HIV抗体ELISA阳性标本蛋白印迹确证试验的研究

用获ＦＤＡ准许的美国ＣａｍｂｒｉｄｇｅＢｉｏｔｅｃｈ公司ＨＩＶ－１蛋白印迹剂盒（ＷＢ）对ＨＩＶ－１／２抗体诊断试剂盒（ＥＬＩＳＡ）初筛阳性的６２份血清标本做确证试验。一次性确证ＨＩＶ抗体阳性者８名；阴性者１２名；不确定者４２名，对８名ＨＩＶ抗体不确定者做追访采样监测，其中１人１２天后ＷＢ血清ＨＩＶ抗体由不确定性转为阳性，另７人在６～１５个月经２～３次采样检测，ＷＢ区带反应无变化或略有变化，本研究证     

PMN对链球菌组蛋白样蛋白释放的影响

为观察人多形核白细胞 (PMN)对链球菌组蛋白样蛋白 (HlpA)释放的影响 ,将PMN与链球菌以一定比例共同作用后取上清液做免疫印迹试验。发现与抗HlpA抗体特异性结合的蛋白条带。提示PMN作用于链球菌后 ,HlpA能自菌体内释放出来     

大鼠左室肥厚到心衰转变过程中心室肾上腺髓质素系统的变化

在很多病理情况下,如高血压、肺动脉高压、心肌梗死、充血性心力衰竭(CHF)时,血浆肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)水平升高,在心衰中AM水平升高与心衰程度密切相关。研究发现,在高血压模型中压力负荷、容量负荷过重及心肌梗死时可促进心脏AM基因表达;缓慢提高AM水平,参与一系列病理生理变化,以改善心脏     

眼结膜印迹细胞法在维生素A缺乏早期筛查中评价标准的探讨

目的 探讨眼结膜印迹细胞法(CIC)在儿童维生素A缺乏(VAD)早期筛查中的评价标准.方法 采用CIC法对3～7岁学龄前儿童进行维生素A营养状况评价,研究结膜印迹细胞形态学改变及相应的血清维生素A水平,以确定评价标准.结果 CIC法0～1级可见杯状细胞和正常的上皮细胞,2级只见正常上皮细胞而未见杯状细胞,3～5级仅见异常上皮细胞.随着结膜印迹细胞异常程度的增加,血清维生素A水平相应降低,二者呈负相关(r=-0.824,P＜0.05),其中结膜印迹细胞0～1级组和2级组的血清维生素A均值＞300μg/L(P＜0.05).结论 CIC法评价机体维生素A营养状况采用包括正常水平、临界水平和异常水平的三级标准法比较合适.     

免疫印迹技术检测天疱疮患者血清结合的天疱疮抗原

随着分子生物学技术的发展,应用免疫沉淀技术已测出表皮角朊细胞膜上寻常性天疱疮(PV)抗原和落叶性天疱疮(PF)抗原的结构[1,2],应用免疫印迹(Westernblotting)则已进一步测出PV抗原的分子量为130000,PF抗原为160000[3～5]。近年来国外学者已成功地应用免疫印迹对天疱疮进行诊断和鉴别诊断[5]。我们应用免疫印迹,以正常表皮提取物为抗原,检查18例天疱疮患者血清。一、材料和方法(一)血清:18例患者的血清,均来自1994～1996年在我科就诊的天疱疮患者,其中4例PV、4例疱疹样天疱疮(PH)、1例PF和9例红斑性天疱疮(PE)。所有患者皮损周围皮肤…     

与Graves眼病有关的眼肌自身抗原抗体的分子免疫学研究

为探讨Ｇｒａｖｅｓ眼病（ＧＯ）的发病机理，我们对新近发现的眼肌自身抗原及存在于ＧＯ患者血清的眼肌抗体进行了研究。血清取自１８例正常人、１８例活动性ＧＯ、１０例无限征的Ｇｒａｖｅｓ甲亢（ＧＨ）和３例桥本甲状腺炎（ＨＴ）患者。人眼肌膜蛋白经ＧＯ患者混合ＩｇＧ亲和层析后进行ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，显示分子量为４５、２８、５５和６４ｋＤ等蛋白条带。经正常人混合ＩｇＧ亲和层析未能显示上述结果。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交虽然未能证实仅与患者血清作用的独特的眼肌抗原的存在，但６４ｋＤ印迹存在于６１％的ＧＯ、３０％的ＧＨ、０％的ＨＴ患者，正常人仅２２％阳性。抗６４ｋＤ阳性率ＧＯ组明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。眼肌抗体（ＥＭＡｂ）特别是抗６４ｋＤ抗体对于ＧＯ发病机理的作用值得进一步研究。     

