乙型肝炎病毒基因型S基因PCR-RFLP分型方法的建立

目的 建立乙型肝炎病毒（HBV）S基因聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的基因型分型方法并验证其准确性。方法 比较GenBank中HBV223株各基因型全序列的S基因氨基酸及核苷酸序列,设计限制性内切酶BsrⅠ、StyⅠ、DpnⅠ和HpaⅡ鉴别HBVA-F基因型的方法,选择经前SPCR-PFLP的方法已鉴定出的HBVB、C和D基因型标本各30例,用此方法鉴定验证,并随机对HBVB、C和D基因型各3株标本进行S基因测序证实。结果 两种PCR-RFLP及S基因测序鉴定HBV基因型结果一致。结论 S基因PCR-RFLP的方法能够准确鉴定HBV基因型,此方法灵敏性高,特异性强,且酶切图谱简明单一,易于识别,适宜于HBＶ基因型的流行病学调查。     

大多功能蛋白酶7基因多态性与1型糖尿病易感性的关系

目的研究大多功能蛋白酶(LMP)7基因与1型糖尿病(DM)易感性的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对71例1型DM患者及86例正常对照进行LMP7基因分型.根据发病年龄将1型DM患者分为3组,A组≤14岁,B组15～30岁,C组≥31岁.结果1型DM组LMP7-B/B频率较对照组显著降低(39%vs58%,P＜0.05),LMP7-B/A频率显著升高(54%vs31%,P＜0.01).LMP7各基因型及等位基因频率在糖尿病各发病年龄组间差异无显著性.结论LMP-B/B可能是1型DM的保护基因型,携带该基因型的人群患者1型DM危险性降低.LMP7-B/A可能是1型DM的易感基因型,携带该基因型的人群患1型DM危险性增加.LMP7基因与1型DM发病年龄可能无关.     

Use of prothrombin fragment 1+2 for evaluating anticoagulant therapy after mechanical heart valve replacement

Prothrombin fragment 1+2 (F1+2) is a coagulation factor newly used as a molecular marker to monitor anticoagulant therapy in patients undergoing heart valve replacement. We evaluated the usefulness of F1+2 against that of prothrombin time (PT) reported as the internationalized normalized ratio (INR) in 93 patients undergoing mechanical heart valve implantation between August 1999 and July 2000. The study group consisted of 38 men and 55 women, with an average age of 61.1±11.2 years. The surgeries were 34 aortic replacements, 9 double valve replacements, and 50 mitral valve replacements. Warfarin doses were controlled based on PT-INR values at a target range of 1.5–2.5 F1+2 levels in the 0.4–1.2 nmol/l level were considered normal. No thromboembolism or bleeding complication occurred in any patient during the mean follow-up period of 12 months. The overall correction coefficient between F1+2 and PT-INR was 0.165 (P<0.001). A few specimens showed abnormally high levels of F1+2, even when PT-INR values were within the optimal range. The plasma levels of F1+2 that fell within normal range came from specimens with PT-INR values <1.50. The plasma levels of F1+2 that corresponded to PT-INR values of 1.50–2.50 fell just within the normal range, and the F1+2 levels corresponding to PT-INR values >2.50 were less than half of the lower limit of normal. Our analysis involving F1+2 confirmed PT-INR in the 1.5–2.5 range following mechanical heart valve implantation to be optimal. We found that using F1+2 to monitor individual response to anticoagulation therapy is useful when PT-INR values are difficult to obtain.     

精神分裂症患者核心家系的5-羟色胺2A受体基因的传递/不平衡检验分析

目的 对精神分裂症的5-羟色胺2A受体(5HTR2A)/T102C多态性作关联研究.方法 采用聚合酶链反应扩增及限制性片段长度多态性的分子生物学技术,对符合精神分裂症诊断标准的92个先证者及其父母组成的核心家系,测定5HTR2A基因分型,进行精神分裂症的5HTR2A/T102C多态性的关联分析和传递/不平衡(TDT)检验.结果 TDT检验结果 提示5HTR2A等位基因2(C102)与精神分裂症之间的相关性(McNemar χ2=4.63,P<0.05),且C102携带者的精神分裂症易患性是非T102携带者的1.88倍[相对风险度(RR)=1.88;χ2(RR)=5.60,P<0.05].结论 提示5HTR2A C102与精神分裂症相关联.     

超抗原SEA和SEB对正常人TCR V_β基因的限制性取用

金黄色葡萄球菌肠毒素 (SE )作为一种超抗原 ,以MHC非限制性及TCRVβ特异性的方式激活T细胞。本文用定量PCR方法 ,分析SEA和SEB刺激的正常人外周血淋巴细胞T细胞抗原受体Vβ的取用格局。揭示在不同HLA遗传背景下 ,SEA刺激的淋巴细胞均选择性地取用Vβ3和Vβ6两种基因片段 ,而SEB刺激的淋巴细胞则优势表达Vβ2、Vβ8和Vβ9。通过比较分析 ,Sigma产的SEB刺激淋巴细胞后则优势表达Vβ3、Vβ4、Vβ16和Vβ2 0 ,提示外周血淋巴细胞在超抗原作用下发生寡克隆扩增。     

