Effects of sequential treatments with chemotherapeutic drugs followed by TRAIL on prostate cancer in vitro and in vivo

BACKGROUND: Tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand/Apo2 ligand (TRAIL/Apo-2L) is a novel anticancer agent, capable of inducing apoptosis preferentially in tumor and transformed cells. TRAIL-R1/death receptor (DR)4 and TRAIL-R2/DR5 are members of the tumor necrosis factor (TNF) receptor family, and can be activated by the TRAIL. We examined the clinical potential of chemotherapeutic drugs and TRAIL for the treatment of prostate cancer. METHODS: Prostate and bladder cancer cells were exposed to chemotherapeutic drugs (paclitaxel, vincristine, vinblastine, etoposide, doxorubicin, and camptothecin) and TRAIL. Cell viability was measured by sodium 3'[1-(phenylaminocarbonyl)-3,4-tetrazolium]-bis (4-methoxy-6-nitro) assay; expressions of death receptors and Bcl-2 family members were measured by Western blotting, ELISA and ribonuclease protection assay. PC-3 tumor cells xenografted athymic nude mice were exposed to chemotherapeutic drugs and TRAIL, either alone or in combination, to measure tumor growth and survival of mice. Apoptosis was measured by annexin V-FITC/propidium iodide staining, and terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated nick end labeling assay. Caspase-3 activity was measured by the Western blotting and immunohistochemistry. RESULTS: TRAIL induced apoptosis with varying sensitivity. Chemotherapeutic drugs (paclitaxel, vincristine, vinblastine, etoposide, doxorubicin, and camptothecin) significantly augmented TRAIL-induced apoptosis in cancer cells through up-regulation of DR4, DR5, Bax, and Bak, and induction of caspase activation. Mitochondrial pathway enhanced the synergistic interactions between drugs and TRAIL. The sequential treatment of mice with chemotherapeutic drugs followed by TRAIL induced caspase-3 activity, and apoptosis, inhibited angiogenesis, completely eradicated the established tumors, and enhanced survival of mice. CONCLUSIONS: Chemotherapeutic drugs can be used to enhance the therapeutic potential of TRAIL in prostate cancer.     

大鼠胰腺炎模型中腺泡细胞凋亡的观察

目的: 探讨胰腺腺泡细胞凋亡在胰腺炎发病机制中作用.方法: 复制大鼠胰腺炎模型,将45只SD大鼠分成3组,即重症胰腺炎组18只,轻型胰腺炎组18只和正常对照组9只.在术后第6,12,24小时3个时相点行胰腺组织病理学检测评分和腺泡细胞TUNEL法凋亡检测.结果: 重症胰腺炎组凋亡少见,以细胞坏死为主,且随时间凋亡趋减少,各时相点凋亡指数与轻型组和正常相比差异有显著性意义.轻型组以细胞凋亡为主,随着炎症减轻凋亡增多,术后第24小时达高峰.正常组为正常胰腺组织,少见凋亡.结论: 胰腺炎腺泡细胞中存在细胞凋亡现象,细胞凋亡与坏死呈反相关,细胞凋亡有减轻胰腺炎严重程度的作用.     

Epidermal and vascular damage analysis of in vivo human skin in response to 595 nm pulsed laser irradiation

