结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术诊断艾滋病患者肺结核的临床应用评价

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)技术诊断艾滋病患者肺结核的应用价值。方法:回顾性分析2017年7月至2019年11月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心收治的226例疑似肺结核的艾滋病患者的临床资料。分别进行痰涂片荧光染色显微镜下检查、BACTEC MGIT 960液体培养(或罗氏固体培养)和Xpert MTB/RIF检测,并分析在艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断MTB感染和利福平耐药的灵敏度和特异度。结果:226例疑似肺结核患者中,痰培养阳性94例(41.6%),其中MTB阳性51例(54.3%),非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria,NTM)阳性43例(45.7%)。以痰分枝杆菌培养阳性且结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原阳性为金标准,Xpert MTB/RIF技术诊断MTB的灵敏度为72.6%[95%可信区间(confidence interval,CI)66.7%~78.4%],特异度为97.1%(95%CI 95.0%~99.3%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阳性患者MTB的灵敏度为76.7%(95%CI 67.7%~85.8%),特异度为90.0%(95%CI 83.6%~96.5%)。Xpert MTB/RIF技术诊断痰涂片阴性患者MTB的灵敏度为50.0%(95%CI 41.8%~58.2%),特异度为99.3%(95%CI 97.9%~100.0%)。18例患者同时检测利福平表型和基因型耐药,以表型耐药为金标准,Xpert MTB/RIF技术检测利福平基因型耐药的灵敏度为75.0%,特异度为100.0%。结论:艾滋病患者中Xpert MTB/RIF技术诊断肺结核的灵敏度和特异度均较高,且能快速区分MTB和NTM,具有较好的应用价值。     

耐多药结核病快速诊断试剂盒检测耐药结核分枝杆菌的评价

目的 评价用耐多药结核病快速诊断(GenoType MTBDRplus)试剂盒检测耐利福平、异炳肼MTB的效果.方法 选取75株MTB临床分离株,采用耐多药结核病快速诊断试剂盒检测其中的耐药MTB,评价其敏感度和特异度及可重复性,并与常规的药物敏感性试验方法相比较.结果 耐多药结核病快速诊断试剂盒对上海地区的MTB临床分离株中耐利福平和耐异烟肼菌株的敏感度分别为98.0%和86.5%,对敏感菌株的特异度为100%.而在重复性试验中,耐多药结核病快速诊断试剂盒多次结果完全一致,重复性达到100%.结论 耐多药结核病快速诊断作为快速检测耐药MTB的试剂盒,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的敏感度和特异度,在上海地区有较好的应用前景.     

Rapid Detection of rpoB Gene Mutations in Rif-resistant M. tuberculosis Isolates by Oligonucleotide Microarray

Objective To detect the specific mutations in rpoB gene of Mycobacterium tuberculosis by oligonucleotide microarray. Methods Four wild-type and 8 mutant probes were used to detect rifampin resistant strains. Target DNA of M. tuberculosis was amplified by PCR, hybridized and scanned. Direct sequencing was performed to verify the results of oligonucleotide microarray Results Of the 102 rifampin-resistant strains 98 （96.1%） had mutations in the rpoB genes. Conclusion Oligonucleotide microarray with mutation-specific probes is a reliable and useful tool for the rapid and accurate diagnosis of rifampin resistance in M. tuberculosis isolates.     

复方两性霉素B眼用凝胶在兔眼的药代动力学

目的 观察兔眼局部应用复方两性霉素B眼用凝胶的眼内通透性和药代动力学特征.方法 将30只新西兰大白兔分为10组,每组3只（6只眼）,分别于30只兔双眼点复方两性霉素B眼用凝胶50μl后,5、15、30、45、60、90、120、180、240和360 min时取泪液,并迅速处死后取角膜和房水,测定两性霉素B和利福平的含量,计算药代动力学参数.结果 利福平有良好的眼内通透性,但房水中检测不到两性霉素B;两性霉素B和利福平在兔角膜中的达峰时间为20.96和7.57 min、达峰浓度为3.32和25.37μg/g、消除半衰期为45.34和31.69 min、浓度-时间曲线下面积为299.44和1368.91（min·mg）/g.结论 复方两性霉素B眼用凝胶可用于治疗外眼真菌感染性疾病,但其能否用于内眼真菌感染,仍需进一步研究.     

