藻酸双酯钠预防术后肠粘连的实验研究

目的 观察藻酸双酯钠预防术后肠粘连的作用.方法 选用雌性Wistar大鼠36只,刮伤其盲肠浆膜,创面滴无水乙醇,钳夹盲肠系膜动脉制造大鼠肠粘连的动物模型, 随机将动物分成3组,分别在关腹前于创面涂布藻酸双酯钠、透明质酸钠、生理盐水,术后14 d将大鼠处死, 肉眼观察肠粘连程度并对粘连组织的基质金属蛋白酶(MMP)-2和金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-2水平进行检测.结果 与生理盐水组比较,藻酸双酯钠组和透明质酸钠组均能降低术后肠粘连的程度(H=21.98,P<0.05);藻酸双酯钠组和透明质酸钠组MMP-2的表达显著高于生理盐水组(F=29.34,q=5.27、10.83,P<0.01);藻酸双酯钠组和透明质酸钠组TIMP-2的表达显著低于生理盐水组(F=83.22,q=10.51、18.17,P< 0.01).结论 藻酸双酯钠具有预防术后肠粘连的作用.     

小鼠BPI36-259抗菌蛋白在原核细胞中的表达及其抗血清的制备

目的采用原核表达系统获得小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白,免疫家兔制备目的蛋白特异性抗血清。方法利用生物信息学方法预测小鼠BPI功能片段,构建pUC57-muBPI1-281质粒;PCR扩增获得mu BPI36-259基因片段,构建pET28a-mu BPI36-259重组质粒;用IPTG诱导重组质粒转化的E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得以包涵体形式表达为主的mu BPI36-259目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得兔抗鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清;用间接ELISA法检测血清抗体特异性及其效价。结果成功构建了pET28a-mu BPI36-259重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)获得以包涵体表达形式为主的目的蛋白;用变性目的蛋白免疫家兔获得小鼠BPI36-259蛋白特异性抗血清(效价1∶10000)。结论在原核细胞中成功获得了以包涵体表达形式为主的抗菌蛋白,免疫家兔获得的特异性抗血清可用于小鼠BPI36-259目的抗菌蛋白的检测。     

人CTGF和TIMP1基因重组腺相关病毒双表达质粒的构建及其活性检测

 目的 构建人结缔组织生长因子（connective tissue growth factor, CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1, TIMP1)基因腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的蛋白的生物学活性。方法 采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定。再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites, IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1。把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量。结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒。双重免疫荧光和Western blot检测到目的蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白。结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1,转染 HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础。     

杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤GL261细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤GL261细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,为杨梅黄酮应用于胶质瘤的治疗提供理论依据。方法：体外培养小鼠脑胶质瘤GL261细胞,实验分为对照组和不同浓度杨梅黄酮组,应用CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞术检测各组GL261细胞的细胞周期,Hoechst 33342染色及流式细胞术检测各组GL261细胞的细胞凋亡情况,应用Transwell小室检测各组GL261细胞迁移数目和进入小室下部的细胞数量,应用RT-PCR法检测杨梅黄酮处理前后GL261细胞中基质金属蛋白酶（MMPs）mRNA的表达水平。结果：CCK8法检测,与对照组比较,20 μmol·L^-1杨梅黄酮组细胞存活率明显下降（P<0.01）。细胞周期检测,与对照组比较,40 μmol·L^-1杨梅黄酮处理组GL261细胞G₁期比例升高（P<0.05）,S期比例降低（P<0.05）。Hoechst 33342染色,杨梅黄酮组GL261细胞出现凋亡小体。流式细胞术AnnexinⅤ/PI荧光双染检测,与对照组比较,杨梅黄酮组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加（P<0.05）。Transwell小室迁移和侵袭实验,与对照组比较,5、10和20 μmol·L^-1杨梅黄酮组发生迁移的细胞数目明显减少（P<0.05）。Transwell小室检测,与对照组比较,杨梅黄酮组进入下室的细胞数目明显减少（P<0.05）,且随着杨梅黄酮浓度的增加,穿过Matrigel的细胞数目逐渐减少。与对照组比较,5和10 μmol·L^-1杨梅黄酮组GL261细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均降低（P<0.05）。结论：杨梅黄酮可抑制胶质瘤细胞的增殖,诱导其凋亡,并抑制其迁移及侵袭。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性表达的调节作用

①目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对不同浓度血清（FBS）诱导的大鼠心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性表达的调节作用。②方法选用新生大鼠心脏成纤维细胞；采用明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达。③结果在0．4％、2％和10％几种血清浓度的条件下，随着血清浓度的增加，MMP-2、MMP-9酶活性表达增强。AcS-DKP能够进一步增加由10％血清诱导的心脏成纤雏细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达。④结论AcSDKP上调了由血清介导的心成纤维细胞MMP-2，MMP-9酶活性表达，这可能与AcSDKP抗心脏纤维化的作用相关。     

