宣威昆明两地肺癌ras基因表达及突变的比较研究

目的 :比较ras基因在宣威、昆明两地肺癌中遗传变异的差异性 .方法 :采用免疫组化染色和PCR -SSCP -DNA直接测序技术 ,对 4 5例宣威地区肺癌和 4 5例昆明地区肺癌石蜡包埋组织标本中ras蛋白的表达及k -ras基因 12密码子突变进行检测 .结果 :5 5例 (5 5 / 90 )ras蛋白表达阳性 ,其中宣威肺癌组 31例 ,昆明肺癌组 2 4例 ,2 8例 (2 8/ 90 )检测到k -ras基因 12密码子突变 .对ras基因在两组肺癌中的表达及突变进行比较分析表明 :ras蛋白表达及k -ras基因 12密码子突变在宣威肺癌组中高于昆明肺癌组 ,但差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,ras蛋白在Ⅰ期肺癌病例以及腺癌病例中的表达 ,宣威肺癌组均高于昆明肺癌组 ,差异有统计学意义 (P =0 0 4 5 ,χ2 =4 5 72 ,P =0 0 32 ) .结论 :ras基因的激活是肺癌发生过程中常见的分子生物学事件 ;宣威地区肺癌与昆明地区肺癌相比 ,ras蛋白在Ⅰ期病例以及腺癌病例中的表达存在着差异 .k -ras基因 12密码子在宣威地区肺癌中的突变与昆明地区肺癌相比无明显特异性     

An Integrated Technique for Identification of Differential Genes Expressed in Patients with Cancer

Summary: To develop a method for identification of differential gene expression between different cell populations, several convenient techniques of molecular biology, including subtractive hybridization, suppression PCR, T/A cloning and sequencing, were used to identify genes expressed differentially in CD45^- and CD45^- cells isolated from U266 cell line of multiple myeloma. Our results showed that the levels of abundant genes scale down 20 times through subtractive hybridization.Plasmid DNA from CD45^- cell clones was hybridized with forward or backward cDNA probes synthesized from CD45^- and CD45 cells, respectively. A few of differentially expressed genes reconfirmed by RT-PCR were identified from 500 expressed clones of CD45^- cells. It is concluded that a strategy for gene expression identification developed from conventional molecular biological methods can be used in different laboratories.     

小鼠膜性肾小球肾炎复制方法及免疫荧光定量研究

目的：介绍实验性小鼠膜性肾小球肾炎(MGN)的复制方法，并探讨其免疫荧光定量分析在肾小球肾炎研究中的应用价值。方法：制备阳离子化牛血清白蛋白(GBSA)并复制小鼠MGN，对各组小鼠进行电镜及免疫荧光观察，并进行免疫荧光定量研究。结果：电镜、免疫荧光观察均显示病理Ⅰ组(PⅡ组)具有典型的MGN病变，病理Ⅱ组(PⅡ组)病变轻微且不典型。免疫荧光定量研究证实PⅠ、PⅡ组与对照组差异有显著性；PⅠ、PⅡ组间差异无显著性。结论：C—BSA可作为复制小鼠MGN的良好抗原，隔日2mg／只尾静脉注射4w即可复制出稳定的小鼠MGN模型。免疫荧光定量分析不仅能直接而准确地反映MGN病理变化，而且在MGN早期即具有诊断价值。     

大鼠脊髓损伤修复差异表达cDNA文库的构建

目的　 运用改良消减杂交技术构建大鼠脊髓损伤修复过程中出现的差异表达基因文库 ,为寻找在脊髓损伤后的修复过程中起关键作用的分子提供帮助。方法　在经典消减杂交的基础上引进SMART反转录、长距离PCR、磁性分离系统、离心柱色谱等方法建立改良消减杂交技术 ,通过两轮消减杂交构建差异表达基因的cDNA消减文库 ,并对文库中的差异基因进行批量克隆与生物信息学分析。结果　 将两轮消减杂交后的差异表达基因转化大肠杆菌JM10 9以建立差异表达基因文库 ,库容量大小为 2× 10 3。从文库中随机挑取 90个克隆进行酶切鉴定与测序分析 ,得到 4 0个差异基因序列 ,其中 32个已知序列 ,8个新序列。 结论　 通过改良消减杂交成功建立了脊髓损伤修复过程中出现的差异表达基因文库 ,为筛选在大鼠脊髓损伤修复过程中起关键作用的基因 ,进一步探讨脊髓损伤修复的分子机制奠定了基础     

