家蝇热休克蛋白HSP20基因克隆、表达和序列分析

目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析, 并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具, 结合其他生物信息学分析软件包, 从GenBank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因, 分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因, 将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中, 重组质粒在大肠杆菌OrigmiB/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果HSP20基因序列全长865bp, 最大开放阅读框(ORF)为567bp, 编码188个氨基酸, 理论分子量为21443.2 Da, 等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示, 重组质粒在OrigmiB/DE3中表达并纯化, 得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da, 诱导12 h蛋白表达量最高, SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白, 为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。     

湖南某三级甲等综合医院护士人文执业能力现状及影响因素：基于1196例问卷调查

目的了解湖南省某三级甲等综合医院护士人文执业能力现状，分析其影响因素，为进一步进行人文执业能力干预提供依据。方法应用自制一般资料问卷及护士人文执业能力测评量表问卷调查1196名护士人文关怀实践能力、心理调适能力、人际沟通能力、自我管理能力、伦理与法律实践能力5个维度的人文执业能力现状，并采用描述性分析、单因素及多因素分析方法分别探讨影响人文职业能力可能的影响因素。结果1196名护士人文执业能力总分均分为105.69±16.45（量表满分为130分），人文关怀实践能力、心理调适能力、人际沟通能力、自我管理能力、伦理与法律实践能力各维度均分分别为40.95±6.46、16.41±2.66、16.41±2.66、11.32±2.05、12.43±2.00分。单因素分析及多元线性回归分析结果显示，性别（P=0.033）、年龄（P < 0.001）、科室（P=0.015）、工作年限（P < 0.001）、职称（P < 0.001）、第一学历（P < 0.001）、最高学历（P < 0.001）、家庭所在地（P=0.010）、婚姻状况（P=0.023）、照顾患者数量（P=0.022）、子女数（P=0.001）、是否接受人文相关培训（P < 0.001）、培训次数（P < 0.001）、家人（P < 0.001）及同事关心（P < 0.001）均是护士人文执业能力的影响因素，其中年龄、妇产科、急诊科、职称、人文培训、家人关心、同事关心进入回归方程，能解释20.7%的变异。结论湖南省三级甲等综合医院护士人文执业能力处于中等偏上水平，但自我管理能力相对薄弱。护理管理者应针对影响护士人文执业能力的相关因素，制定有效的干预措施，如关注重点人群、重点科室，加强人文执业能力培训，完善晋升考核制度等。     

45例嗜酸性筋膜炎的临床特征、超声诊断及治疗随访的单中心回顾性研究

目的回顾嗜酸性筋膜炎（EF）的临床症状、化验、检查、治疗及预后，并探讨超声在EF中的应用价值。方法回顾2006年1月1日~2022年2月28日在我中心就诊的EF患者的临床资料，并进行统计描述、分析，评估超声及磁共振成像（MRI）结果间的一致性。结果45例EF患者，男女比例3.5:1，发病年龄16~64岁，平均病程22.6个月，从出现症状到确诊的平均时间为16个月。最常见的诱因是剧烈运动诱发，占22%（10/45例）。EF以对称性四肢受累为主，前臂（86.7%）及小腿（80%）最常见。临床表现包括：皮下肿胀/紧硬（95.6%）、关节痛/炎（55.6%）、沟征（42.2%）、手关节屈曲挛缩（42.2%）、色素沉着（37.8%）、橘皮样皮肤病变（13.3%）等。31例（68.9%）患者嗜酸性粒细胞升高，52.3%（23/44例）的患者IgG升高，9例（20%）抗核抗体阳性。21例患者接受了≥200 mg/d（3~5 d）的大剂量激素治疗，与未接受大剂量激素治疗的患者相比，虽未达到统计学差异，但患者入院前曾复发的比例更高、受累部位更广、IgG升高的比例更多，且没有发热。共有31例（68.9%）患者完成了随访，12/31例（38.7%）患者完全缓解，随访的中位时间为3.2年（0.2~15.9年），5.5年时完全缓解的累积发生率为44.1%。未发现与治疗反应相关的特殊基线特征及免疫抑制剂种类。共26例患者同时进行了超声及MRI检查，超声与MRI在确定筋膜增厚/炎症方面一致性很好（Kappa=0.91）。结论EF的临床特征为对称性四肢皮下肿胀、紧硬，伴嗜酸性粒细胞、IgG升高，激素治疗效果好。超声识别皮下筋膜增厚是诊断EF的一个早期最有效的工具。     

