32株孢子丝菌临床株两种基因分型方法比较

目的 确定哪种孢子丝菌基因分型的方法分辨力更高,所分基因型与临床表现及地域分布相关性更好。方法 以32株不同地区及临床类型的孢子丝菌菌株为研究样本,分别进行mtDNA RFLP分型,基因组DNA RAPD分型和rDNA RFLP-Southern blotting杂交分型,并进行比较。结果 mtDNA-RFLP方法将受试菌株分为5型,分别对应Ishizaki等命名的1,4,6,7,20五种基因型;RAPD方法将受试菌株分为7种基因型（I-VII型）; rDNA RFLP-Southern blotting杂交方法将受试菌株分为15种基因型（A-O型）,且其所分基因型与菌株的南北方分布及临床表现有一定相关性。结论 三种孢子丝菌基因分型方法中,rDNA RFLP-Southern blotting杂交方法分辨力较高,所分基因型与临床表现及地域分布相关性更好。     

Immunoproteomics to identify tumor-associated antigens eliciting humoral response

Proteome analysis has rapidly developed in the post-genome era and is widely accepted as a complementary technology to genetic profiling. Sera from tumor patients contain tumor specific antibodies directly against antigenic proteins. Immunoproteomics, which defines the subset of proteins involved in the immune response, holds considerable promise for the discovery of tumor-associated antigens, suggesting that this approach may be a useful tool for identification of prognostic, diagnostic markers and novel therapeutic targets. Recently, various different approaches are developed to identify tumor-associated antigens by autoantibodies from tumor patients' sera. More than one hundred tumor-associated antigens have been found in various tumors by with antibody-based strategy nowadays. However, some autoantibodies are also found in health subjects, even some of them with high antibody occurrence. So, it is necessary to undergo sufficiently detailed validation schemes for these novel tumor-associated antigens.     

成纤维细胞生长因子2、成纤维细胞生长因子受体4蛋白在人甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中成纤维细胞生长因子2(FGF-2)和成纤维细胞生长因子受体4(FGFR-4)的表达及其是否存在相关性。方法收集89例甲状腺乳头状癌及30例癌旁正常甲状腺组织标本,采用免疫组织化学和免疫印迹法(Western blotting)检测FGF-2和FGFR-4蛋白在标本中的表达,并进行统计学分析。结果免疫组织化学方法结果显示,与癌旁正常组织相比,FGF-2及FGFR-4在人类甲状腺乳头状癌组织中均高表达(P0.01,P0.01),两者差异有统计学意义;FGF-2和FGFR-4在甲状腺乳头状癌中的表达与淋巴结转移(χ2=14.798,P0.01;χ2=7.27,P0.01)和分化程度(χ2=13.824,P0.01;χ2=16.921,P0.01)相关,而与性别、年龄、肿瘤大小无关(P0.05);通过Western blotting技术分析,FGF-2和FGFR-4癌组织中的表达明显高于正常组织,随着癌组织分化程度的降低,表达明显上调(P0.05),其结果和免疫组织化学染色的检测结果一致;并且两者在甲状腺乳头状癌中的表达呈正相关(rs=0.434,P0.01)。结论 FGF-2和FGFR-4与甲状腺乳头状癌的发生、侵袭和转移有关,两者具有正协同作用,联合检测对判断甲状腺乳头状癌的恶性程度及生物学行为是一项有意义的综合性指标。     

结直肠癌患者血清中转甲状腺素蛋白的表达与肿瘤转移的相关性

目的对发生远处转移结直肠癌患者血清中转甲状腺素蛋白（transthyretin,TTR）的表达进行研究,旨在探讨TTR的表达与结直肠癌转移的关系,进一步发现TTR与结直肠肿瘤转移之间的相关性。方法收集23例结直肠癌患者血清,标本于-80℃保存。根据是否发生远处转移进行分类,未发生远处转移样本12例,远处转移样本11例。采用蛋白免疫印迹的方法对TTR的表达进行半定量分析。结果利用Image J软件计算各组光密度比值,显示在未发生远处转移的结直肠癌患者血清中,TTR的表达量高于发生远处转移的患者,TTR在两组结直肠癌患者血清中表达差异有统计学意义（P=0.017）。结论 TTR在结直肠癌患者血清中的表达水平与肿瘤是否发生转移存在相关性,因此,今后对于评估结直肠癌浸润与转移的水平,TTR可以发挥肿瘤标志物的作用。     

活化白细胞黏附分子、E-钙黏蛋白和β-连环蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的通过对甲状腺乳头状癌(PTC)、结节性甲状腺肿和癌旁正常组织中活化白细胞黏附分子(ALCAM)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平的检测,分析三者在PTC发生、发展过程中的作用及三者之间的相关性,探讨ALCAM、E-cadherin和β-catenin在PTC中的作用机制。方法采用免疫组织化学法、Western blotting法检测ALCAM、E-cadherin和β-catenin在PTC中的表达并分析三者的变化与临床病理特征的关系。结果 PTC组织中ALCAM的阳性率明显高于结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P0.05);PTC组织中E-cadherin的阳性表达率明显低于结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P0.05);PTC样本中β-catenin的异位表达率明显高于结节性甲状腺肿和癌旁正常组织(P0.05)。三者的阳性率在结节性甲状腺肿和癌旁正常组织中无明显差异(P0.05)。三者的异常表达与PTC淋巴结转移有关(P0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小无关(P0.05)。结论在PTC组织中ALCAM、β-catenin高表达,E-cadherin呈现低表达,三者的异常表达与淋巴结转移相关。三者在PTC的发生、发展和转移的过程中起重要的作用。     

