大鼠左室肥厚到心衰转变过程中心室肾上腺髓质素系统的变化

在很多病理情况下,如高血压、肺动脉高压、心肌梗死、充血性心力衰竭(CHF)时,血浆肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)水平升高,在心衰中AM水平升高与心衰程度密切相关。研究发现,在高血压模型中压力负荷、容量负荷过重及心肌梗死时可促进心脏AM基因表达;缓慢提高AM水平,参与一系列病理生理变化,以改善心脏     

免疫印迹技术检测天疱疮患者血清结合的天疱疮抗原

随着分子生物学技术的发展,应用免疫沉淀技术已测出表皮角朊细胞膜上寻常性天疱疮(PV)抗原和落叶性天疱疮(PF)抗原的结构[1,2],应用免疫印迹(Westernblotting)则已进一步测出PV抗原的分子量为130000,PF抗原为160000[3～5]。近年来国外学者已成功地应用免疫印迹对天疱疮进行诊断和鉴别诊断[5]。我们应用免疫印迹,以正常表皮提取物为抗原,检查18例天疱疮患者血清。一、材料和方法(一)血清:18例患者的血清,均来自1994～1996年在我科就诊的天疱疮患者,其中4例PV、4例疱疹样天疱疮(PH)、1例PF和9例红斑性天疱疮(PE)。所有患者皮损周围皮肤…     

与Graves眼病有关的眼肌自身抗原抗体的分子免疫学研究

为探讨Ｇｒａｖｅｓ眼病（ＧＯ）的发病机理，我们对新近发现的眼肌自身抗原及存在于ＧＯ患者血清的眼肌抗体进行了研究。血清取自１８例正常人、１８例活动性ＧＯ、１０例无限征的Ｇｒａｖｅｓ甲亢（ＧＨ）和３例桥本甲状腺炎（ＨＴ）患者。人眼肌膜蛋白经ＧＯ患者混合ＩｇＧ亲和层析后进行ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，显示分子量为４５、２８、５５和６４ｋＤ等蛋白条带。经正常人混合ＩｇＧ亲和层析未能显示上述结果。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交虽然未能证实仅与患者血清作用的独特的眼肌抗原的存在，但６４ｋＤ印迹存在于６１％的ＧＯ、３０％的ＧＨ、０％的ＨＴ患者，正常人仅２２％阳性。抗６４ｋＤ阳性率ＧＯ组明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。眼肌抗体（ＥＭＡｂ）特别是抗６４ｋＤ抗体对于ＧＯ发病机理的作用值得进一步研究。     

免疫印迹技术在大疱性皮肤病研究中的应用

简要介绍免疫印迹技术的基本原理和特性，应用此项技术研究大疱性皮肤病抗原所获得的成果以及在大疱性皮肤病诊断中的价值。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠脑皮质中热休克蛋白70、微管相关蛋白轻链3蛋白表达和神经元超微结构的影响

目的应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测热休克蛋白70(HSP70)和微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白的表达,观察其对神经元超微结构的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,随机分成5组:假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR),Cys C低浓度组(Cys C1)、Cys C中浓度组(Cys C2)、Cys C高浓度组(Cys C3),每组12只。采用线栓法制备脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后进行改良神经功能损伤严重程度评分(m NSS)。Western blotting半定量检测损伤中心脑皮质组织中HSP70、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达;免疫组织化学法检测HSP70、LC3的阳性细胞个数;免疫荧光双标记法检测皮质神经元自噬相关蛋白LC3和神经元核抗原(Neu N)共染的阳性细胞平均吸光度值;透射电子显微镜下观察神经元超微结构的变化。结果与IR组相比,Cys C1、Cys C2组m NSS评分明显减少(P0. 05),HSP70的表达较IR组明显升高(P0. 01);而Cys C3组m NSS评分升高,与IR组差别无显著性(P0. 05); Cys C3组HSP70的表达明显降低(P0. 01); Cys C各浓度组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达有不同程度的升高(P0. 01); LC3和Neu N共染阳性细胞平均吸光度逐渐增强(P0. 05);透射电子显微镜结果显示,Cys C1、Cys C2组神经细胞的超微结构有所改善,而Cys C3组脑皮质神经细胞损伤较重。结论 Cys C可能在一定浓度范围内对缺血再灌注损伤神经细胞有保护作用。浓度过高则导致神经细胞自噬性死亡。     

