毒蛇咬伤治疗前后肾功能变化规律的探讨

目的：探讨各种毒蛇咬伤患者治疗前后肾功能的变化情况。方法选择近两年住院治疗、属于何种蛇伤诊断明确的毒蛇咬伤患者作为研究对象,这些患者在治疗前后各时段均进行5项肾功能指标检测,按蛇种、时段及病情对检测结果作出统计分析。结果与治疗前比较,各种毒蛇咬伤在治疗后1d除个别指标外其检测均值都有不同程度地升高趋势、特别是治疗后2d升高更明显,有些指标的升高具有显著性差异（ P＜0．05或P＜0．01）。与治疗后2 d比较,治疗后4 d各项指标均有不同程度下降。治疗前后各时段除尿酸外,其它指标均值基本上是蝰蛇咬伤显著高于银环蛇咬伤、竹叶青蛇咬伤、眼镜蛇咬伤和眼镜王蛇咬伤（P＜0．05或P＜0．01）。结论5种毒蛇咬伤均可能导致肾功能损害,其损害程度以眼镜王蛇咬伤最轻,蝰蛇咬伤最重。     

白细胞介素-10诱导的大鼠树突状细胞体外免疫功能的研究

目的　研究白细胞介素 10 (IL 10 )诱导的大鼠未成熟树突状细胞 (imDCs)体外诱导免疫耐受的可行性。方法　在经典诱导方案的基础上 ,应用IL 10 ( 10 μg/L)抑制大鼠骨髓来源DCs的成熟 (IL 10组 ,10例 ) ,并设对照组 (IL 4组 ,10例 )。培养期间观察DCs形态 ,检测DCs表型、摄取抗原能力、体外免疫功能及培养上清细胞因子水平。结果　与IL 4组比较 ,IL 10组DCs细胞表面CD80 、CD86及OX6低度表达 ( 2 5 .3 %、42 .4%、3 2 .3 % ) ,吞噬能力较强 ( 81.9) ,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力下降 ,该淋巴细胞具有抗原特异性低反应性 ;培养上清中IL 12水平 ( 4 0 6.5pg/L)及初次MLR培养上清IL 2水平 ( 2 45 .4ng/L)均较低 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。 结论　IL 10作用的大鼠imDCs具有诱导免疫耐受的应用价值。     

龟板提取物诱导神经干细胞向神经元分化过程中相关microRNA表达变化

【目的】观察龟板提取物诱导神经干细胞（neural stem cells, NSCs）向神经元细胞定向分化过程中相关microRNA表达的变化。【方法】分离培养孕14 d SD胎鼠原代神经干细胞,经免疫荧光染色鉴定神经干细胞的特异抗原及其多向分化能力。神经干细胞随机设空白对照组、龟板提取物低浓度组（3μg/mL）、龟板提取物高浓度组（30μg/mL）。诱导分化7 d,提取各组细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测不同组别miR-124和miR-9的变化。【结果】与空白对照组比较,龟板提取物低浓度组miR-124和miR-9表达均无显著变化,龟板提取物高浓度组均显著升高（P<0．05）。【结论】龟板提取物可能通过调控miR-124、 miR-9表达在NSCs向神经元细胞定向分化过程中起重要作用。     

Pragmatic clinical trials in the context of regulation of medicines

Abstract

The pragmatic clinical trial addresses scientific questions in a setting close to routine clinical practice and sometimes using routinely collected data. From a regulatory perspective, when evaluating a new medicine before approving marketing authorization, there will never be enough patients studied in all subgroups that may potentially be at higher risk for adverse outcomes, or sufficient patients to detect rare adverse events, or sufficient follow-up time to detect late adverse events that require long exposure times to develop. It may therefore be relevant that post-marketing trials sometimes have more pragmatic characteristics, if there is a need for further efficacy and safety information. A pragmatic study design may reflect a situation close to clinical practice, but may also have greater potential methodological concerns, e.g. regarding the validity and completeness of data when using routinely collected information from registries and health records, the handling of intercurrent events, and misclassification of outcomes. In a regulatory evaluation it is important to be able to isolate the effect of a specific product or substance, and to have a defined population that the results can be referred to. A study feature such as having a wide and permissive inclusion of patients might therefore actually hamper the utility of the results for regulatory purposes. Randomization in a registry-based setting addresses confounding that could otherwise complicate a corresponding non-interventional design, but not any other methodological issues. Attention to methodological basics can help generate reliable study results, and is more important than labelling studies as ‘pragmatic’.     

