Expression of OCT4 in human esophageal squamous cell carcinoma is significantly associated with poorer prognosis

AIM: To explore the expression pattern of OCT4 in human esophageal squamous cell carcinoma and its significance in diagnosis and prognosis.METHODS: Using real-time polymerase chain reaction (PCR), Western blotting, immunocytochemistry and immunohistochemistry, the expression of OCT4 in three esophageal squamous cancer cell lines, KYSE70, KYSE140 and KYSE450, was characterized. OCT4 expression was investigated in a series of 153 esophageal squamous cell carcinoma samples using immunohistochemistry and explored its association with clinicopathological features.RESULTS: Immunohistochemically, OCT4 positive immunostaining was observed in cancer cell nuclei. OCT4 was variably expressed in three esophageal squamous cancer cell lines. Among 153 specimens, 105 (68.7%) were negative or weakly positive for OCT4 staining; 21 (13.7%) were moderately positive and 27 (17.6%) were strongly positive. Higher expression level of OCT4 was significantly associated with higher histological grade (P < 0.001) and poor clinic outcome (P < 0.001).CONCLUSION: The expression of OCT4 enables the tumor to have a higher degree of stemness, which in turn results in a poorer clinical outcome for patients with esophageal squamous cell carcinoma.     

Measuring temporal expression,systematic response,and post-mortem stability to assess potential markers for estimating wound age: an example of Fosl1 in contused skeletal muscle

To assess whether Fosl1 is a suitable parameter for wound age estimation, a total of 126 male Sprague–Dawley rats were divided into control (n = 6 per group), contusion (including 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, and 48 h post-severe injury, and 4 or 8 h post-moderate or -mild injury subgroups), and post-mortem (including 6, 12, 18, and 24 h subgroups) groups (n = 6 per subgroup). A contusion was produced in the right limb of the rats using the drop-ball technique (under intraperitoneal chloral hydrate anaesthesia), and the animals were sacrificed using a lethal dose of pentobarbital. The expression of Fosl1 mRNA and protein was determined in the contused and contralateral uninjured muscle and post-mortem specimens of musculi quadriceps femoris using real-time PCR and western blotting, respectively. Compared with the control group, the expression of Fosl1 mRNA was increased in several contused and contralateral uninjured muscles, and decreased in post-mortem groups (P<0.05). The expression of Fosl1 protein was increased in the 4, 8, 32, 36, 40, 44, and 48 h contusion subgroups (P<0.05), but there was no significant change in the contralateral uninjured muscles and post-mortem specimens. The results indicated that Fosl1 protein was more specific and stable than Fosl1 mRNA, which suggests that the temporal expression, systematic response, and post-mortem stability should be comprehensively analysed when exploring other markers for use in wound age estimation in the future.     

牛奶中高分子质量蛋白致敏作用的初步研究

目的探讨牛奶中高分子质量蛋白在牛奶过敏过程中的致敏作用。方法选取牛奶过敏患者血清30例,皮肤点刺试验阳性,血清特异性Ig E(s Ig E)检测结果均为阳性且≥1+。健康对照血清1例,血清s Ig E检测阴性,无过敏史。空腹采血,收集血清于-20℃冻存备用。利用Sephadex G200凝胶层析获得牛奶高分子质量蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Wetern blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清s Ig E的结合活性。结果 SDS-PAGE显示Sephadex G200凝胶层析纯化得到的高分子质量蛋白主要包括3条带,分子质量约为67、80和160 ku,推断其可能是牛血清白蛋白、乳铁蛋白和免疫球蛋白。经Western blot分析,3种高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清均能反应,并且在67 ku附近条带最明显。经ELISA分析,高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清的阳性反应率比β-乳球蛋白略高(分别是46.7%、43.3%)。结论牛奶中高分子质量蛋白组分能够诱导特异性抗体产生,这些组分在牛奶过敏过程中具有重要的致敏作用。     