灯盏花素对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用及其机制探讨

目的探讨灯盏花素对宫内炎症致早产大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法向孕鼠腹腔内注射脂多糖制备宫内炎症致早产大鼠脑损伤模型，孕鼠和仔鼠分别随机分为对照组、模型组、灯盏花素低剂量（45 mg/kg）组、灯盏花素高剂量（90 mg/kg）组、灯盏花素高剂量（90 mg/kg）+ML385［核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）抑制剂，30 mg/kg］组（n=10）。测定各组孕鼠产出的仔鼠存活数和体重；苏木精-伊红染色法观察各组孕鼠子宫、胎盘病理形态及仔鼠脑组织病理形态；免疫荧光染色法检测各组仔鼠脑皮质离子钙接头蛋白分子-1（ionized calcium-binding adaptor molecule-1，IBA-1）与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）共表达情况；酶联免疫吸附法检测各组仔鼠脑组织中白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-8、IL-1β水平；免疫印迹法检测各组仔鼠脑组织中Nrf2通路相关蛋白表达。结果与对照组相比，模型组孕鼠子宫、胎盘组织及仔鼠脑组织产生病理损伤，仔鼠脑皮质产生严重小胶质细胞焦亡，仔鼠存活数和体重、脑组织中Nrf2及血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）蛋白表达水平降低（P<0.05），仔鼠脑组织中IBA-1和NLRP3共表达相对荧光强度、炎性因子IL-6、IL-8及IL-1β水平、NLPR3及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（caspase-1）蛋白表达均升高（P<0.05）；与模型组相比，灯盏花素低、高剂量组孕鼠子宫、胎盘组织及仔鼠脑组织病理损伤均减轻，仔鼠存活数和体重、Nrf2及HO-1蛋白表达水平均升高（P<0.05），仔鼠脑组织中IBA-1和NLRP3共表达相对荧光强度、炎性因子IL-6、IL-8及IL-1β水平、脑组织中NLPR3及caspase-1蛋白表达均降低（P<0.05）；且灯盏花素高剂量组效果优于灯盏花素低剂量组，差异有统计学意义（P<0.05）；ML385可显著抑制灯盏花素高剂量组的干预效果（P<0.05）。结论灯盏花素可通过激活Nrf2通路而抑制宫内炎症致早产大鼠脑组织炎症反应，抑制小胶质细胞焦亡，减轻早产大鼠脑损伤。     

Antibody Therapies for Progressive Multiple Sclerosis and for Promoting Repair

Progressive multiple sclerosis (PMS) is clinically distinct from relapsing–remitting MS (RRMS). In PMS, clinical disability progression occurs independently of relapse activity. Furthermore, there is increasing evidence that the pathological mechanisms of PMS and RRMS are different. Current therapeutic options for the treatment of PMS remain inadequate, although ocrelizumab, a B-cell-depleting antibody, is now available as the first approved therapeutic option for primary progressive MS. Recent advances in understanding the pathophysiology of PMS provide hope for new innovative therapeutic options: these include antibody therapies with anti-inflammatory, neuroprotective, and/or remyelination-fostering effects. In this review, we summarize the relevant trial data relating to antibody therapy and consider future antibody options for treating PMS.Supplementary InformationThe online version contains supplementary material available at 10.1007/s13311-022-01214-x.     

PY20抗体检测bcr-abl阳性细胞内磷酸化酪氨酸的临床应用

目的探讨酪氨酸磷酸化抗体 PY20检测 bcr-abl 阳件细胞的特异性及其可能的临床应用。方法采用多色直接免疫荧光标记方法,同时标记膜 CD45和胞质 PY20抗体,应用流式细胞术检测 bcr-abl 阳性细胞系(K562、MEG-01)和阴月性细胞系(Jurkat、MCF-7)的酪氨酸磷酸化水平。并利用bcr-abl 蛋白酪氨酸磷酸化特异性阻断剂伊马替尼作用 K562细胞和 MEG4-01细胞,观察 PY20抗体的特异性。检测了49例白血病患者和3名正常人的骨髓细胞,包括慢性粒细胞白血病(CML)、Ph~+急性淋巴细胞白血病(Ph~+ ALL)、Ph~- ALL、急性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病。PY20~+细胞占白血病细胞群的10%以上定义为阳忡。以阳性细胞的平均荧光强度(MFI)表示其酪氨酸磷酸化水平。结果bcr-abl 阳性细胞系、10例初诊 CML 和8例 Ph~+ALL 患者 PY20抗体均为阳性,而 bcr-abl 阴性细胞系、20例 bcr-abl 阴性白血病患者和3名正常人 PY20抗体均为阴性。伊马替尼作用后 K562细胞和MEG-01细胞的酪氨酸磷酸化水平随作用时间的延长逐渐下降。10例初诊和9例伊马替尼治疗有效的 CML 患者 PY20~+细胞占有核细胞的比例分别为(54.20±19.82)%和(14.84±6.17)%(P<0.05),而2例伊马替尼耐药者 PY20~+细胞比例分别为64.3%和57.2%。2例伊马替尼耐药患者和9例伊马替尼治疗有效患者的 CML 细胞的 MFI 分别为99.42±4.87和46.41±4.67(P<0.01)。结论酪氨酸磷酸化抗体 PY20对 bcr-abl 阳性细胞具有相对特异性,有可能应用于 bcr-abl 阳性疾病如 CML 和Ph~+ALL 的早期快速辅助诊断,同时有可能作为判断该类疾病对伊马替尼敏感性的一个辅助指标。     

