人His6-IFNγ/TNFβ(His6γ-TNFNβ)融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究

应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni~(2 )-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map.     

p53蛋白在肺癌的表达及临床意义

目的　研究 p5 3蛋白在肺癌的表达情况及临床意义。方法　应用 SABC免疫组化技术 ,研究 6 9例各型肺癌组织 p5 3蛋白表达。结果　p5 3蛋白表达的总阳性率为 5 9.4% ,其中鳞癌5 6 .7% ,腺癌 73.7% ,小细胞癌 6 1.5 % ,大细胞癌 40 %。支气管粘膜上皮异型增生和鳞癌有相同的p5 3蛋白表达 ,而正常组织细胞中未见 p5 3蛋白表达。结论　提示 p5 3蛋白表达可能是支气管粘膜上皮密变的早期改变 ,p5 3蛋白是肺癌细胞的重要标志物。     

丹参酮对2型糖尿病高C反应蛋白的作用

目的　评价丹参酮对2型糖尿病高C反应蛋白(CRP)的作用。方法　将5 2例2型糖尿病CRP增高患者随机分2组各2 6例,均予常规降糖治疗,治疗组加服丹参酮4片/次,每天3次。共治疗3个月,比较2组治疗前及治疗后CRP水平。结果　治疗组CRP下降较对照组明显,P <0 .0 5。结论　丹参酮可明显降低CRP水平,可抑制2型糖尿病炎症反应。     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统的临床应用

目的探讨多种肿瘤标志物联合检测在肝癌、肠癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌等5种肿瘤的临床应用价值.方法采用多肿瘤标志物蛋白芯片法（C-12系统）检测205例肿瘤病人,100例良性疾病患者和150例健康人.结果恶性肿瘤组灵敏度（70.7%）、显著高于良性疾病组（38%）和健康组（16.6%）（P〈0.01）,在肺癌组中ROC曲线面积大于单项标志物.结论采用蛋白芯片系统检测多种肿瘤标志物可提高恶性肿瘤诊断的敏感性,同时有较好的特异性,其临床应用效果好于单项肿瘤标志物.     

去磷酸化RB蛋白表达对阿霉素诱导MCF-7/S细胞凋亡的影响

目的检测经阿霉素(ADR)处理的人乳腺癌MCF-7/S细胞的凋亡率(AR)及去磷酸化RB蛋白表达的变化,以探讨ADR诱导细胞凋亡的可能机理。方法将体外培养的MCF-7/S细胞分为实验组(以不同浓度ADR处理细胞)及对照组(以等体积的生理盐水处理细胞);应用MTT比色法检测ADR对MCF-7/S细胞的抑制率(IR);应用流式细胞术检测实验组和对照组细胞的AR;采用S-P免疫组化染色法检测ADR作用后去磷酸化RB蛋白表达的变化。结果ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性,IC50为0.128mg/L;0.25、2、5μg/mlADR处理的MCF-7/S细胞的AR分别为0.171、0.184、0.259,而对照组MCF-7/S细胞的AR为0.045,两者比较,有非常显著性差异(P<0.01);5μg/mlADR实验组MCF-7/S细胞的去磷酸化RB蛋白的表达量为986.8±207.4,而对照组为131.7±31.9,两者比较,有非常显著性差异(P<0.01);5μg/mlADR实验组MCF-7/S细胞的AR与其去磷酸化RB蛋白的表达量呈正相关(γ=0.998,P=0.037)。结论ADR能抑制MCF-7/S细胞增殖并诱导其凋亡,其机理可能与去磷酸化RB蛋白表达水平上调有关。     

胃腺癌组织中KAI1/CD82蛋白的表达及其意义

目的 探讨KAI1／CD82蛋白在胃腺癌组织中表达及其与胃癌生物学行为的关系。方法应用免疫组织化学技术S-P法检测68例胃腺癌组织中KAI1／CD82蛋白的表达，以20例非肿瘤性胃黏膜组织作对照。对随访14个月～13年的35例做生存分析。结果 68例胃腺癌组织KAI1／CD82蛋白阳性表达率为26、5％（18／68），对照组胃黏膜组织阳性表达率95．0％（19／20）；高／中分化胃腺癌KAI1／CD82蛋白阳性表达率较低分化者为高，分别为41．4％（12／29）、15．4％（6／39），P〈0．05；无淋巴结转移胃腺癌的KAI1／CD82蛋白阳性表达率较有淋巴结转移者为高，分别为45.5％（10／22）、5.3％（8／46），P〈0.05；侵及黏膜及黏膜下层、肌层和浆膜层胃腺癌KAI1／CD82蛋白阳性表达率分别为66、7％（4／6）、34.8％（8／23）、15.4％（6／39），P〈0.05。KAI1／CD82蛋白在Ⅰ～Ⅱ期胃腺癌阳性表达率为37.0％（17／46），在Ⅲ～Ⅳ期胃腺癌中阳性表达率为13.6％（1／22），P〈0.05。KAI1／CD82蛋白阳性患者术后1、3、5、7、10年生存率分别为100.0％（7／7）、85.7％（6／7）、57.1％（4／7）、42.9％（3／7）和28．6％（2／7），而KAI1／CD82阴性患者术后生存率分别为89、3％（25／28）、42、9％（12／28）、14．3％（14／28）、7．1％（2／28）和3、6％（1／28）。KAI1／CD82蛋白阳性患者术后1、3、5、7和10年生存率比KAI1／CD82阴性患者术后1、3、5、7和10年生存率显著提高，P〈0．05。结论 KAI1／CD82蛋白在胃腺癌的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、临床分期及淋巴结转移有关，与患者性别、年龄无关。检测KAI1／CD82蛋白有助于临床评估病情，判断预后。     