腺病毒六邻体蛋白部分基因的构建表达及表达产物抗原性研究

腺病毒是人类呼吸道、胃肠道、眼部等部位许多疾患的重要病原之一〔1〕,引起人的急性呼吸系统疾病、流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等。在儿童急性感染疾病中 ,2 %～ 7%是由腺病毒引起的 ,有时可造成一定范围的流行。由于腺病毒型别较多 ,给实验室诊断带来一定困难。在临床进行腺病毒感染的快速诊断时常需要获得特异性强的高效价病毒抗体。而传统的纯化病毒方法制备腺病毒抗体费时、费力 ,且往往难以得到特异性较高的抗体。本研究通过计算机比较腺病毒六邻体氨基酸序列 ,结合三维结构图提示的多肽暴露情况以及抗原性预测分析 ,选择性地表达…     

APAAP免疫印迹技术对抗副流感病毒1，3型单克隆抗体识别抗原表位的研究

副流感病毒１，３型（ＰａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１，３：ＰＩＶ＿１．３）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）应用免疫印迹技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ）识别抗原表位特性。结果表明：ＰＩＶ＿１．３抗原经还原剂处理后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ５％～１５％梯度胶电泳，能分辨二十多条清晰的蛋白带。转印后采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶复合物（ＡＰＡＡＰ）染色，本底浅，呈玫瑰红色带，优于ＨＲＰ染色结果。ＰＩＶ＿１的５株ＭｃＡｂ：ＩＣ＿５、ＩＨ＿６、ＩＨ＿２、ＩＣ＿１０、３Ｄ＿５分别与６８ｋＤ～５０ｋＤ、６８ｋＤ、５８ｋＤ～２７ｋＤ、５５ｋＤ～５０ｋＤ、５０ｋＤ对应ＰＩＶ＿１的蛋白质抗原表位起反应。ＰＩＶ＿３的６株ＭｃＡｂ：２Ａ＿１０、５Ｇ＿３、２Ｄ＿１１、２Ｅ＿１０、２Ｂ＿１２、４Ｆ＿１２与７０ｋＤ、６８ｋＤ、６０ｋＤ～５０ｋＤ、５５ｋｐ～４０ｋＤ、５５ｋＤ、４０ｋＤ对应的蛋白质抗原表位特异结合，说明ＰＩＶ＿１．３的１１株ＭｃＡｂ同对应抗原表位点的结合分布较广，有利于对ＰＩＶ＿１．３抗原的快速、敏感、特异检测。     

超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素基因B的原核表达

目的构建重组pET-30a-SEB原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL-21(DE3),诱导表达超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB,SEB)。方法利用PCR技术从产SEB的金黄色葡萄球菌标准菌株CMCC-26075基因组DNA中克隆SEB全长序列,将其克隆到pGEM-TEasy载体中并进行测序。构建pET-30a-SEB原核表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代β-D半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,经镍离子螯合亲和层析纯化后免疫鉴定。结果PCR获得超抗原SEB基因片段,与克隆载体连接后经测序与文献报道的基本一致;成功构建了pET-30a-SEB原核表达质粒且成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约31×103的蛋白。结论成功克隆了seb基因序列,并进行了原核表达和鉴定,获得了SEB蛋白,为后续对超抗原SEB的进一步研究奠定了基础。     

自身抗原Ro52kd多肽分子cDNA表达克隆的构建及其融合蛋白在大 …

采用ＰＣＲ法克隆自身抗原Ｒｏ５２ｋｄ多肽分子的ＣＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－１，并导入大肠杆菌中组融合蛋白，经免疫印迹法表明，重组融合蛋白具有Ｒｏ５２ｋｄ的抗原性，这为今后对Ｒｏ５２ｋｄ抗原表位的精确定位地分析特定抗原表位与疾病的相关性及制备重组抗原用于临床检测奠定了基础。     

不同反应靶细胞中IL—6对STATl激活的比较

探讨不同反应靶细胞中白细胞介素6(IL—6)对信号转导子与转录激活子1(STATl)的激活。方法：利用抗STATl和抗酪氨酸磷酸化STATl的抗体，进行免疫印迹分析。结果：IL—6可促进7TDl和TFl细胞生长，但在这两种细胞中对STATl的酪氨酸磷酸化水平没有明显影响。M1、R2和U937细胞在IL—6诱导下生长停止并向巨噬细胞方向分化，而IL—6在这3种细胞中均可激活STATl，且激活效应有剂量与时间依赖性。结论：STATl的活化可能与抑制效应有关。我们的数据有助于解释为什么IL—6在不同效应靶细胞中有不同的生物学效应。