用低浓度过氧化氢建立心肌细胞氧化损伤模型

目的　观察低浓度 (10 0μm ol· L- 1 )过氧化氢对心肌细胞的时间损伤效应 ,探讨在细胞水平建立心肌氧化损伤模型 .方法　胰酶消化法分离培养心肌细胞 ,随机分为两组 :H2 O2 处理组和对照组 .在处理后不同的时间点 ,倒置显微镜下观察心肌细胞每分钟搏动频率 ;硫代巴比妥酸法检测心肌细胞脂质过氧化代谢产物丙二醛 (MDA) ;生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶 (L DH) ;台盼蓝排斥试验检测细胞的存活率 .结果　 H2 O2 处理后细胞搏动频率先有一个增加过程 ,而后迅速下降直至停止搏动 ;细胞 MDA的含量随作用时间的延长逐渐升高 ,30 min开始与对照组均差异显著 (P<0 .0 1) ;L DH漏出量也逐渐增加 ,40 min后与对照组均差异显著 (P<0 .0 1) ;H2 O2 处理 30 min后细胞存活率就开始下降 ,与对照组相比组间差异显著 (P<0 .0 1) .结论　 10 0 μmol· L- 1的H2 O2 随着时间的延长表现出明显的细胞损伤效应 ,可以用它建立模型来研究心肌细胞氧化损伤     

克雷伯氏肺炎杆菌生产1,3-丙二醇代谢途径中的酶活变化

考察了不同条件下克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella.pneumoniae)合成1,3-丙二醇(1,3-PD)的3种关键酶(甘油脱氢酶(GDH)、1,3-PD氧化还原酶(PDOR)及甘油脱水酶(GDHz))的表观酶活变化。结果显示:这3种酶的酶活变化与Klebsiella.pneumoniae的1,3-PD代谢不完全相关。用SDS-PAGE电泳分析上述不同发酵条件下酶活变化,结果显示不同于3种酶的蛋白条带,Mr约为4.0×104位置的蛋白条带有明显的变化,这可能与菌体代谢过程相关,结论有待进一步深入研究。     

镁离子对培养乳鼠心肌细胞羟自由基损伤的保护作用

目的　观察镁离子对培养乳鼠心肌细胞羟自由基损伤的保护作用。方法　本实验利用FeSO4/ H2O2 自由基产生体系,观察羟自由基作用于培养乳鼠心肌细胞,其上清液中乳酸脱氢酶(LDH) 和丙二醛( MDA) 含量的变化,以及镁离子对这种作用的影响。结果　(1) 羟自由基作用于培养乳鼠心肌细胞,其上清液中LDH 和MDA 的含量增加。(2) 镁离子能减少羟自由基引起的LDH 和MDA 含量的增加,且呈一定浓度、时间依赖关系。结论　羟自由基使培养乳鼠心肌细胞LDH 漏出增加及脂质过氧化终产物MDA 含量增加,镁离子对这一损伤有保护作用     

结直肠癌中DPD与LC3、P62表达的相关性及其临床意义

背景与目的:结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一,应用5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)治疗结直肠癌常因耐药或不良反应影响其疗效,二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD)是5-FU代谢的关键酶,其表达量或降解率可能成为影响5-FU疗效的因素,自噬是细胞内蛋白质降解的重要途径。检测结直肠癌中自噬关键因子微管相关蛋白轻链3(light chain 3,LC3)、P62和DPD的表达,探讨其相关性及临床意义,为逆转5-FU耐药提供新思路。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测2013—2014年滨州医学院附属医院病理科存档的157例结直肠癌石蜡包埋组织,采用蛋白质印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测2020年滨州医学院附属医院病理科接收的44例结直肠癌新鲜组织中LC3、P62和DPD的表达,分析其相关性及其临床意义。结果:结直肠癌组织中LC3、P62...     

