构建吗啡依赖条件性位置厌恶模型大鼠伏隔核壳区相关基因的表达

背景：腺苷酸环化酶Ⅷ涉及促进吗啡耐受、戒断和强化性能,对晚期长时程增强效应、长时程记忆和对应激的适应等可塑性变化中发挥重要的作用.目的：基于慢性吗啡依赖大鼠纳洛酮催瘾戒断建立的条件性位置厌恶动物模型,观察在条件性位置厌恶建立前后,与成瘾密切相关脑区伏隔核壳区内腺苷酸环化酶Ⅷ基因表达的适应性变化.方法：选用清洁级雄性S D大鼠,设模型组（吗啡＋纳洛酮组）、吗啡＋盐水组和盐水＋纳洛酮组.模型组采用连续6.5 d慢性吗啡腹腔注射10 mg/kg,纳洛酮一次催瘾注射0.3 mg/kg,同时与条件性位置训练箱搭配建立大鼠条件性位置厌恶模型,对照组依模型组对照注射等体积生理盐水.在条件性位置厌恶建立前后,采用免疫组织化学方法检测伏隔核壳区内腺苷酸环化酶Ⅷ基因的表达水平.结果与结论：条件性位置厌恶建立前,3组腺苷酸环化酶Ⅷ在伏隔核壳区表达水平差异无显著性意义（F=4.651,P=0.052）;条件性位置厌恶建立后,吗啡＋纳洛酮组腺苷酸环化酶Ⅷ在伏隔核壳区（F=4.874, P=0.028）内表达水平显著高于吗啡＋盐水组和盐水＋纳洛酮组.结果提示,伏隔核壳区内腺苷酸环化酶Ⅷ水平可能是调节阿片类物质戒断所致厌恶动机的关键因子之一;腺苷酸环化酶Ⅷ基因表达水平的变化可能是条件性位置厌恶建立相关的神经适应性变化的重要分子基础之一.     

大鼠膝关节周围微小动脉网分布及计数法的评价

背景：随着骨组织工程研究的不断深入和对骨代谢过程的不断认识,分析组织工程骨的血液供应和营养状况已成为目前的研究重点。目的：比较和评价常用的微小血管检测方法,明确各种方法的利弊,为研究组织工程骨内微血管的分布和计数提供借鉴意义。方法：分别用3种常用的血管评价法对SD大鼠膝关节周围微小动脉网进行分析对比,18只SD大鼠均分为免疫组化组、血管造影组、CT扫描重建组。结果与结论：免疫组化技术能观察到血管的分布范围,但是无法评价血管空间分布的整体情况。血管造影技术和CT检查则可以提供形象的血管空间分布图,但是CT检测时部分微小血管显示不清。免疫组化检出（26．50±3．02）条血管数明显多于血管造影（14．12±1．47）条和CT检测（9．00±1．79）条,其中CT检测组可检出的血管数最少。说明免疫组化和血管造影可以为微小血管提供微观和宏观的评价方法,从两个层面一起观察,更好的分析血管的情况,对微血管的评价有很好的借鉴意义。     

全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性及优势

背景：骨髓来源的间充质干细胞含量极低,体外纯化、扩增活性好、分化潜能高的骨髓间充质干细胞,对进一步研究至关重要。目的：进一步验证全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞的生物学特性、表型及多向分化潜能。方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞标记物表达,分别进行成骨、成脂诱导分化。结果与结论：成功纯化、扩增了高细胞活性、高分化潜能的骨髓问充质干细胞。所得细胞呈成纤维细胞样;表达CD29、CD90,不表达CD45;成骨、成脂诱导分化后,茜素红染色、油红O染色阳性。证实全骨髓贴壁法操作简单、对细胞活性损伤小,可以得到高纯度、高活性、高分化潜能、生物学形态和特征稳定的骨髓间充质干细胞。     

