥材料的浸提液培养MC3T3-E1细胞,采用MTT法评估细胞生长增殖情况,采用乳酸脱氢酶活性检测法判断复合壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥材料的毒性。将MC3T3-E1细胞系与复合壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥材料共培养,扫描电镜观察细胞在材料表面的附着及生长。结果与结论：复合壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥材料浸提液对MC3T3-E1细胞的生长增殖无明显影响,无明显细胞毒性。MC3T3-E1细胞在复合壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥材料表面生长良好,伸展充分,在材料表面伸出伪足,与材料贴附紧密,表明壳聚糖微球-丝素基载药α-磷酸三钙骨水泥细胞相容性良好。     

突触蛋白质组学分析中双向电泳技术的优化

背景：双向电泳是突触蛋白质组学分析中最流行最通用的蛋白质分离方法之一.但文献中突触蛋白双向电泳对线性固相pH梯度（immobilized pH gradients,IPG）胶条和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroph-oresis,SDS-PAGE）浓度的选择很多,尚未见统一标准.目的：对突触蛋白双向电泳的IPG胶条和SDS-PAGE凝胶浓度进行优化,以获得高质量的突触蛋白双向电泳图谱.方法：以大鼠海马突触蛋白为试材,比较pH 5.0-8.0与pH 3.0-10.0线性IPG胶条,线性与非线性pH 3.0-10.0IPG胶条,以及单一浓度10％与12％ SDS-PAGE对双向电泳的影响.此外,还使用计算机检索了1989至2013年中国知网及PubMed数据库中关于突触蛋白双向电泳的文献,对文献中选择的IPG胶条、SDS-PAGE凝胶浓度进行了统计和评价,并总结了突触蛋白在不同pH值IPG胶条和不同浓度SDS-PAGE凝胶的双向电泳图谱上的分布特征.结果与结论：结果表明,使用pH 3.0-10.0的非线性胶条及单一浓度10％ SDS-PAGE凝胶进行突触蛋白双向电泳较为适宜,电泳图谱质量好,实验操作便利;同时还推荐合并使用pH 4.0-7.0和pH 6.0-11.0的IPG胶条,以及线性梯度浓度9％-16％ SDS-PAGE凝胶,也适用于突触蛋白双向电泳分析.     

P2X7受体对牙周膜干细胞成骨分化的作用

背景:研究影响牙周膜干细胞成骨分化的相关离子通道。目的:初步观察P2X7受体在人牙周膜干细胞成骨分化中的作用。方法:分离培养人牙周膜干细胞,分为4组,分别添加成骨诱导液和100 nmol/L三磷酸腺苷、成骨诱导液、100 nmol/L三磷酸腺苷及普通培养基培养,于成骨诱导7,14 d,利用茜素红染色检测成骨效果,q RT-PCR,Western blot检测OCN、Runx2以及P2X7受体的表达。结果与结论:茜素红染色显示成骨诱导液+三磷酸腺苷组牙周膜干细胞的成骨效果在7 d时显著好于成骨诱导液组,但在14 d时成骨诱导液组成骨效果显著好于成骨诱导液+三磷酸腺苷组(P<0.05);在成骨诱导7 d时,qR T-PCR结果显示成骨诱导液+三磷酸腺苷组Runx2,OCN mR NA的表达达到峰值,而14 d时明显降低(P<0.05)。成骨诱导7 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体mR NA的表达量明显高于三磷酸腺苷组(P<0.05),成骨诱导液组和对照组未见P2X7受体mR NA的表达,成骨诱导14 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组表达量下降,明显低于三磷酸腺苷组,差异有显著性意义(P<0.05)。Western blot结果显示,成骨诱导7 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体的表达达到峰值,高于三磷酸腺苷组,而成骨诱导液组表达量低,对照组几乎没有表达;成骨诱导14 d时,成骨诱导液+三磷酸腺苷组P2X7受体的表达比7 d时明显下降,而三磷酸腺苷组P2X7受体的表达比7 d时有所增加。结果表明外源性三磷酸腺苷可在牙周膜干细胞成骨诱导前7 d明显提高成骨效果,但在7 d后,抑制成骨诱导效果,三磷酸腺苷可以激活牙周膜干细胞P2X7受体表达,且P2X7受体的表达与牙周膜干细胞的成骨效果正相关。     

树鼩血清与多种二抗的交叉反应:可在树鼩疾病动物模型中广泛应用

背景:由于树鼩是介于食虫目和灵长目之间的代表,进化程度高,较价廉的灵长类动物,医学生物学的用途很高,已受到广大学者的重视。目的:检测通常用的二抗能否与树鼩的血清发生免疫反应。方法:用Western和ELISA的方法检测树鼩的血清是否与抗兔、抗羊、抗人、抗小鼠、抗大鼠、抗猴的二抗发生交叉反应。结果与结论:Western结果表明树鼩的血清与抗兔、抗羊、抗人、抗小鼠、抗大鼠的二抗均不发生反应,与抗猴的二抗有交叉反应。ELISA的结果也表明树鼩的血清与抗猴的二抗有交叉反应,而与其他二抗没有交叉反应。结果说明通常卖的二抗不能用于树鼩IgG的免疫检测,只有抗猴的二抗与树鼩的血清发生交叉反应,必需制备抗树鼩IgG的单克隆和多克隆抗体,在没有现成抗体可用时,可采用抗猴的二抗替代检测,能在树鼩疾病动物模型的研究中得到广泛应用。     

放射性心脏损伤模型大鼠接受吡格列酮干预的心脏保护作用

背景：激活过氧化物酶体增殖物活化受体γ信号途径在心血管系统有许多正效应。血管紧张素Ⅱ与心肌的纤维化密切相关,然而却很少有研究关注激活过氧化物酶体增殖物活化受体γ途径能否通过减弱血管紧张素Ⅱ的表达从而改善放射性心肌损伤。
　　目的：探索激活过氧化物酶体增殖物活化受体γ后血管紧张素Ⅱ1型受体对放射性心脏损伤模型大鼠的作用。方法：60只大鼠随机等分为对照组、吡格列酮组、模型组及照射+低、高剂量吡格列酮组。模型组及照射+低、高剂量吡格列酮组大鼠采用前后对穿照射方法接受6 MV高能X射线照射野心前1.5 cm×1.5 cm,照射剂量300 cGy/min。照射完后6 h时,低、高剂量吡格列酮组大鼠分别接受10,20 mg/kg吡格列酮灌胃,此后每天灌胃1次,连续灌胃30 d;模型组大鼠灌胃2 mL蒸馏水。吡格列酮组大鼠在对应时间灌胃10 mg/kg吡格列酮。
　　结果与结论：给予吡格列酮干预后,受照射大鼠的心脏组织损伤减轻,心脏纤维化减轻,心脏组织中血管紧张素Ⅱ1型受体蛋白及mRNA表达水平减少。提示吡格列酮干预可降低血管紧张素Ⅱ1型受体在大鼠放射性心脏损伤中的表达,提示激活过氧化物酶体增殖物活化受体γ途径可能对放射性心脏损伤有保护作用。