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Laser irradiation is the current modality for treatment of cutaneous hypervascular malformations such as port wine stains and telangiectasia. Although cryogen spray cooling (CSC) is used to protect the epidermis from non-specific laser-induced thermal damage in moderately-pigmented skin types, individuals with high melanin content are still at risk for epidermal damage using the current laser irradiation and CSC parameters. The objective of this study was to investigate the influence of the spray Weber number (1,100 or 5,100) on epidermal protection and examine vascular coagulation in response to pulsed dye laser irradiation. STUDY DESIGN/MATERIALS AND METHODS: Normal, in vivo human skin from eight subjects of Fitzpatrick skin types I-V were precooled with either low or high Weber number cryogen sprays and subsequently irradiated with a pulsed dye laser at 595 nm. Analysis of gross purpura, morphological vascular damage, and apoptosis of the vascular walls were performed. RESULTS: Results demonstrated a high Weber number spray of 5,100 decreased the level of epidermal damage in darker and moderate pigmented individuals compared to a Weber number spray of 1,100. This study also established a positive correlation between gross purpura and the level of vessel wall apoptosis. CONCLUSIONS: This study has demonstrated that CSC with a high Weber number spray can decrease nonspecific thermal damage to the epidermis in response to laser irradiation in vivo. We have also established a positive correlation between gross purpura and the level of vessel wall apoptosis. Lasers Surg. Med. (c) 2005 Wiley-Liss, Inc.     

塞来昔布对正常大鼠心室结构和功能的影响及机制

目的: 探讨塞来昔布( Celecoxib) 对正常Wister 大鼠心室结构和功能的影响及可能的作用机制。
方法: 无创测动脉血压,观察血压变化。超声心动图评价心室功能的改变。左心室组织切片苏木精－ 伊红( HE) 染
色观察大鼠心室结构的变化。ELISA 法检测血浆及心肌组织中肿瘤坏死因子－ α( TNF － α) 、白细胞介素－ 10
( IL － 10) 、前列环素( PGI₂) 、血栓素A₂( TXA₂) 的含量; TUNEL 法检测左心室心肌细胞凋亡情况。结果: Celecoxib
用药2wk 后射血分数( EF) 和左心室短轴缩短率( FS) 显著升高( P ＜ 0． 05) ,血浆中TNF － α 显著降低
( P ＜0． 05) ,心肌组织中PGI₂显著增加( P ＜ 0． 05) ,TXA₂显著减少( P ＜ 0． 05) ; 用药4wk 后CO 显著升高( P ＜ 0． 05) ;
PGI₂减少,血浆中TXA₂显著升高( P ＜ 0． 05) ,IL － 10 显著降低( P ＜ 0． 05) 。结论: Celecoxib 可使大鼠左心室收
缩功能有所提高,可以调节心脏局部前列环素和血栓素A₂的比例平衡,同时调节整体TNF － α、IL － 10 含量。     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

沉默赖氨酸乙酰基转移酶基因对人甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨赖氨酸乙酰基转移酶（Kat5）对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）信号通路的作用,阐明Kat5在甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡中的可能作用机制。方法：RT-PCR和Western blotting法检测甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1、K1细胞和甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平。将对数生长期甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和沉默Kat5组（si-Kat5组）。空白对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞不转染,阴性对照组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染阴性对照siRNA,si-Kat5组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞转染Kat5 siRNA。RT-PCR和Western blotting法检测各组甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组TPC-1细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组TPC-1细胞克隆形成率,流式细胞术检测各组TPC-1细胞凋亡率,Western blotting法检测各组TPC-1细胞中周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）、P21、P53、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PI3K、磷酸化PI3K （p-PI3K）、AKT和磷酸化AKT （p-AKT）蛋白水平。结果：甲状腺乳头状癌BHP10-3、TPC-1和K1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平均高于甲状腺上皮Nthy-ori3-1细胞（P<0.05）。各组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、细胞克隆形成率、细胞凋亡率以及细胞中CDK2、P21、P53、cleaved caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT及p-AKT蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）;与空白对照组和阴性对照组比较,si-Kat5组TPC-1细胞中Kat5 mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞增殖活性降低（P<0.05）,细胞克隆形成率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中CDK2、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低（P<0.05）,P21、P53和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：甲状腺乳头状癌细胞中Kat5mRNA和蛋白表达水平升高,沉默Kat5基因可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