骨髓间充质干细胞移植小鼠免疫系统CD4＋T细胞亚群的变化

背景：研究表明,间充质干细胞是重要的免疫调节细胞,在自身免疫病的治疗中有潜在的应用前景。 目的：探讨间充质干细胞移植在治疗多发性硬化症等自身免疫性疾病中的机制。 方法：用小鼠制备间充质干细胞,并通过静脉将间充质干细胞输入同基因、异基因小鼠体内,观察间充质干细胞对小鼠中枢免疫器官（胸腺）、外周免疫器官（脾脏）中调节T细胞（Treg）的百分比、Foxp3及白细胞介素10和转化生长因子β1的mRNA的表达。 结果与结论：同基因及异基因间充质干细胞移植均能促进小鼠脾脏、胸腺及淋巴结中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞表达水平显著增高,促进小鼠脾脏、胸腺及淋巴结中Foxp3、白细胞介素10和转化生长因子β1的mRNA表达水平显著增高。提示间充质干细胞移植具有治疗自身免疫性疾病的作用,该作用可能是由CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞、白细胞介素10、转化生长因子β1及Foxp3的高表达所介导。     

脂肪干细胞修复泌尿系统损伤：应用现状及问题

背景：虽然目前还未有脂肪干细胞在输尿管修复中应用的报道,但是随着对脂肪干细胞研究的不断深入,以及向血管内皮细胞、平滑肌细胞、尿路上皮细胞分化条件控制的日趋成熟,其用于肾脏和膀胱修复与重建等的实验研究也日渐增多。 目的：综述近年来有关脂肪干细胞在泌尿系统损伤修复中的研究及其应用。 方法：由第一作者应用计算机检索PubMed数据库,检索时限2001年1月至2013年9月。检索关键词：Adipose tissue-derived stem cell/adipose tissue-derived stromal cells/ADSCs,tissue engineering,kidney,ureter,ureathra,bladder,urology; 同时检索中国期刊数据库2001年1月至2013年9月的相关文章,检索词为＂脂肪干细胞,组织工程,肾脏,输尿管,尿道,膀胱＂,纳入有关脂肪干细胞及其在泌尿系统中应用的文章,排除与研究目的无关和内容重复的文章。保留52篇文献做进一步分析。 结果与结论：脂肪干细胞以其取材方便,多向诱导分化能力强的独特优势应用到泌尿系统组织工程, 既可为泌尿系统修复、重建提供全新的治疗模式,又可解决传统治疗中的免疫排斥、器官来源和伦理学问题。脂肪干细胞已成为修复泌尿系统损伤的理想细胞来源之一,并且已大量应用到实验动物体内,其研究具有非常重要的临床意义,但是目前该细胞应用于临床上还需解决以下问题：其特定表面标志的鉴定、向特定细胞分化的条件控制、作用机制等。     

滑膜间充质干细胞修复软骨损伤：具有临床转化机制的话题

背景：软骨损伤目前仍然是临床上难以完全治愈的一大难题。近来,滑膜间充质干细胞的发现为该病变的治疗带来了新的希望。 目的：综合近几年文献探讨滑膜间充质干细胞的特性、培养条件、临床前及临床研究等关于软骨修复的研究进展。 方法：应用计算机检索1993年1月至2013年5月PubMed数据库和SpringerLink数据库中的相关文章,检索词为＂synovial mesenchymal stem cells, cartilage repair＂,并参阅其他相关的著作及高影响因子的相关文献. 结果与结论：最终纳入符合标准的文献37篇。滑膜间充质干细胞较之其他间充质干细胞具有更强的增殖、集落形成和软骨化能力。骨关节炎、类风湿关节炎等疾病可影响其细胞特性。已有大量文献集中于其体外细胞培养及动物体内细胞移植方面的研究。然而,该治疗方法的研究尚处于初步阶段。关于其细胞鉴别特性、理想培养条件及高质量临床研究方面的报道仍相当缺乏。总而言之,尽管研究有待深化,滑膜间充质干细胞仍不失为一种未来修复软骨损伤领域有前景的细胞资源。     

人脐带间充质干细胞体外诱导分化为成纤维细胞

背景：脐带间充质干细胞具有多向分化能力,但其向成纤维细胞分化研究较少。目的：验证人脐带间充质干细胞向成纤维细胞的分化能力。方法：采用贴壁法分离脐带间充质干细胞,流式细胞仪分析其表面抗原。取第3代脐带间充质干细胞进行成脂成骨诱导分化,以碱性成纤维细胞生长因子诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞分化。结果与结论：贴壁法能稳定从脐带中分离出干细胞,脐带间充质干细胞极低表达 CD31、CD45、CD40、HLA-DR,强表达 CD29、CD90、CD44、CD105。脐带间充质干细胞成脂诱导后油红O染色显示胞浆中充满红色的油滴;成骨诱导后茜素红染色可在细胞密集区见红色的钙结节。碱性成纤维细胞生因子诱导后细胞表达Ⅰ型胶原明显高于对照组。提示贴壁法分离脐带间充质干细胞可靠、纯度高,碱性成纤维细胞生长因子可诱导脐带间充质干细胞向成纤维细胞分化。     