免疫印迹技术在大疱性皮肤病研究中的应用

简要介绍免疫印迹技术的基本原理和特性，应用此项技术研究大疱性皮肤病抗原所获得的成果以及在大疱性皮肤病诊断中的价值。     

大鼠急性肺血栓栓塞后血中DBP、RBP和TTR表达降低

目的探讨急性肺血栓栓塞时维生素D结合蛋白(DBP)、维生素A结合蛋白(RBP)和甲状腺素转运蛋白(TTR)的表达变化及对代谢的影响。方法用颈静脉插管注入血栓的方法制备大鼠急性肺栓塞模型。用Western blot检测DBP、RBP和TTR蛋白水平,RT-PCR法检测肝组织中DBP、RBP和TTR的mRNA水平,放射免疫法测定FT4和25(OH)D3的血清浓度,微量荧光法测定维生素A的血清浓度。结果急性肺栓塞后血清中DBP、RBP和TTR的蛋白水平,肝组织中DBP、RBP和TTR的mRNA水平均逐渐降低;而血清中这3个结合蛋白的配体FT4、25(OH)D3和维生素A的水平明显升高。结论急性肺栓塞后血清中DBP、RBP和TTR的蛋白水平降低是由于肝细胞合成减少所致,从而释放出更多的配体。升高的25(OH)D3、维生素A和FT4分子在急性肺栓塞后的一系列病理生理变化中将发挥重要作用。     

大鼠实验性脾气虚胃溃疡证病结合模型回肠5-HT及其受体和IL-2、IL-6变化的研究

目的 研究大鼠脾气虚胃溃疡证病结合模型中回肠5-羟色胺 (5-HT)及其受体(5-HTR)、细胞因子IL-2、IL-6的变化,探讨脾虚胃溃疡的发病机制及加味四君子汤治疗脾虚证的机理.方法 采用免疫组织化学技术、图像分析、放射免疫和免疫印迹法.结果 大鼠脾气虚合并胃溃疡模型中5-HT阳性细胞主要分布于回肠黏膜上皮及肠腺细胞;5-HTR免疫反应阳性的细胞主要位于肠绒毛及腺体间结缔组织,在肠壁平滑肌、肌间神经丛也有表达;5-HT及其受体免疫反应阳性产物的含量均增加,免疫印迹法示回肠5-HTR含量增加,且随病程进展,而进一步升高;经过加味四君子汤治疗后,上述异常变化得到纠正.在造模初期,IL-2、IL-6的分泌活性增加,随着脾虚胃溃疡发病的进一步发展,IL-2、IL-6的分泌活性降低.结论 大鼠脾气虚胃溃疡模型中回肠组织5-HT及其受体含量的增高,是大鼠脾虚胃溃疡发病的机理之一,加味四君子汤能通过纠正这些变化而发挥治疗作用.IL-2、 IL-6分泌活性的改变可能与大鼠脾虚胃溃疡的病程发展相关.     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠脑皮质中热休克蛋白70、微管相关蛋白轻链3蛋白表达和神经元超微结构的影响

目的应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测热休克蛋白70(HSP70)和微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白的表达,观察其对神经元超微结构的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,随机分成5组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR),Cys C低浓度组(Cys C1)、Cys C中浓度组(Cys C2)、Cys C高浓度组(Cys C3),每组12只。采用线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后进行改良神经功能损伤严重程度评分(m NSS)。Western blotting半定量检测损伤中心脑皮质组织中HSP70、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达;免疫组织化学法检测HSP70、LC3的阳性细胞个数;免疫荧光双标记法检测皮质神经元自噬相关蛋白LC3和神经元核抗原(Neu N)共染的阳性细胞平均吸光度值;透射电子显微镜下观察神经元超微结构的变化。结果与IR组相比,Cys C1、Cys C2组m NSS评分明显减少(P0. 05),HSP70的表达较IR组明显升高(P0. 01);而Cys C3组m NSS评分升高,与IR组差别无显著性(P0. 05); Cys C3组HSP70的表达明显降低(P0. 01); Cys C各浓度组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达有不同程度的升高(P0. 01); LC3和Neu N共染阳性细胞平均吸光度逐渐增强(P0. 05);透射电子显微镜结果显示,Cys C1、Cys C2组神经细胞的超微结构有所改善,而Cys C3组脑皮质神经细胞损伤较重。结论 Cys C可能在一定浓度范围内对缺血再灌注损伤神经细胞有保护作用。浓度过高则导致神经细胞自噬性死亡。