Integrinβ1 asODN-inhibition of Cell Attachment and Invasion of the Human Gastric Cancer Cell Line SGC7901

OBJECTIVE To study the inhibition of adhesion and invasion of SGC7901cells into the ECM by integrinβ1 antisense oligodeoxynucleotide asODN.METHODS asODN and control ODN were transfected into SGC7901 cells using liposomes as vectors. The distribution of the ODN was followed by immunochemistry and changes in the expression of integrinβ1 mRNA and protein were determined by RT-PCR and FCM, respectively. The adhesion and invasion into the ECM were measured by the MTT and Boyden chamber methods, respectively.RESULTS Integrinβ1 asODN which was transfected into SGC7901 cells distributed evenly in the cytoplasm and nucleus. PCR and FCM revealed a weakened band at 489bp and a left-shift curve, respectively. Adhesion and invasion assays showed decreased activity with an inhibition rate of 54% and 76%. The extent of decrease induced by integrinβ1 asODN was larger than that caused by random control ODN (P＜0.001).CONCLUSION Transfection of integrinβ1 asODN into SGC7901 cells induced a decrease in the expression of integrinβ1 mRNA and protein,resulting in a decrease in adhesion and invasion into the ECM, with a greater effect than random control ODN.     

反义寡核苷酸聚甲基丙烯酸酯亚微粒入胞行为的研究反义寡核苷酸聚甲基丙烯酸酯亚微粒入胞行为的研究

反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AS-ODN)是一种能与特定的DNA或RNA特异性结合并阻断基因表达的生物效应分子,具有作用强、特异性高等优点,受到广泛关注[1]。然而由于AS-ODN为亲水性大分子,细胞通透性差,使得它的应用受到极大限制。为了增加AS-ODN在体内的稳定性     

联合新型Bcl-2反义核酸与足叶乙苷抑制人小细胞肺癌细胞的增殖

目的　研究一种新型Bcl 2反义寡核苷酸 F95 1在与足叶乙苷 (VP16 )联合使用时 ,对人小细胞肺癌细胞增殖的影响。方法　分别单独及联合应用F95 1、VP16于人小细胞肺癌细胞株NCI H4 4 6 ,通过MTT法检测细胞存活率 ,通过集落形成法检测集落生存率 ,按Welander法计算联合应用组的预测值 ,通过实测值与预测值的比较进行效应分析。结果　细胞存活率 (MTT法 )和集落生存率 (集落形成法 )均显示联合应用F95 1、VP16组的实测值明显低于预测值。结论　联合应用F95 1与VP16对人小细胞肺癌细胞的增殖有协同的抑制作用。     

β1肾上腺素能受体反义寡核苷酸对肾性高血压大鼠血流动力学及心肌肥厚的影响

目的 :观察阳离子脂质体 (DOTAP DOPE)介导的 β1肾上腺素能受体mRNA反义寡核苷酸 (β1 AS ODN)对肾性高血压大鼠血流动力学及心肌肥厚的影响。方法 :建立二肾一夹 (2K1C)肾性高血压大鼠模型 ,随机分为假手术组、模型组、反向寡核苷酸组、反义寡核苷酸组和卡维地洛 (carvedilol)组。ODN与DOTAP DOPE以 1 2摩尔比混合 ,4周末尾静脉注射 0 .5mg·kg-1,卡维地洛 10mg·kg-1·d-1灌胃 4周。定期测血压 ,8周末测血流动力学参数 ,左室重量指数 (LVWI)及血浆内皮素 1(ET 1)浓度 ,并对LVWI与ET 1进行线性相关分析。结果 :与反向寡核苷酸组比 ,β1 AS ODN能降低血压最高达39mmHg并持续 2 7d(30 .4 4± 6 .5 0 ,P <0 .0 1) ,降低左室收缩压 (LVSP) (P <0 .0 5 )、左室舒张末压 (LV EDP) (P <0 .0 1) ,升高左室最大收缩和舒张速率 (±dp dtmax) (P <0 .0 1) ,降低LVWI(P <0 .0 5 )及血浆ET 1(P <0 .0 1) ;与卡维地洛组比 ,各指标均无显著性差异。LVWI与ET 1显著正相关 (r =0 .74 9,P <0 .0 1)。结论 :DOTAP DOPE介导的 β1 AS ODN单剂量静脉注射能持续降压 ,改善血流动力学 ,预防心肌肥厚 ,可能与其降低血浆ET 1有关。     

中期因子基因在疾病诊断和治疗中的应用

中期因子(midkine, MK)是一种肝素结合生长因子.与炎性疾病、肿瘤、神经病变性疾病及AIDS的发生有着重要的关系.MK在多种实体肿瘤中有高表达,可以作为肿瘤的预后指标以及多种疾病治疗的靶点.针对MK的治疗主要是应用MK的抗体、反义寡核苷酸、siRNA和一些能够与MK发生特异结合分子,其作用机制主要是抑制MK生成以及中和MK作用.作为一种肿瘤特异性启动子,MK启动子调控自杀基因也被应用于肿瘤的治疗.     