α3—巨球蛋白基因多态性与Alzheimer病的关联研究

目的：观察α2-巨球蛋白基因（α2-macroglobulin,A2M) 内含子17一种五核苷酸缺失突变在广州地区汉族老年人中的分布,探讨其与晚发Alzheimer病（AD）的相关性。方法：以97例晚发AD患者和111名健康老年人为对照进行病例－对照研究。用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性方法分析A2M缺失／插入多态性和载脂蛋白E（apolipoproteinE,apoE)基因多态性。结果：（1）A2M基因缺失突变在晚发AD患者中的频率为2．6％,在正常老年人中的频率为2．7％,在所有受试者中未检测到A2M突变纯合体,晚发AD患者和健康老年人之间不存在A2M等位基因和基因型分布的差异,A2M基因多态性与晚发AD无关联。（2）晚发AD患者中apoE等位基因ε4频率显著升高（Z＝3．32,P＜0．01）。晚发AD与ε3／ε4基因型正关联（RR＝2．62,χ^2=6.89,P＜0．01）,和等位基因ε4正关联（RR＝2．67,χ^2=10.71,P＜0．01）。（3）晚发AD无论是否伴有apoE-ε4均与A2M不存在相关性。结论：广州汉族人群中A2M基因缺失突变多态性与晚发AD不具有关联。     

中国藏族人群具有低CCR5Δ32、高CCR2b-64I突变型基因频率

目的：调查CCR5△32、CCR5m303、CCR2b-64I和SDF1－3’A等人类免疫缺陷病毒（humanimmune deficiency virus-1,HIV-1)相关的等位基因在中国藏族人群中的频率和分布情况。方法：随机采集血样,提取基因组DNA,经PCR或PCR－RFLP分析,计算突变形基因频率,并对其群体分布、性别分布以及其相关性进行统计学分析。结果：发现藏族人的CCR5△32和CCR5m303突变型基因频率均小于0．15％;SDF1－3’A和CCR2b-64I突变型基因频率分别为19．24％和29．42％。4种突变等位基因群体分布均符合Hardy-Weinberg平衡,性别之间差异无显著性。虽然中国藏族人群CCR2b-64I的突变型基因频率较高,但CCR5△32和SDF1－3’A的突变型基因频率低,提示中国藏族人群很可能在遗传上是HIV－1易感的人群。结论：中国藏族人群与西方白人相比可能具有低CCR5△32和高CCR2b-64I等位基因突变频率。     

中国五个民族的甘露糖结合蛋白基因多态性特点及意义

目的 分析中国5个民族人群中甘露糖结合mannose-binding protein,MBP)基因多态性特点,并比较汉族慢性乙型肝炎患者与健康对照之间MBP基因多态性的差异,方法 应用聚合酶锭瓜在-限制性内切酶片段长度多态性分析,对中国5个民族的955份样品的MBP基因多态性进行检测,并将22份汉族人样品的PCR产物直接进行DNA序列分析。结果 报告了中国汉族人MBP基因第1外显子及其两侧附近的DNA序列;5个民放MBP基因密码子54（MBP-54）等位基因突变频率分别为：汉族0.181、维吾尔族0.128、蒙古族0.181、藏族0.179和彝族0.181;5个民族的MBP-54基因多态性分布均符合Hardy-Weinberg平衡;与汉族人群相比,维吾尔族的MBP-54等位基因多态性和等位基因频率的差异无显著性。所有人群中未检测到密码子52和57基因突变。结论 在所调查的5个民族中,存在较高比例的MBP-54基因突变。MBP基因的缺失并不与慢性乙型肝炎相关联。     

LTA、CYFRA21-1、NSE和CEA联合检测对肺癌诊断及病理分型的价值

目的：评价LTA、CYFRA21-1、NSE、CEA 4种肿瘤标记物联合检测对肺癌的诊断价值.方法：研究对象分3组,肺癌组、良性肺病（BLD）组、健康对照组.其中肺癌组分为非小细胞肺癌（NSCLC）（鳞癌、腺癌）和小细胞肺癌（SCLC）组.采用乳胶凝集法（LA）检测LTA;放射免疫分析法（IRMA）检测CYFRA21-1、NSE、CEA.结果：①肺癌组LTA、CYFRA21-1、NSE和CEA阳性率,显著高于BLD组和健康对照组（P＜0.01）.②肺癌组LTA、CY-FRA21-1、NSE和CEA阳性率与肺癌病理类型有关,LTA阳性率以NSCLC组最高（75.6%）,CYFRA21-1以鳞癌组最高（84.6%）,CEA以腺癌组最高（81.4%）,NSE以SCLC组最高（82.3%）,与其他病理类型相比较差异有显著性（P＜0.01）.③Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者血清LTA、CYFRA21-1、NSE和CEA阳性率均高于Ⅰ、Ⅱ期（P＜0.01）.④LTA、CYFRA21-1、NSE和CEA 4项联检阳性率高于单项与三项检测的阳性率.结论：LTA、CYFRA21-1、NSE和CEA联检是诊断肺癌有价值的组合方法.     

SNRPN基因在HepG2细胞中的印迹状态研究

目的:研究小核核糖核蛋白多肽N基因(SNRPN)在肝癌肿瘤HepG2细胞株的表达及基因印迹状态.方法:采用RT-PCR方法检测出SNRPN基因在肝癌肿瘤HepG2细胞株中的表达状况,对HepG2细胞株基因组DNA和cDNA中的SNRPN基因外显子4nt1654312位点用RT-PCR为基础的RFLP方法进行基因分型.结果:HepG2细胞稳定表达SNRPN,SNRPN外显子4nt1654312(数字依据NT_026446,SNPrs705)为杂合子(C/T);RT-PCR为基础的RFLP分析表明,SNRPN的双等位基因中只有T等位基因产生mRNA转录本.结论:SNRPN基因在HepG2肝癌细胞株中有表达,其基因印迹状态未丢失.