外源性p21WAF1/CIP1基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性p21^WAF1／CIP1基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响．方法：采用脂质体介导法将p21^WAF1／CIP1基因质粒转导人人胶质瘤细胞系SHG44细胞，然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察。结果：酶切电泳和斑点杂交显示p21^WAF1／CIP1基因成功的转染至SHG44细胞。转染p21^WAF1／CIP1基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生；生长速度明显慢于亲代细胞，其倍增时间约是对照细胞的二倍；细胞周期发生明显改变，G1期明显增多，S期明显减少．结论：外源性p21^WAF1／CIP1基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用，并可诱导细胞凋亡产生。     

脂多糖刺激树突状细胞前后TLR2、3、4基因表达的检测

目的 检测脂多糖作用于树突状细胞前后TLR2、3、4基因的表达情况。方法 从外周血分离单核细胞，加入rhGM-CSF及rhIL-4，培养的第6天，实验组加入脂多糖刺激24h，对照组不加。分别提取细胞总RNA，行半定量RT-PCR，产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果 单核细胞经GM-CSF及IL-4诱导7d后的DC表达较高水平TLR2、3、4。脂多糖刺激24h后，TLR2、3、4表达下降，TLR4几乎测不到。结论 树突状细胞在受脂多糖刺激前后TLRs的表达有显著变化，推测和它的功能成熟有关。     

FKBP6基因278C/A单核苷酸多态性与原发无精症相关研究

目的对FKBP6基因第3、4外显子进行突变和多态性筛查,研究第3外显子278C/A位点及第2内含子C/T位点(rs7797242)在无精症患者和正常男性中的多态性,初步探讨与原发无精症的相关性。方法采用变性高效液相色谱和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对第3、4外显子进行突变和多态性筛查,对177例无精症患者和231名正常男性的278C/A和C/T(rs7797242)多态性进行基因分型。结果278C和278A等位基因频率符合Hardy-Weinberg平衡。无精症患者278A显著低于正常对照,差异有统计学意义(P<0.05)。C/T多态性在两组中均未检出,第3、4外显子未筛查到新的变异。结论278A等位基因可能与原发无精症相关。C/T(rs7797242)及370G/A,430G/C,467T/C,468G/A在中国人群中非常罕见。     

线粒体基因ND1/T3394C突变与糖尿病

【目的】调查线粒体NADH脱氢酶亚单位 1(ND1)基因的T3394C位点突变与中国人糖尿病的发病情况。【方法】随机收集 338例无血缘关系的糖尿病患者及 2 6 2例正常对照组 ,用聚合酶链反应扩增、限制性内切酶HaeⅢ消化进行突变筛查 ,DNA序列分析确认。【结果】糖尿病患者中T3394C突变者共 8例 (2 37%) ,正常对照组中只有 1例 (0 38%,P <0 0 1)。糖尿病突变患者中 4例有糖尿病家族史 ,4例病人由于胰岛素分泌功能下降和 /或出现并发症 ,需用胰岛素治疗。【结论】ND1/T3394C突变在糖尿病患者中的发生率明显高于正常对组 ,提示这个位点突变可能是导致线粒体糖尿病的易感基因之一。     

肺癌患者FLK-1、LRP和MDR1的表达与临床研究

目的:探讨血管内皮生长因子受体 (Flk 1),肺耐药蛋白 (LRP)基因以及多药耐药基因 (MDR1)蛋白与肺癌患者临床及病理指标的关系。方法:用免疫组化技术(ABC法)对原发性肺癌组织中三种基因的表达进行检测。结果: 70例肺癌中,非小细胞肺癌MDR1阳性率 49. 2% (29 /59),明显高于小细胞肺癌 (SCLC) 18. 2% (2 /11)(P<0. 05);非小细胞肺癌LRP阳性率 69. 5% (41 /59),明显高于小细胞肺癌 27. 3% (3 /11) (P<0. 05)。腺癌中MDR1与LRP的表达明显高于鳞癌(P<0. 05)。LRP与Flk 1在NSCLCs中共同表达 49. 2% (29 /59),LRP的表达与肺癌的组织学分级相关,MDR1和LRP的表达与肺癌的组织学类型有关,Flk 1与TNM分期相关,均有统计学意义(P<0. 05)。Flk 1 LRP均阳性、FLK 1 LRP MDR1均阳性、中药治疗、复发与患者的生存率有关(P<0. 05)。结论:FLK 1、LRP和MDR1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。     

Identification of differentially expressed genes in omental adipose tissues of obese patients by suppression subtractive hybridization

To identify differentially expressed genes between obese individuals and normal control, we have undertaken suppression subtractive hybridization （SSH）. Omental adipose tissues were obtained via abdominal surgery for appendicitis in both 13 obese subjects[BMI （body mass index） 〉 30 kg/m（2）] and 13 normal subjects （BMI 〉 18 and 〈 25 kg/m（2））.