骨碎补总黄酮对Masquelet技术诱导膜内血管形成的影响

【目的】探讨骨碎补总黄酮对Masquelet技术诱导膜内血管形成的影响。【方法】将72只SD大鼠随机分成4组,分别为模型组,药物高、中、低剂量组,每组18只。复制SD大鼠股骨中段临界骨缺损模型,并在骨缺损区行聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥旷置诱导生物膜形成。从术后第1天开始,各药物组大鼠分别给予骨碎补总黄酮高、中、低剂量(0.44、0.22、0.11 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃治疗,模型组予等量生理盐水灌胃。给药6周后取材,采用苏木素—伊红(HE)染色法观察诱导膜组织病理变化,分别采用酶联免疫吸附(ELISA)法和实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测诱导膜中转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白及其mRNA表达。【结果】骨碎补总黄酮高剂量组诱导膜组织形成的新生血管多于其余各组。药物高、中、低剂量组诱导膜组织中TGF-β1、VEGF的蛋白及其mRNA表达水平均明显高于模型组(P0.05),除VEGF mRNA指标外,其余指标的表达均具有剂量依赖性。【结论】骨碎补总黄酮在诱导膜形成期可促进TGF-β1及VEGF的表达,加速血管化进程,促进后期骨缺损重建。     

SIRT1激动剂通过降低ACAT1表达抑制平滑肌泡沫细胞形成

目的 探讨沉默信息调节因子1 (silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cell,VSMC)泡沫化的作用和相关的分子机制.方法 用组织贴块法体外培养原代VSMC,用80μg/mL ox-LDL刺激VSMC诱导泡沫细胞形成.检测SIRT1在ox-LDL刺激不同时间(24、48、72 h)的表达变化.SIRT1的活性调控分别应用SIRT1激动剂(SRT1720,SRT,1μmol/L)和抑制剂(nicotinamide,Nic,100 μmoL/L)进行干预.干预24 h后采用Western blot检测VSMC过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(A-cholesterol acyhransferase 1,ACAT1)的蛋白表达,干预48 h后采用油红O染色检测细胞内脂质沉积和泡沫细胞形成情况.应用PPARγ激动剂(Rosiglitazone,RSG,50 μmol/L)和抑制剂(GW9662,10 μmol/L)调控PPARγ的表达,Western blot检测VSMC中ACAT1的表达.结果 ①ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中,SIRT1蛋白表达在48 h降低约47％ (P ＜0.01);油红O染色显示,SRT可以抑制VSMC泡沫细胞形成,而Nic可逆转SRT的抑制作用;②ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中ACAT1的表达显著增加[(2.77±0.70),P＜0.01],SIRT1激动剂SRT可显著抑制ACAT1的表达[(0.90±0.27),P＜0.01],而SIRT1抑制剂Nic可阻断这一作用,升高ACAT1的表达[(2.25±0.37),P＜0.05];③ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中PPARγ的表达减少[(0.73±0.12),P＜0.05],SIRT1激动剂SRT可上调VSMC中PPARγ的表达[(0.98±0.16),P＜0.05],SIRT1抑制剂Nic抑制PPARγ的表达[(0.47 ±0.13),P＜0.01];④PPARγγ激动剂RSG可抑制ACAT1的表达[(0.73±0.09),P＜0.01],而PPARγ抑制剂GW9662则上调ACAT1表达[(1.68±0.09),P＜0.01].结论 SIRT1通过上调VSMC中PPARγ表达而抑制ACAT1表达,从而抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫样变.     