棘球蚴特异性抗原的蛋白质印迹分析

目的　寻找细粒棘球蚴 (Eg)和多房棘球蚴 (Em)特异性抗原组分用于免疫诊断。　方法　对Eg、Em的囊液、原头节、囊壁角质层、囊壁生发层及犬泡状带绦虫、犬豆状带绦虫、羊细颈囊尾蚴、猪囊尾蚴等 4种异源性绦虫 ,共14种粗抗原进行免疫学分析。采用蛋白质印迹试验 (Western blotting)、Genesnap和Genetool分析软件比较分析不同抗原蛋白条带分别与囊型棘球蚴病 (CE)及泡型棘球蚴病 (AE)患者血清反应的差异。　结果　 14种粗抗原中与CE、AE患者血清发生交叉反应的 11条蛋白条带相对分子质量 (Mr)为 130000、100000、94000、80000、75000、66000、62000、52000、38000、32000及 24000 ;与CE患者血清有特异性反应的 5条蛋白条带Mr为 41000、40000、22000、160 00和12000 ;与AE患者血清具有特异性反应的 8条蛋白条带Mr为 120000、109000、86000、59000、43000、28000、20000及 18000。　结论　确定了Eg和Em共有的交叉反应性抗原和具有进一步研究价值的特异性抗原组分 ,为进一步分离和鉴定具有诊断价值的特异性抗原提供了基础资料     

亚低温对大鼠脑微血管内皮细胞中P-糖蛋白表达的影响

目的探讨亚低温对大鼠脑微血管内皮细胞中P-糖蛋白表达的影响。方法将原代分离的大鼠脑微血管内皮细胞按培养温度分三组：37℃组、35℃组、32℃组,并在相应温度的培养箱下培养5d。运用免疫细胞方法检测大鼠脑微血管内皮细胞中P-糖蛋白,采用Westernblot方法测定各组细胞中P-蛋白的含量变化。结果37℃组细胞P-糖蛋白表达明显高于亚低温的另外两组（P均〈0．01）,35℃组细胞P-糖蛋白表达高于32℃组（P〈0．05）。结论亚低温情况下对大鼠脑微血管内皮细胞中P-糖蛋白表达量有明显影响,从而对药物药动学和药效学产生影响。     

京尼平对缺氧/复氧损伤后大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响

目的 探讨京尼平对缺氧/复氧(H/R)损伤后大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响。方法 建立H/R损伤模型,体外培养的大鼠H9c2心肌细胞行缺氧12 h、复氧4 h。实验分为对照组（Con）、京尼平组(GE)、缺氧/复氧组(H/R)、缺氧/复氧+京尼平组(H/R+GE)。细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察自噬体,Western blotting检测Bax、Bcl-2、P62、Beclin1、LC3-Ⅱ、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和p-mTOR蛋白的表达。结果 京尼平预处理增强了H/R损伤后的H9c2心肌细胞活力,抑制细胞凋亡及自噬体累积,降低自噬结构断面积与细胞质断面积的比值。Western blotting结果显示,京尼平预处理减少了H/R损伤后Bax、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达,增加Bcl-2、P62、p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论 京尼平可以抑制H/R损伤后心肌细胞凋亡及自噬,其机制可能与上调Akt/mTOR信号通路有关。     

双氢睾酮对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素表达的影响

目的 探讨双氢睾酮（DHT）对大鼠原代卵泡颗粒细胞抗苗勒管激素（AMH）表达的影响。方法 从95只21 d SD雌性大鼠中提取颗粒细胞原代培养48 h后,先用HE染色检测细胞形态,卵泡刺激素受体（FSHR）细胞免疫荧光检测细胞纯度;然后根据干预方法和实验的不同,随机将细胞分为对照组（无药物干预）、10^-8mol/L DHT组、10^-5mol/L DHT组,2×10^-5mol/ L蛋白激酶B(Akt)抑制剂（MK-2206 2Hcl）组和10^-8mol/L DHT+2×10^-5mol/L MK-2206 2Hcl组,分别使用相应浓度的试剂干预细胞3 h。干预完成后,细胞免疫荧光染色观察AMH表达的部位和变化;Western blotting测定不同组的AMH、Akt、p-Akt蛋白表达量。结果 大鼠原代卵泡颗粒细胞的纯度为93.33%±3.09%,AMH表达在大鼠原代卵泡颗粒细胞膜和细胞质中;与对照组相比,10-8 mol/L DHT和10-5 mol/L DHT均可使颗粒细胞AMH表达增加（P<0.05）,但这两个浓度的DHT对颗粒细胞AMH的表达影响差异无显著性（P>0.05）;与对照组相比,10^-8 mol/L DHT可以使p-Akt、AMH表达升高,2×10^-5 MK-2206 2Hcl使AMH表达降低（P<0.05）;与2×10^-5MK-2206 2Hcl相比,10^-8mol/L DHT+2×10^-5 MK-2206 2Hcl处理组AMH表达升高（P<0.05）。结论 DHT可以上调大鼠原代卵泡颗粒细胞AMH的表达,这种作用可能与Akt信号通路有关。     