桉叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法 SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA)。正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7~14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。桉叶油3个剂量组于孕第7~14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达。Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达。阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙。结果维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最低值分别为55%(桉叶油高剂量+RA组)和45.8%(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P0.05)。在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最高值分别为62.5%(桉叶油低剂量+RA组)和55.0%(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7%,73.7%)和溶剂对照组低(68.2%,63.6%,P0.05)。与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用。其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关     

微小RNA-27a在子宫颈癌中的表达变化及作用机制

目的 探讨微小RNA（miR)-27a靶向调控F框/WD-40域蛋白7（FBXW7）对子宫颈癌细胞的增殖、凋亡及侵袭的影响。 方法 30例宫颈癌组织和癌旁组织、30例正常宫颈组织新鲜标本用于实验。Real-time PCR检测宫颈癌、癌旁组织、正常宫颈组织以及宫颈癌细胞（SiHa、Caski、HeLa、HCC94）、子宫颈鳞状上皮永生化细胞H8中miR-27a的表达。应用脂质体转染法将miR-27a抑制剂（inhibitor）及其阴性对照转染至SiHa细胞,CCK-8法、流式细胞术、Transwell法分别检测miR-27a对SiHa细胞增殖活性、细胞周期、凋亡率和侵袭能力的影响。生物学信息法预测miR-27a的靶向基因,双荧光素酶报告基因实验结合Western bloting验证miR-27a对FBXW7的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织和正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中miR-27a高表达（P<0.05）;与子宫颈鳞状上皮永生化细胞H8相比,宫颈癌细胞SiHa、Caski、HeLa、HCC94中miR-27a高表达（P<0.05）。抑制SiHa细胞中miR-27a的表达,能够明显降低细胞的增殖活性（P<0.05）,提高G0/G1期细胞比例（P<0.05）,降低S期和G2/M期细胞比例（P<0.05）, 提高细胞凋亡率（P<0.05）,抑制细胞的侵袭能力（P<0.05）。生物学信息法预测FBXW7可能是miR-27a的靶向调控基因;双荧光素酶报告基因实验显示,miR-27a可以与FBXW7基因的3’UTR区特异性结合（P<0.05）, 并负调控FBXW7蛋白的表达（P<0.05）。 结论 MiR-27a在宫颈癌的发生发展中起着癌基因的作用,抑制miR-27a表达能够明显抑制宫颈癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向调控FBXW7的表达有关。     

穴位埋线抑制血管性痴呆大鼠神经炎症反应

目的 观察穴位埋线对血管性痴呆(VD)大鼠环氧化酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)信号通路中炎症因子表达的影响,探讨穴位埋线对VD大鼠脑部神经炎性反应抑制作用的机制.方法 采用改良Pulsinelli's4血管阻断法建立VD模型,148只雄性SD大鼠随机分为VD模型组、非穴位埋线组、穴位埋线组,另设置假手术组...     

双氢青蒿素对人胰腺癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨双氢青蒿素对人胰腺癌细胞(PANC-1)增殖活性及凋亡的影响,及其作用机制。方法30、60、120、240和480μmol/L双氢青蒿素作用PANC-1 48 h后,采用MTT法检测双氢青蒿素对PANC-1增殖活性的影响,流式细胞术检测其细胞周期和凋亡的变化,Western blotting检测细胞内周期相关蛋白cyclin B1、Cdk1、p21及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9和细胞色素C(Cyto C)蛋白表达变化。结果 MTT实验结果表明,30~480μmol/L双氢青蒿素对PANC-1增殖活性具有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,双氢青蒿素可以使PANC-1细胞周期阻滞于G2/M期,并诱发PANC-1细胞发生凋亡,且随药物浓度呈现升高趋势(P<0.05)。Western blotting结果显示,双氢青蒿素作用后周期相关蛋白Cdk1和Cyclin B1蛋白表达降低,而P21蛋白表达升高。凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。结论双氢青蒿素能抑制PANC-1增殖并诱发细胞凋亡,其凋亡机制可能与线粒体途径相关。     

成纤维细胞生长因子2对创伤后应激障碍模型大鼠行为及海马星形胶质细胞的影响

目的探讨成纤维细胞生长因子2（FGF2）对创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠的行为以及海马星形胶质细胞的作用。方法采用单次延长应激（SPS）建立大鼠PTSD模型,然后在SPS大鼠第7d给予高剂量FGF2因子腹腔注射,采用自发活。刃、高架十字迷宫方法观察高剂量FGF2单次给药对SPS模型大鼠行为学的影响;同时利用星形胶质细胞标志物——胶艇纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色方法,观察各组大鼠海马星形胶质细胞阳性表达的情况,并利用双重荧光Westernt印迹法验证GFAP在不同实验组的蛋白表达情况。结果与SPS组大鼠相比,FGF2高剂量给药后明显减轻SPS大鼠的焦虑或抑郁状态,且明显增强海马内GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞的表达。结论FGF2可明显改善SPS大鼠的焦虑或抑郁症状,其治疗PTSD的机制可能与增加星形胶质细胞的活性有关。