针刺胃扩张模型大鼠内关、足三里等穴位下丘脑室旁核相关神经元的反应

背景：既往有关针刺对胃功能调节的神经机制研究多以外周神经为主,涉及中枢,尤其是高位中枢的研究较少。目的：探讨针刺“内关”、“足三里”等穴位对下丘脑室旁核胃相关神经元作用的影响。方法：运用微电极细胞外记录技术,在大鼠胃扩张的基础上,找出室旁核胃相关神经元,予以手针刺激“内关”、“足三里”等穴位各30 s,观察其对室旁核胃相关神经元的影响。结果与结论：60只大鼠共记录到109个下丘脑室旁核神经元放电,109个下丘脑室旁核神经元中与胃扩张相关的神经元有56个,56个胃扩张相关神经元中,对针刺足三里、内关、脾俞、胃俞有反应的神经元个数分别是44,47,29,33,有反应的神经元出现的比例分别是78.57%,83.47%,51.79%,58.93%。结果表明下丘脑室旁核中存在同时对胃扩张刺激和针刺刺激起反应的躯体内脏汇聚神经元,且参与针刺对胃功能的调节作用。     

构建腰椎间盘突出症血瘀证的血清蛋白指纹图谱模型

背景：腰椎间盘突出症血瘀证与非血瘀证的相互关系尚不明确。〈br〉 目的：构建腰椎间盘突出症血瘀证的血清蛋白指纹图谱模型。〈br〉 方法：按照病例对照研究方法,遵循组间民族、性别及年龄等相匹配原则筛选180例研究对象,其中120例分为腰椎间盘突出症血瘀证组及腰椎间盘突出症非血瘀证组,每组60例;健康对照组60例。抽取受试者外周血的血清样本,应用表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱及蛋白质芯片技术检测并绘制蛋白质质谱图,随后用Biomarker Wizard软件识别蛋白峰信息,建立腰椎间盘突出症血瘀证的血清诊断模型,并通过双盲验证法对模型进行验证及通过ExPASy数据库对相关差异蛋白进行蛋白检索。结果与结论：在腰椎间盘突出症血瘀证、腰椎间盘突出症非血瘀证及健康者各组之间找到11个蛋白质峰有统计学意义（P＜0.05）,其中2个蛋白质呈高表达、9个蛋白质呈低表达;用Biomarker Patterns Software构建腰椎间盘突出症血瘀证血清学诊断模型并验证,其敏感性为86.667%,特异性为94.167%,阳性预测值为88.136%。表明腰椎间盘突出症血瘀证患者的血清中存在多种异常表达的蛋白质;由11个差异蛋白组成的血清蛋白质指纹图谱模型可作为腰椎间盘突出症血瘀证的血清标志物诊断模型。     

构建及鉴定人生存素基因的慢病毒表达载体

背景：抑制椎间盘细胞的凋亡可以延缓椎间盘的退变,而生存素具有调节细胞增殖和抗凋亡功能。目的：构建人生存素基因的慢病毒载体。方法：应用全基因合成技术合成人生存素基因（BIRC5）,通过 PCR扩增目的基因并对 PCR 结果进行电泳分析。将目的基因克隆到慢病毒表达质粒构建重组慢病毒质粒 Lenti-BIRC5。将重组的慢病毒质粒转化细菌感受态细胞,PCR鉴定阳性的克隆进行基因测序。将含有目的基因的慢病毒质粒转染293T细胞,应用Western blot技术对重组慢病毒载体 Flag-Survivin 融合蛋白的表达进行检测。结果与结论：PCR鉴定及基因测序结果显示成功构建了含有人Survivin基因的慢病毒表达载体,Western blot检测结果显示目的基因在体外培养细胞中转染成功并且过表达。说明慢病毒表达载体Lenti-BIRC5构建成功,这为下一步研究Survivin在人髓核细胞中的抗凋亡作用提供了载体。