基于RNA的基因治疗药物研究进展

基于RNA的基因治疗是基因治疗领域的一种重要技术手段,其中多数技术在mRNA水平调控基因表达,特别是在抑制一些有害基因表达或失控基因过度表达方面取得了很大进步。本文就反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等主要的RNA治疗药物的作用机制、应用研究及存在问题进行综述。     

反义磷脂酰肌醇3-激酶寡脱氧核苷酸抑制白介素-1诱导的NF-κB活化

目的　研究反义磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI 3 激酶 )寡脱氧核苷酸 (oligodeoxynucleotides,ODN)对核因子 κB(NF κB)活化的影响。方法　Lipofectin介导反义PI 3 激酶ODN转染HepG2细胞 ,以逆转录PCR法检测PI 3 激酶mRNA表达水平 ,用SandwichELISA法检测NF κB的活化。结果　(1)反义PI 3 激酶ODN抑制PI 3 激酶mRNA表达。 (2 )反义PI 3 激酶ODN呈剂量 (1～ 8μg)和时间 (5～ 2 4h)依赖性地抑制NF κB活化 ,2 μg反义PI 3 激酶ODN与细胞共孵育 8h时抑制效果最好。结论　反义PI 3 激酶ODN通过阻断PI 3 激酶表达抑制NF κB活化 ,预示反义PI 3 激酶ODN可潜在抑制IL 1的炎症活性     

HIF-1α反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的：本研究通过应用 HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）处理 SMMC-7721肝癌细胞,观察其对 SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制。方法肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞施加 HIF-1α的 ASODN 干预,设浓度梯度和时间梯度。检测不同药物浓度、不同时间对 SMMC-7721细胞的增殖的作用及对细胞周期和凋亡率的影响。对 bcl-2、bax、surviving mRNA 表达产物相对定量,并对 SMMC-7721细胞胞浆 bcl-2、bax、survivin 蛋白进行相对定量分析。结果与对照组相比,各处理组 OD 值均有显著下降,细胞数量降低,且各实验组相比呈明显的时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞后,均可使各处理组 G0/ G1期细胞增多,S 期细胞减少,且呈时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2 mRNA 和 survivin mRNA 表达均有显著下降,差异有统计学意义（ P <0.05）。而 bax 的 mRNA无明显变化趋势（ P >0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2和survivin 的蛋白表达显著下降,bax 的蛋白表达显著增加,差异有统计学意义（ P <0.05）。结论 HIF-1α的 ASODN可以将 SMMC-7721肝癌细胞株阻滞于 G0/ G1期,影响细胞周期进程,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。HIF-1α促进增殖抑制凋亡的可能机制是上调肝癌细胞 Survivin 和 bcl-2的表达,下调 bax 的表达。针对 HIF-1α抑制剂的应用为肝癌的治疗提供了新思路。     

微小RNA在白血病中的作用及治疗策略

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类由19～25个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子RNA,其在白血病中扮演着癌基因和抑癌基因的角色,针对miRNA在白血病中的不同作用,可采取相应的治疗策略。对于在白血病中高表达的具有癌基因功能的miRNA,可采用反义寡核苷酸等技术下调或抑制miRNA;而对于在白血病中显著低表达、发挥着抑癌基因作用的miRNA,可采用基因治疗的方法,导入相应的外源miRNA,使其正常表达。因此,miRNA对于白血病的基因治疗或作为白血病治疗的新靶标具有广阔的应用前景。     

转录因子NF-KB对血管成形术后血管狭窄和新生内膜形成的影响

目的探讨核转录因子NF-KB的反义和诱骗性寡核苷酸对大鼠颈动脉球囊损伤后血管增殖反应及相应细胞因子、细胞外信号调节激酶的影响。方法SD大鼠随机分为7组．每组分为6个时相点（6h，1，3，5，7，14d），每个时相点3只大鼠。制作血管球囊损伤模型.相应时间点处死动物，使用病理形态学、逆转录聚合酶链反应、免疫组化、Western blot等方法测定血管病理形态改变、单核细胞趋化因子（Monocytes chemotactic protein-1，MCP-1）的mRNA和蛋白质表达、NF-KB p65和细胞外信号调节激酶（Extra-cellular signal regulated kinase，ERK2）的蛋白质含量。结果 模型组、正义组、Scramble组血管内膜／中膜在d 5增加，14d达到高峰。反义组、诱骗组、反义组＋诱骗组干预后，血管内膜／中膜明显减小（P〈0．05），反义组＋诱骗组较反义组、诱骗组治疗效果不明显。MCP-1 mRNA表达在血管损伤后6h即可检测到，3、5、7d后持续表达增加，14d后表达降低，免疫组化显示MCP-1蛋白质表达在6个时相点均为阳性染色，14d达到高峰；反义组、诱骗组、反义组＋诱骗组治疗后，与模型组、正义组、Scramble组相比，MCP-1 mRNA表达和蛋白合成在各时相点均降低（P〈0．05）．Western blot检测核蛋白抽提物显示核因子NF-KB p65在血管损伤后6h有一定蛋白表达，1d后蛋白表达明显增加，至7d达高峰，14d后蛋白表达略降低。ERK2在血管损伤后1d蛋白表达开始增加，d7达到峰值．14d后与d7相比尤明显差异。反义组、诱骗组、反义组＋诱骗组干预后，各时相点蛋白质表达均较模型组、正义组、Scramble组减弱（P〈0．05）。结论转录因子NF-KB调控MCP-1、ERK2基因表达和蛋白质合成；球囊损伤后血管壁细胞增殖在不同时相点有动态变化；脂质体介导局部转染反义、诱骗性寡核苷酸可抑制NF-KB激活对下游基因的调控，两者联合作用效果较单独应用未表现出更明显的作用。