反复注射甘露醇致兔耳静脉组织炎的病理变化

目的探讨不同穿刺方法反复静脉注射甘露醇引起兔耳静脉及周围组织炎症的病理变化。方法12只新西兰兔按左右耳静脉随机分为单次穿刺组(A组)和留置套管针组(B组),每组12例,经耳静脉反复注射等量20%甘露醇,观察静脉炎发生率和耳静脉及周围组织的常规染色病理变化。结果两组兔耳静脉均发生程度不同的血管内聚集红细胞和周围组织炎性浸润,静脉炎严重程度与病理变化一致。两组静脉炎发生率具有显著性差异(P<0.05),B组大于A组。结论留置套管针组静脉炎发生率要高于单次静脉穿刺组,静脉炎表现程度与病理变化相吻合。     

无托槽隐形矫治患者与固定矫治患者龈沟液中白细胞介素变化的对比研究

目的对比无托槽隐形矫治患者与固定矫治患者治疗后龈沟液中白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-16和IL-18的表达水平差异。方法选取接受无托槽隐形矫治的67例患者作为观察组，接受固定矫治的40例患者作为对照组，分别检测患者接受矫治前与接受矫治后24 h、12个月龈沟液中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-16和IL-18的表达水平。结果接受正畸治疗前2组龈沟液中各IL的表达水平差异无统计学意义（P>0.05）；正畸治疗24 h后2组龈沟液中的IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-18表达水平均升高，但2组间所有IL因子表达水平差异无统计学意义（P>0.05）；正畸治疗12个月后观察组龈沟液中的IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和IL-18表达水平低于对照组（P<0.05），IL-16表达水平2组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论与固定矫治相比，无托槽隐形矫治患者的口腔炎症反应较弱，更有利于口腔微环境的恢复。     

不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层多孔支架的影响

目的探讨不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层(decellularized small intestinal submucosa, SIS)多孔支架理化性能及生物相容性的影响。方法(1) 将新鲜SIS塑形为三维多孔支架并采用戊二醛(glutaraldehyde, GA)、碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide, EDC]和原花青素(procyanidine, PA)3种交联剂进行交联, 获得3组交联后支架, 分别为GA组、EDC组和PA组。(2)理化性能评价: 对3组多孔支架进行宏观形貌观察, 使用场发射环境扫描电镜进行微观形貌观察并测定孔径及孔隙率, 使用茚三酮法测定交联度, 使用酶促降解法评价抗降解性能, 使用万能力学测试机测定应力应变曲线及压缩强度。(3)生物相容性评价: 使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测交联处理对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)增殖的影响, 使用Calcein-AM/PI活死细胞染色法评价交联处理后支架的细胞毒性。结果宏观形貌观察可见交联修饰未破坏支架三维结构; 微观形貌观察可见各组多孔支架具有大小均匀、相互连通的孔隙结构。EDC组孔径最大, 与另两组差异具有统计学意义(P < 0.05);PA组孔隙率最低, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。PA组交联度最高而溶胀率最低, EDC组溶胀率最高。EDC组和GA组的体外降解速率均高于PA组, 其中GA组降解速度最快, PA组抗降解能力最佳, 降解至第15天时3组质量丧失率间的差异有统计学意义(P < 0.05)。EDC组和GA组压缩强度近似, PA组压缩强度最高, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。GA组支架的细胞毒性最大, hBMSCs在EDC组和PA组支架上具有更好的增殖能力, 在GA组增殖较慢。结论3种交联剂处理均可达到较高的交联度, 经EDC和PA交联处理的SIS多孔支架在拥有较好理化性能的同时具有良好的生物相容性, 相比于GA是更有应用前景的交联处理方法。