复发性口腔溃疡与血清TNF-α,TGF-β浓度关系的临床研究

目的 :研究复发性口腔溃疡与血清TNF α,TGF β浓度关系。方法 :选择复发性口腔溃疡患者 3 2例 ,采用ELISA检测其血清TNF α ,TGF β水平 ,并与正常成年人作对照。结果 :复发性口腔溃疡患者TNF α水平较正常组明显升高 (P <0 .0 1) ,TGF β水平与正常组相比 ,无显著统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :复发性口腔溃疡的致病过程与细胞因子TNF α有关 ,与TGF β关系不密切     

艰难梭菌感染C57BL/6小鼠模型的建立方法研究

目的 建立C57BL/6小鼠抗菌药物诱导艰难梭菌感染模型,为更有效地认识人类艰难梭菌感染性疾病的发病机制及治疗措施提供依据。方法 C57BL/6小鼠经抗菌药物混合液预处理3天后,进行克林霉素腹腔注射。之后给予高、中、低浓度艰难梭菌ATCC43255悬液灌胃,建立艰难梭菌感染诱导肠损伤和结肠炎的CDI模型。观察小鼠的病死率,平均相对体重、结肠组织病理学评分和粪便艰难梭菌A&B毒素变化。结果 小鼠经抗菌药物处理和艰难梭菌灌胃后,出现腹泻,体重下降,粪便艰难AB毒素检测阳性。结肠病理切片可见炎性细胞浸润和组织坏死等结肠炎表现。随着灌胃菌液浓度的增加,小鼠症状越重,粪便毒素值越高。造模后存活下来的小鼠即使再次给予艰难梭菌灌胃也不再出现症状。结论 C57BL/6小鼠艰难梭菌感染模型与人类CDI病程变化相似,可进一步用于CDI防治措施的研究。     

基质金属蛋白酶-1、9和金属蛋白酶组织抑制因子-1对心房结构重构的作用

目的检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、9和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1在风湿性心脏病(风心病)心房颤动(房颤)患者左心房中的表达,探讨其在心房结构重构中的作用。方法选择接受外科换瓣手术的风心病患者43例,其中窦性心律(RSR)组15例,阵发房颤(PAF)组8例,慢性房颤(CAF)组20例。在外科手术中取左心房组织,分别应用免疫印迹法和逆转录-聚合酶链反应测定MMP-1、9和TIMP-1的蛋白含量和mRNA表达量。结果①与RSR组比较,CAF组MMP-9的蛋白水平和mRNA表达均明显增加(P值均<0.01),TIMP-1蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P值均<0.01)。各组间MMP-1蛋白水平和mRNA表达的差异均无统计学意义(P值均<0.05)。②CAF组中,MMP-9蛋白水平、mRNA表达与左心房内径(r=0.512、0.500)、房颤持续时间(r=0.927、0.950)均呈正相关(P值均<0.01);TIMP-1则与左心房内径(r=-0.695、-0.401)、房颤持续时间(r=-0.672、-0.695)均呈负相关(P值均<0.01)。TIMP-1与MMP-9蛋白水平和mRNA表达均呈负相关(r值分别=-0.811、-0.655,P值均<<0.01)。结论风心病合并慢性房颤患者的左心房组织中,MMP-9蛋白水平和基因表达均增强,TIMP-1蛋白水平和基因表达则减弱;MMP-9/TIMP-1平衡失调促进心房结构和功能的改变,参与房颤发生和维持。     

电针对不稳定膀胱影响的穴位特异性研究

目的：研究不同穴位电针治疗不稳定膀胱的尿动力学改变及其特异性。方法：将60只大鼠随机分为肾俞组、会阳组、肾俞加会阳组、药物组、模型组、假手术组，并给予相应处理；治疗12h后观察各组逼尿肌压力、膀胱顺应性、膀胱容量的变化。结果：各治疗方法均可改善USB大鼠的尿动力学状态；各治疗组尿动力改善情况较模型组显著（P〈0．05），且各穴位组尿动力改善与药物组相似；会阳组、肾俞加会阳组对不稳定膀胱大鼠尿动力学改善优于药物组、肾俞组（P〈0.05）；会阳组与肾俞加会阳组之间无明显差异。结论：会阳穴、会阳加肾俞穴可特异性地改善USB尿动力状态，抑制逼尿肌不稳定收缩，增加膀胱容量和膀胱顺应性。     

MMP-1中单核苷酸多态性与贵州汉族人的非小细胞肺癌易感性

目的:研究基质金属蛋白酶1(metal matrix proteinase-1,MMP-1)启动子区-1607 bp处1G或2G单核苷酸多态性(single nucleotide epolymorphism,SNP)与贵州汉族人非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)遗传易感性的关系.方法:采用聚合酶链反应 - 限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法分析71名NSCLC患者和75名健康对照者的MMP-1启动子区SNP的基因型,比较不同基因型与NSCLC发生风险的关系.结果:2G/2G基因型在NSCLC组中分布频率高于健康对照组.2G/2G基因型较1G/1G及2G/2G 1G/2G基因型患NSCLC风险率增加,OR(95%CI)值分别为3.082(1.620～5.862),2.517(1.283～4.936),吸烟可增加2G/2G基因型患NSCLC风险率.结论:贵州汉族人群MMP-1启动子区SNP(1G/2G)基因型与NSCLC易感性有关,2G/2G基因型的NSCLC发生风险增加.