斑蝥体中斑螯素的紫外分光光度测定法

用紫外分光光度法测定宁斑蝥虫体中斑蝥素的含量。分析结果与中国药典规定的酸碱滴定法相一致,回收率99.98%,变异系数0.719%。     

斑蝥素非离子表面活性剂囊泡的制备及其体外特性表征

目的:以非离子表面活性剂为载体材料进行斑蝥素囊泡的制备考察,并评价其特性表征。方法:建立了注入法制备斑蝥素非离子表面活性剂泡囊的制备工艺;采用离心法和HPLC法测定斑蝥素囊泡的包封率;考察不同处方因素对囊泡体外表征的影响,在此基础上正交设计优化处方;对最佳处方囊泡的形态学、粒径、Zeta电位等性质进行了考察。结果:注入法获得的CTD-NS的包封率为(27.5±2.0)%,粒径(209.8±0.5)nm,Zeta电位(41.5±0.65)mV。结论:以非离子表面活性剂A和B联用为载体材料,注入法制备斑蝥素非离子表面活性剂囊泡,制备方法简单,性质稳定。     

斑蝥素引起小鼠急性中毒的器官损伤

目的:通过建立斑蝥素(cantharidin,CTD)诱导小鼠急性毒性模型,比较CTD急性毒性剂量给药后小鼠各器官损伤情况,探究CTD引起小鼠急性毒性的靶向器官及可能机制。方法:取Balb/c小鼠,CTD梯度剂量(2,3,4 mg·kg-1)一次性灌胃给药,观察小鼠的生存状态,并获得CTD急性毒性剂量和最佳取材时间。根据以上结果,以CTD急性毒性剂量给药,3 h后使用戊巴比妥钠对小鼠进行麻醉后检测心电图,取血清检测丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白的浓度。取心、肝、肾、肠通过苏木素-伊红(HE)染色进行组织病理学观察分析。结果:与正常组小鼠相比,给药组小鼠不同剂量CTD给药后,小鼠的中毒反应随剂量升高而增大,CTD急性毒性剂量为4 mg·kg-1,平均死亡时间为(4.64±1.33)h。与正常组小鼠相比,CTD组急性毒性剂量给药后小鼠心电图出现异常J点上移,心率趋缓。血清中丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、心肌肌钙蛋白均明显升高(P0.05),肌酸激酶、乳酸脱氢酶显著升高(P0.01);HE病理染色显示,与正常组相比,CTD组急性毒性剂量给药后引起小鼠小肠、肝脏、肾脏损伤不明显,心脏出现炎症细胞浸润、心肌纤维结构紊乱,心肌间质充血及点状坏死,损伤严重。结论:心脏是CTD引起小鼠急性毒性关键靶向器官。     

斑蝥素与培美曲塞对结直肠癌HCT116细胞的联合作用

目的:探究斑蝥素(cantharidin,CTD)与培美曲塞(pemetrexed,MTA)联合用药对HCT116细胞产生的影响。方法:应用长时间细胞观察及功能分析系统(Incu CyteTMZOOM)及克隆形成实验,分析两药联合对结直肠癌HCT116细胞生长增殖的影响;应用流式细胞术检测两药联合对结直肠癌HCT116细胞凋亡的影响;采用蛋白免疫印迹法检测两药联合对HCT116细胞半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及聚二磷酸腺苷核糖多聚酶(PARP)蛋白表达的影响;应用β-半乳糖苷酶衰老染色实验检测两药联合对结直肠癌HCT116细胞衰老的影响;应用Compu Syn软件计算联合作用指数(CI)。结果:与MTA单药组相比,MTA与CTD联合用药能够显著增加对HCT116细胞的生长抑制率(P0.01);显著增加凋亡水平(P0.01);明显增加衰老水平(P0.05);显著减少pro-Caspase-3的表达量,增加cleaved-PARP的表达量(P0.01)。同时,Compu Syn软件计算的CI1,表明两药具有协同作用效果。结论:MTA与CTD具有良好的联合作用效果,能够通过诱发HCT116细胞凋亡以及衰老来抑制细胞的生长增殖,发挥抗肿瘤作用。     