依赖利福平的肺结核112例临床分析

目的探讨依赖利福平分枝杆菌肺结核的临床特点。方法对门诊涂阳患者的痰培养及药敏筛选出一组依赖利福平分枝杆菌肺结核病112例,结合临床加以分析。结果112例患者多为青壮年,均发生于继发型肺结核,兼症多,合并糖尿病、慢性乙肝、慢性肺心病、银屑病、尘肺等,影像学表现为病灶范围较广,多为双肺,常伴有空洞和支气管狭窄;症状较重,体征明显,病程时间长;在药敏结果出来之前,含利福平的化疗过程中效果不佳,甚至于恶化。结论早期、规律、全程、联合、适量,再加合理的化疗方案,才能有效地预防、控制和治疗依赖利福平分枝杆菌的肺结核。     

Potential interactions between irinotecan and rifampin in a patient with small-cell lung cancer

This report describes a patient with small-cell lung cancer who was infected with both Mycobacterium tuberculosis and non-tuberculous mycobacterium. He received irinotecan plus cisplatin, with and without rifampin. Rifampin slightly reduced the conversion of irinotecan to 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin (SN-38), as determined by pharmacokinetic analysis. Rifampin may influence the metabolism and toxicity of irinotecan to some extent. However, there are possibilities to control M. tuberculosis and Mycobacterium avium complex infections in patients with small-cell lung cancer by using rifampin in combination with irinotecan plus cisplatin.     

结核分支杆菌rpoB基因突变和耐利福平的相关性研究

研究结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因突变及其与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。用ＰＣＲ—ＳＳＣＰ分析结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因。结果显示ＰＣＲ扩增ｒｐｏＢ基因为属特异性。８１株结核分支杆菌的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ图谱与Ｈ３７Ｒｖ为对照,３５株敏感菌仅有一株位置有区别;４６株耐药菌有４２株有明显区别;检测阳性率为９１．３％;特异性９７．１％。证明ｒｐｏＢ基因突变是结核分支杆菌耐利福平的主要机理,ＰＣＲ—ＳＳＣＰ可简便快速地检出ｒｐｏＢ基因的突变,有助于结核分支杆菌耐药性的快速检测和研究。     

显色法芯片检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因

目的建立显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因的方法。方法设计4对地高辛标记引物,扩增结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA和ahpC 4个基因部分片段,根据结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)4条耐药相关基因上8个位点的25种单核苷酸多态性设计探针制作芯片,扩增产物与芯片杂交,显色法判断结果;用该法检测46株结核分枝杆菌临床分离株。结果扩增产物琼脂糖电泳可见4条大小分别为165、181、245、315 bp DNA条带;结核分枝杆菌菌液浓度为1．6×103／ml时,该法仍可检测到各位点野生及突变信号;19种非结核分枝杆菌标准株和9种非分枝杆菌标准株扩增产物无DNA条带,与芯片杂交亦无信号,H37Rv结核分枝杆菌标准株芯片检测各位点均为野生型;5株结核分枝杆菌临床分离株重复检测5次,结果完全一致;6份PCR产物的测序结果与芯片检测结果完全一致;46株结核分枝杆菌临床分离株中,RFP耐药株28株,芯片检出突变株24株,突变率为85．7％,RFP敏感株18株,芯片检出突变株2株。INH耐药株31株,芯片检出突变株20株,突变率为64．5％,INH敏感株15株,芯片检出突变株4株。结论显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因具有较高的敏感性和特异性,无需特殊仪器设备,有一定的推广应用价值。     

利福平抑制α-synuclein的聚集及对MPP＋诱导细胞损伤的拮抗作用

目的： 探讨利福平对帕金森病致病蛋白α-突触共核蛋白（α-synuclein）聚集的影响，以及对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的细胞损伤的拮抗作用。 方法： 选用大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞，利用MPP+诱导建立帕金森病细胞模型，利福平进行干预；采用MTT法检测细胞活性、Western blotting法检测α-synuclein表达及聚集，流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果： 1 mmol/L MPP+组细胞活性明显低于对照组，细胞凋亡率和α-synuclein表达及聚集高于对照组；预先经过100、200和300 μmol/L各浓度利福平处理后，MPP++利福平组细胞活性明显高于1 mmol/L MPP+组，而细胞凋亡率和α-synuclein表达及聚集均低于1 mmol/L MPP+组，并具有明显的剂量-效应关系。 结论： 利福平能够抑制α-synuclein的表达及聚集，并对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有拮抗作用。