青藤碱对肺癌细胞A549中COX2、α7nAChR和A2A表达的影响

【目的】观察青藤碱(sinomenine,SIN)对环氧化酶2(COX2)、α7烟碱型乙酰胆能受体(α7nAChR)和腺苷受体(A2A)表达变化的影响,探讨青藤碱对A549细胞增殖的抑制作用及机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测青藤碱和4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)对A549细胞增殖的影响;细胞划痕实验观察青藤碱和NNK对A549细胞迁移的影响;Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞COX2蛋白表达的影响;RT-PCR和Western blot法观察青藤碱和NNK对A549细胞α7n ACh R、A2A表达的影响。【结果】NNK能促进增殖和迁移,青藤碱能抑制A549细胞增殖和迁移;NNK组COX2蛋白质水平增加,青藤碱组COX2蛋白质水平下降;NNK组α7n ACh R、A2A的表达增加,青藤碱组α7n ACh R、A2A表达下降。【结论】青藤碱能通过抑制COX2蛋白表达发挥抗A549细胞增殖和迁移作用;青藤碱对α7n ACh R和A2A受体的表达均有抑制作用。     

胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生基因的调节和功能

CRES(cystatin relatedepididymalspermatogenic,胱蛋白酶抑制剂相关的附睾精子发生 )蛋白是胱蛋白酶抑制剂(cystatin)超家族中家族 2的一个亚类。然而 ,与cystatinC的广泛性表达不同 ,Cres基因只在分裂后的生殖细胞、附睾头部近端和腺垂体促性腺激素细胞中表达。cystatin对C1半胱氨酸蛋白酶抑制作用的发挥必须有 3个共有位点的参与 ,而CRES蛋白缺少其中的 2个位点。因此 ,CERS在生殖系统和神经内分泌系统中的功能也许是独特的和组织特异性的。本文概述了以下方面的研究 :①Cres基因启动子及其转录调节蛋白相关的可能对Cres的组织特异性表达有重要作用的DNA结合位点。②CRES蛋白的生物学功能。Norethern印迹法、凝胶转移分析和瞬时转染实验均表明 ,附睾和促性腺激素细胞中主要表达C EBP家族中的C EBPβ(CCAAT 增强子结合蛋白 ) ,且C EBPβ对于Cres基因在这两个组织中的高表达是必不可少的。另外 ,构建了表达氯霉素乙酰基转移酶 (CAT)报告基因的转基因小鼠 ,CAT报告基因由Cres基因 5′端 1 6kb的启动子所调控。分析显示 ,CATmRNA仅在生殖细胞中表达 ,说明Cres 5′端 1 6kb的侧翼区含有调控CAT在睾丸中表达的DNA序列 ,而缺乏指导CAT在附睾中表达的序列 ,或者此1 6kb的DNA片段存在Cres的负调节成分。最后 ,     

显性调控相关早反应基因的大规模扫描和分析

目的：动态观察白细胞介素10（IL－10）作用后，淋巴细胞早反应基因表达谱变化，为下一步评价患者免疫状态和诱导治疗提供理论依据。方法：应用DNA微矩阵技术，分离正常人外周血单个核细胞（PBMC），予以抗CD3McAb及CD3McAb IL-10刺激，抽提24h PBMC mRNA，反转录后与芯片杂交，通过生物信息学方法比较分析，结果：培养24h后，抗CD3McAb IL-10组与抗CD3McAb组比较有15个基因发生改变，5个基因表达明显下调，10个基因上调，主要功能在于促进基因编码区连接，影响 细胞骨架和运动，不同部位的磷酸化，去磷酸化，细胞识别，会促进细胞生长作用，细胞凋亡，信号传递的基因则重点涉及钙离子－钙调蛋白，G－蛋白信号通路。结论：在IL－10作用，细胞凋亡，信号传递的基因则重点涉及钙离子－钙调蛋白，G－蛋白信号通路。结论：在IL－10作用下，一系列基因转录活化，其中许多先前与免疫细胞无明确功能的相关基因参与了T细胞活化与调控，是否该群基因即代表IL－10作用下淋巴细胞的基因表达标签，尚须进一步证实；要完全明确T细胞调控网络，还应全面分析T淋巴细胞基因表达谱，从中筛选差异有显著意义的基因，进行功能研究。