斑蝥素通过MAPK信号传导途径对A549细胞增殖抑制作用的研究

目的 :研究斑蝥素对人肺癌A5 49细胞的增殖抑制作用和有丝分裂原激活蛋白激酶 (mi togenactivatedproteinkinase ,MAPK)表达的影响。方法 :采用MTT法检测斑蝥素对A5 49细胞的增殖抑制作用 ;流式细胞仪分析A5 49细胞周期及斑蝥素对细胞周期的影响 ;蛋白印迹法检测斑蝥素作用后ERK1、ERK2 、phos ERK1、phos ERK2 表达的改变。结果 :斑蝥素对A5 49细胞有增殖抑制作用 ;A5 49细胞周期出现明显的G2 /M期阻滞 ,t检验P <0 0 5 ;ERK1、ERK2 、phos ERK1、phos ERK2表达下降。结论 :MAPK信号传导途径参与了斑蝥素对人肺癌A5 49细胞的增殖抑制作用。     

复方斑蝥通过miR-520d/Beclin1信号轴逆转三阴乳腺癌化疗耐药的机制研究＊

目的 探讨复方斑蝥通过miR-520d/Beclin1信号轴逆转三阴乳腺癌（Triple-negative breast cancer,TNBC）化疗耐药的机制研究。方法 构建人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,MDA-MB-468细胞的耐药模型MDA-MB-231/Doc,MDA-MB-468/Doc。MTT法检测亲本株和耐药株细胞活性;Western blot检测自噬相关蛋白表达;miRNA芯片检测复方斑蝥处理前后的TNBC耐药细胞;实时定量PCR（RealtimePCR）检验miRNA表达以验证芯片检测结果;荧光素酶实验验证miRNA和BECN1/Beclin1的结合位点。结果 MTT结果显示,复方斑蝥注射液能够显著提高TNBC耐药细胞株化疗敏感性。WB结果表明,复方斑蝥注射液能够浓度依赖性的抑制TNBC耐药细胞的自噬水平;miRNA芯片检测发现复方斑蝥能够显著上调miR-520d 水平,RealtimePCR验证了这一结果。荧光素酶实验表明MiR-520d通过作用于Beclin1/BECN1 3\" UTR区域抑制其表达;最后,WB检测证明miR-520d mimics能够明显抑制TNBC耐药细胞株中Beclin1/BECN1的蛋白表达,MTT法结果显示miR-520d mimics与TNBC耐药性细胞对多西他赛的敏感性成正相关。结论 复方斑蝥注射液通过调控miR-520d/BECN1/Beclin1信号轴逆转三阴性乳腺癌化疗耐药。     

新型斑蝥素类似物LB1协同阿霉素杀伤肝癌细胞的实验研究

目的 通过水溶性化学小分子蛋白磷酸酶2A抑制剂LB1与阿霉素(doxorubicin,DOX)联合应用,研究其在肝癌化疗过程中的协同作用.方法 体外细胞活性分析检测不同剂量LB1对HepG2细胞活性影响及其与阿霉素(DOX)的协同杀伤效应;通过裸鼠体内荷瘤模型以及组织化学分析,进一步观察LB1对肿瘤生长影响以及在体与阿霉素的协同化疗作用.结果 LB1对HepG2细胞生长与作用剂量相关,低剂量时可促进其生长,高剂量时则促进其凋亡,而且在联合阿霉素后,可显著提高对HepG2肿瘤细胞的杀伤作用;体内实验也发现,单纯给予阿霉素抑瘤率为57％,而LB1联合应用后,抑瘤率可达77％,显著提高了阿霉素对肿瘤的杀伤作用(P＜0.05),且无明显毒副作用.结论 LB1联合应用可显著提高阿霉素( DOX)对肝癌细胞的化学杀伤作用.     