藤黄酸通过核因子κB抑制剂激酶α/p65信号通路抑制人胃癌细胞系SGC-7901的侵袭

目的 探讨藤黄酸（GA）对人胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的影响及其机制。方法 用不同浓度藤黄酸、核因子κB抑制剂激酶（IKK16）和阳性对照药物5-氟尿嘧啶作用人正常胃黏膜上皮GES-1细胞和人胃癌SGC-7901细胞48 h后,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力,Transwell侵袭实验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,免疫印迹法检测波形蛋白（vimentin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的蛋白表达水平以及IKKα和p65的蛋白磷酸化水平。结果 藤黄酸可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞活力,半数抑制浓度（IC₅₀）分别为1.89 μmol/L,但对GES-1细胞活力无显著影响;5-氟尿嘧啶对GES-1和SGC-7901细胞均有抑制作用,IC50 分别为7.36 μmol/L和199.57 μmol/L。低剂量藤黄酸或IKK16可抑制SGC-7901细胞侵袭,下调MMP-2、MMP-9和vimentin的蛋白表达水平以及抑制IKKα和p65蛋白磷酸化,并且两者联合作用时抑制作用更强。 结论 低剂量藤黄酸可在体外抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭,其机制可能与抑制IKKα/p65信号通路,继而下调MMP-2、MMP-9和vimentin蛋白表达水平相关。     

鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制

目的 探讨鬼臼苦素（PPP）对人结直肠癌细胞系HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制。方法 不同浓度PPP处理HCT-15细胞,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测HCT-15细胞的增殖活性;倒置显微镜下观察HCT-15细胞的形态变化;流式细胞术检测HCT-15细胞周期的改变;Western blotting检测增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的蛋白表达水平。结果 CCK-8法结果显示,PPP能显著抑制HCT-15细胞的增殖活性,并呈剂量-时间依懒性;倒置显微镜下观察发现,细胞失去原有形态回缩为圆形,折光性降低,活细胞数量明显减少;流式细胞术结果显示,G₂/M期细胞比例显著升高,G₀/G₁期和S期细胞比例明显降低;Western blotting结果显示,PCNA、细胞周期蛋白D1的表达水平明显降低。结论 PPP可显著抑制人结直肠癌HCT-15细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调PCNA、cyclinD1的表达水平,进而将细胞阻滞于G₂/M期发挥抑制作用。     

醉茄素A通过诱导白色脂肪组织褐变抵御高脂饮食诱导的肥胖

目的 探索醉茄素A对高脂饮食诱导肥胖的抵抗作用及其作用机制。方法 8周龄C57BL/6 J小鼠分为醉茄素A组和对照组,每组10只,高脂饮食（HFD）饲养,分别给予醉茄素A或对照溶剂DMSO腹腔注射,每天测量小鼠体重及摄食量。1周后取材,称量小鼠腹股沟白色脂肪（iWAT）、附睾白色脂肪（eWAT）、腹膜后白色脂肪（rWAT）和肩胛间棕色脂肪（BAT）的重量;取iWAT检测褐变相关因子表达水平;HE染色观察iWAT细胞形态变化。结果 醉茄素A组小鼠的体重和各部位脂肪组织重量均显著低于对照组,摄食量无明显变化;Real-time PCR显示,醉茄素A组小鼠iWAT中褐变相关基因表达水平显著提高;Western blotting结果表明,醉茄素A组小鼠iWAT中解耦联蛋白1（UCP1）和过氧化物酶体增殖体激活受体γ共激活因子1α（PGC1α）表达明显增加;HE染色与免疫荧光结果显示,醉茄素A组小鼠腹股沟白色脂肪细胞呈现典型褐变特征,如脂肪细胞多腔室化。结论 醉茄素A可能通过诱导小鼠白色脂肪组织褐变抵御高脂饮食诱导的肥胖。