星形细胞瘤中Survivin、PTEN蛋白的表达及其相关性

目的 探讨星形细胞瘤中Survivin，PTEN蛋白的表达及它们之间的相关性。方法 应用免疫组织化学S-P法检测Survivin，PTEN蛋白的表达水平，实验数据用SPSSl2．0软件包进行统计。结果 73例星形细胞瘤Survivin蛋白总阳性表达率为64．4％（47／73），随着肿瘤恶性程度加重，其阳性表达率逐渐增高（χ^2=6．900，P=0．032）；PTEN蛋白总阳性表达率为72．6％（53／73），随着肿瘤恶性程度加重，其阳性表达率逐渐下降（χ^2=11．741，P=0．003）；Survivin和PTEN蛋白表达与星形细胞瘤的病理分级密切相关。结论 Survivin、PTEN蛋白阳性表达率与肿瘤的发展有关。随着肿瘤恶性程度的增高，Survivin蛋白阳性表达率逐渐增高，而PTEN的蛋白阳性表达率则逐渐下降。Survivin和PTEN蛋白在肿瘤中的表达可能存在负相关，在肿瘤的发展中发挥协同效应，联合检测Survivin和PTEN对于诊断星形细胞瘤，判断其恶性程度有一定价值。     

MRP在非小细胞肺癌和正常肺组织中表达及其预后意义的研究

背景与目的　肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因。多药耐药相关蛋白(MRP)在非 小细胞肺癌中的表达意义和导致耐药的机制倍受关注,其研究结果对逆转多药耐药、提高化疗疗效意义重大。 本研究旨在探讨正常肺组织和非小细胞肺癌中MRP的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法 　采用SP免疫组织化学法检测62例具有完整随访资料的非小细胞肺癌组织标本中MRP的表达,并联合应 用Westernblot对30例新鲜非小细胞肺癌和相应正常肺组织中MRP的表达进行了研究。结果　正常肺组 织MRP表达水平明显低于肺癌组织(P<0.05)。MRP表达与患者性别、组织分型、细胞分化程度、淋巴结转 移均无明显关系(P>0.05)。MRP阴性表达的非小细胞肺癌患者术后生存期为69.81月±17.41月,阳性者 为25.38月±4.46月(P=0.0156)。MRP阴性的鳞癌患者术后生存期为79.86月±20.35月,阳性者为 23.41月±4.48月(P=0.015);腺癌中MRP表达与生存期无相关性。COX模型分析表明,术后生存期与淋 巴结转移(P=0.038)、MRP表达(P=0.035)呈显著负相关。结论　非小细胞肺癌的MRP表达明显高于正 常肺组织,MRP阴性的患者术后生存期明显长于阳性者,MRP表达可能是影响非小细胞肺癌预后的独立因 素。     

γ1neo-hgp100基因的体外转染表达及体内免疫保护效应

肿瘤转移是一个复杂的、多步骤的、肿瘤细胞和宿主细胞相互作用的过程，是恶性肿瘤的重要生物学行为，往往是导致病人死亡的直接原因。随着分子生物学的发展，对肿瘤转移抑制的研究已进入分子水平，nm23基因即是近年来发现并被证实与多种肿瘤的转移有关的较新的肿瘤抑制基因，该基因可能通过影响细胞内微管的聚合／解聚和G蛋白介导的信号传导，而参与肿瘤的发生和发展。     

Cyclin E、CDK2和p21WAF1在食管上皮癌变过程中的表达及意义

目的探讨食管上皮癌变过程中细胞周期调控因子cyclin E、CDK2和p21WAF1的表达状况及其意义.方法应用免疫组化SP法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织、31例非典型增生组织和17例正常食管粘膜中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA表达.应用半定量RT-PCR和Western blot检测22例新鲜食管癌及相应癌旁组织的mRNA和蛋白表达.结果从食管正常粘膜、非典型增生组织到癌组织,cyclin E和CDK2蛋白和mRNA阳性表达率逐渐上升,差异具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).食管癌组织中cyclin E、CDK2和p21WAF1蛋白及mRNA高表达,与癌旁组织或切缘正常食管粘膜有显著性差异(P＜0.01).cyclin E、CDK2和p21WAF1基因表达显著正相关(P＜0.01或P＜0.05).结论食管上皮癌变过程中,细胞周期相关基因cyclin E和CDK2表达逐渐增强.cyclin E基因表达异常是食管癌变过程中的早期事件.p21WAF1基因在食管癌中高表达,可能与细胞周期调控的反馈机制有关.