Bioceramics Based on β-Calcium Pyrophosphate

Ceramic samples based on β-calcium pyrophosphate β-Ca₂P₂O₇ were prepared from powders of γ-calcium pyrophosphate γ-Ca₂P₂O₇ with preset molar ratios Ca/P = 1, 0.975 and 0.95 using firing at 900, 1000, and 1100 °C. Calcium lactate pentahydrate Ca(C₃H₅O₃)₂⋅5H₂O and monocalcium phosphate monohydrate Ca(H₂PO₄)₂⋅H₂O were treated in an aqua medium in mechanical activation conditions to prepare powder mixtures with preset molar ratios Ca/P containing calcium hydrophosphates with Ca/P = 1 (precursors of calcium pyrophosphate Ca₂P₂O₇). These powder mixtures containing calcium hydrophosphates with Ca/P = 1 and non-reacted starting salts were heat-treated at 600 °C after drying and disaggregation in acetone. Phase composition of all powder mixtures after heat treatment at 600 °C was presented by γ-calcium pyrophosphate γ-Ca₂P₂O₇ according to the XRD data. The addition of more excess of monocalcium phosphate monohydrate Ca(H₂PO₄)₂·H₂O (with appropriate molar ratio of Ca/P = 1) to the mixture of starting components resulted in lower dimensions of γ-calcium pyrophosphate (γ-Ca₂P₂O₇) individual particles. The grain size of ceramics increased both with the growth in firing temperature and with decreasing molar ratio Ca/P of powder mixtures. Calcium polyphosphate (t _melt = 984 °C), formed from monocalcium phosphate monohydrate Ca(H₂PO₄)₂⋅H₂O, acted similar to a liquid phase sintering additive. It was confirmed by tests in vitro that prepared ceramic materials with preset molar ratios Ca/P = 1, 0.975, and 0.95 and phase composition presented by β-calcium pyrophosphate β-Ca₂P₂O₇ were biocompatible and could maintain bone cells proliferation.     

秃疮花提取物对红细胞氧化性溶血的抑制机制

目的探讨秃疮花提取物对鼠红细胞氧化性溶血的影响及其机理。方法以H2O2诱导体外鼠红细胞发生氧化性溶血,以乙酰苯肼引发小鼠体内溶血性贫血,观察不同浓度或剂量秃疮花对鼠红细胞溶血率,细胞形态、小鼠体内红细胞、白细胞数量,血红蛋白含量,血浆丙二醛含量,以及红细胞内各种抗氧化酶活性的影响,并分析其作用机理。结果外秃疮花提取物对H2O2诱导的鼠红细胞溶血的抑制率可达78%。小鼠腹腔注射秃疮花提取物后,与模型组比较,红细胞数目增加,血红蛋白含量提高,白细胞数目减少,血浆丙二醛含量降低,四项指标均接近正常组(腹腔注射DLF 1.5 g/(kg.d),红细胞数目为8.49×1012/L);损伤小鼠腹腔注射秃疮花提取物后,红细胞内超氧化物歧化酶活性和血浆总抗氧化力无明显改变,而过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性显著提高,葡萄糖6磷酸脱氢酶活性上升极显著(较损伤组提高44.7%)。结论秃疮花提取物在体内外可分别抑制由H2O2和乙酰苯肼引发的鼠红细胞氧化性溶血,效果明显。小鼠腹腔注射秃疮花提取物后,红细胞内抗氧化酶活性普遍提高,提示秃疮花提取物通过增强红细胞的自由基清除能力而使细胞膜免受氧化性损伤,其中葡萄糖6磷酸脱氢酶活性的上升尤为显著,据此推测秃疮花提取物有可能通过抑制乙酰苯肼对葡萄糖6磷酸脱氢酶的干扰而缓解鼠红细胞的氧化性溶血。     

乳酸脱氢酶同工酶C_4与男性不育的关系

用自制的抗人乳酸脱氢酶同工酶C_4(LDH-C_4)单克隆抗体(McAb),以免疫荧光、BA-ELISA及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)等方法,测定了110例正常及各种不育症患者精子及精浆中LDH-C_4的含量。结果表明:不明原因性不育症、少精症及无精症患者精液中LDH-C_4的含量明显低于正常对照组,与正常组比较P值均<0.001,有极显著性差异;免疫荧光还发现不育症组伴有各种畸形精子。LDH-C_4含量的明显降低可能与男性不育有关。     

乳酸脱氢酶同工酶“非脱氢酶”效应的鉴定

一组体外循环下行心脏直视手术的患者,在开胸前后的不同时间,分别取静脉血测定乳酸脱氢酶LDH总活性及其同工酶,观察到LDH同工酶电泳谱带的LDH阳极端有一快速移动的新区带,随着手术的进行逐渐消失。经过稳定性试验、改变基质成份试验、双氧水氧化试验、异常带的定位试验及红细胞的溶血试验等,最终证实此异常带为静脉注射大剂量还原性物质VitC(200mg/kg体重)所致的“非脱氢酶”效应。并且进一步做了VitC的体内、外试验以及还原NAD和NBT反应的荧光扫描,认为用荧光扫描方法可在一定程度上防止LDH同工酶测定过程中异常的干扰作用,并为LDH同工酶“非脱氢酶”效应的鉴定提供了一套较完整的试验方法。