小窝蛋白3在人结直肠癌组织中的表达及斑蝥素对其表达的抑制作用

目的: 探讨小窝蛋白3(CAV3)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达及斑蝥素对于CAV3表达的影响,阐明斑蝥素防治结直肠癌的分子学机制。方法: 取30例手术切除的CRC组织,同时取癌旁正常组织为正常对照组,通过HE染色和免疫组织化学法检测CAV3在人CRC组织中的阳性表达率。将人CRC HCT-116 细胞分为对照组、氟尿嘧啶组和斑蝥素组,通过免疫组织化学染色和实时定量 PCR法检测CAV3 mRNA表达水平。结果: HE染色,与正常对照组比较,CRC 组织中癌细胞核染色较深、排列紊乱。30例CRC组织中22例CAV3呈阳性表达,阳性表达率为70.3%;正常对照组呈阴性表达。免疫组织化学染色,与正常对照组比较, CRC组织中CAV3 蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116 细胞中CAV3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。实时定量PCR法,与对照组比较,氟尿嘧啶组和斑蝥素组HCT-116 细胞中CAV3 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论: CAV3蛋白在大多数人CRC组织中呈高表达,斑蝥素可能通过下调CAV3表达抑制CRC细胞生长。     

斑蝥素抑制舌癌细胞生长及转移能力

摘 要:【目的】 观察斑蝥素(Cantharidin)对舌癌细胞株Tca8113?CAL-27生长及转移能力的抑制作用?【方法】 舌癌细胞株Tca8113?CAL-27处理组采用斑蝥素处理,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长能力;通过流式细胞术检测细胞的细胞周期分布;通过实时定量PCR和Western-blot检测p21?细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)?基质金属蛋白酶-2?9(MMP-2,9)基因表达的变化;通过Transwell小室及划痕实验检测斑蝥素对细胞侵袭和迁移能力的影响?【结果】 斑蝥素抑制舌癌细胞生长,呈剂量和时间依赖性(P﹤0.01)?斑蝥素处理后G2/M期细胞比例上升(P﹤0.01),呈G2/M期阻滞?斑蝥素处理后,抑制G2/M周期转换的p21表达上调(P﹤0.01),而促进G2/M周期转换的CDK1表达下调(P﹤0.01)?斑蝥素可显著抑制舌癌细胞的侵袭能力,处理24 h使Tca8113?CAL-27细胞侵袭力分别下降(93.50 ± 3.32)%(P﹤0.01),(61.33 ± 4.11)%(P﹤0.01)?斑蝥素处理后MMP-2?9 mRNA表达量显著降低?划痕实验显示斑蝥素可显著抑制舌癌细胞的迁移能力(P﹤0.01),处理12 h使Tca8113?CAL-27细胞迁移能力分别下降(57.60 ± 8.98)%(P﹤0.01),(49.94 ± 5.63)%(P﹤0.01)?【结论】 斑蝥素通过阻滞细胞周期抑制舌癌细胞的生长,并通过抑制舌癌细胞迁移和对基质的降解,抑制舌癌细胞转移?     

艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素的减毒增效作用

目的探讨艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素的增效、减毒作用。方法采用MTF法考察刺五加提取物对斑蝥素引起的肿瘤细胞（SMMC-7721肝癌细胞）和正常大鼠肾NRK细胞的细胞毒作用;采用流式细胞术检测SMMC-7721和NRK细胞凋亡情况。用斑蝥素制作大鼠急性肾损伤模型,考察刺五加提取物对肾损伤大鼠的保护作用。结果刺五加提取物可增强斑蝥素对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用,降低斑蝥素对NRK细胞的细胞毒作用（P〈0．05或〈0．01）;刺五加提取物能增强斑蝥素引起SMMC-7721细胞凋亡,抑制NRK细胞凋亡（P〈0．05或〈0．01）。刺五加提取物可降低斑蝥素所致肾损伤大鼠的尿素氮、肌酐含量,减少尿液中尿蛋白含量（P〈0．05或〈0．01）。结论艾迪注射液中刺五加提取物对斑蝥素有增效、减毒作用。