代谢型谷氨酸受体7对人胚胎神经干细胞增殖的影响

目的 研究代谢型谷氨酸受体7(mGluR7)对人胚胎神经干细胞增殖的影响。方法 利用MTT比色法分析mGluR7过表达载体、mGluR7siRNA在不同时间对体外的人胚胎NSCs细胞活力的影响, 神经球测量方法分析mGluR7对人神经球生长的影响, 流式细胞术分析mGluR7对人NSCs细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 MTT结果表明在处理24 h, 48 h和72 h后, mGluR7显著增强人NSCs的细胞活力, 增殖细胞数量显著增多, 神经球直径显著增大, mGluR7siRNA抑制人神经球的增殖。过表达mGluR7后, 与对照组相比G1/G0期和细胞比率显著下降, S期细胞比率显著上升, mGluR7过表达促进了细胞G1到S期转化, 沉默mGluR7将人NSCs细胞阻滞在G1/G0期。应用流式细胞术分析过表达mGluR7对人NSCs细胞凋亡的影响, 转染48 h后, 早凋晚凋均显著下降, 沉默mGluR7能够显著诱导人NSCs的早凋和晚凋。结论 mGluR7可促进体外培养的人胚胎皮质NSCs增殖。     

新城疫病毒诱导结肠癌Caco2细胞株发生Caspase和p38MAPK依赖性诱凋亡

目的研究新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)毒株FMW(NDV/FMW)诱导结肠癌Caco2细胞发生凋亡及其机制。方法通过病毒滴度法测定病毒在细胞内复制情况;CCK8法检测细胞存活率;显微镜下观察细胞形态学的变化;Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase3、PARP及MAPK下游信号通路相关p38、JNK、Erk1/2蛋白表达水平。结果NDV/FMW在Caco2细胞内复制,降低2D及3D培养Caco2细胞存活率（P＜0.001）;NDV/FMW诱导Caco2细胞中裂解的Caspase3(cleaved-Caspase3)及PARP裂解片段(cleaved-PARP)增加,泛Caspase抑制剂预处理降低Caspase3及PARP裂解片段表达水平;NDV/FMW感染组Caco2细胞磷酸化p38和磷酸化JNK较对照组增加,磷酸化ERK1/2及总p38、JNK、ERK1/2蛋白水平无显著增加;与NDV/FMW感染组相比较,p38抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平显著减低,但JNK抑制剂预处理组凋亡相关蛋白表达水平没有显著变化。结论NDV/FMW诱导结肠癌Caco2细胞发生Caspase和p38MAPK依赖性细胞凋亡。     

毛蕊异黄酮对肺腺癌SPC-A1细胞增殖和凋亡的影响*

目的 探讨毛蕊异黄酮对肺腺癌SPC-A1细胞增殖与凋亡的影响。方法 将25、50及100?μg/ml毛蕊异黄酮分别作用SPC-A1细胞12、24、36及48?h后,用MTT法检测其对SPC-A1细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258染色观察SPC-A1细胞核变化,流式细胞术检测SPC-A1细胞凋亡情况;不同浓度毛蕊异黄酮作用SPC-A1细胞48?h后,Western blotting及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测SPC-A1细胞Cyclin D1、CDK4、CDK6蛋白及mRNA的表达水平。结果 毛蕊异黄酮能有效抑制SPC-A1细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性（P?<0.05）,100?μg/ml毛蕊异黄酮作用SPC-A1细胞48?h后,细胞增殖抑制率可高达（81.26±0.05）%;毛蕊异黄酮能够诱导SPC-A1细胞凋亡,引起核固缩,形成凋亡小体,细胞凋亡率从（3.12±1.07）%升至（42.78±2.16）% （P?<0.05）;毛蕊异黄酮可以抑制SPC-A1细胞中Cyclin D1、CDK4、CDK6蛋白及mRNA的表达,组间比较差异有统计学意义（P?<0.05）。结论 毛蕊异黄酮可通过降低Cyclin D1、CDK4、CDK6蛋白及mRNA的表达抑制SPC-A1细胞的增殖,毛蕊异黄酮对SPC-A1细胞具有诱导凋亡作用。