Molecular characteristics of rifampin and isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Beijing, China

Background China is one of the high burden countries of Mycobacterium tuberculosis （TB） infection globally, with high incidence and mortality. We studied the molecular characteristics of rifampin （RIF） and isoniazid （INH） resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Beijing, China, in order to find out the genetic marker for rapid detection of specific drug resistance. Methods Forty pansusceptible and 81 resistant strains of Mycobacterium tuberculosis isolated from Beijing, China during 2002-2005 were analyzed. The modified rifampin oligonucleotide （RIFO） assay based on reverse line blot hybridization was used to detect mutations in the 81 bp hot-spot region of rpoB gene, which is associated with RIF resistance. The INH resistance associated genes, regulatory region mab-inhA （-15C/T） and structural gene katG S315T were detected by reverse line blot hybridization and PCR-restriction fragment length polymorphism （RFLP） method respectively. All the strains were typed by spoligotying and the Beijing genotype was further subdivided by NTF locus analysis. The distribution of drug resistance associated mutations in the above genes was compared in these groups. Results Sixty-five （91.5%） of 71 RIF resistant and 52 （92.9%） of 56 multidrug-resistant （MDR, i.e. resistant to at least RIF and INH） strains were found to harbor mutations in the rpoB hot-spot region. No mutation was detected in RIF sensitive strains. The specificity and sensitivity of the modified RIFO assay were 100% and 91.5%, respectively, katG315 AGC〉ACC and inhA-15C〉T mutations were found in 40 （60.6%） and 10 （15.2%） of 66 INH resistant strains, respectively; 7.6% of INH-resistant strains had mutations in both of these genes. Therefore, a combined use of both katG315 and inhA-15 identified 68.2% of INH-resistant strains. The Beijing genotype accounted for 91.7% of total strains and was further subdivided into ＂modern＂ （76.6%） and ＂ancestral＂ （23.4%） group. There is no significant difference between ＂ancestral＂ and ＂modern＂ group in prevalance of drug resistance-associated gene mutations. Conclusions The hot-spot region of rpoB gene can be used as genetic marker for detection of RIF resistant strains; a combined use of both katG315 and inhA-15 can improve the detection rate of I NH resistant strains; the Beijing genotype is prevalent in Beijing, China; the modified RIFO assay can be a practical tool for rapid detection of RIF resistant and MDR isolates in the routine diagnostic work.     

胸壁结核92例外科治疗体会

目的：总结胸壁结核的外科治疗方法。方法：对92例手术患者的临床资料进行回顾性分析。结果：切口甲级愈合77例,局部渗出15例,经换药及四联抗结核治疗,12例痊愈,3例有窦道形成,其中2例再次手术治愈,1例第3次手术治愈。随访0.5-15年,2例局部复发。结论：围手术期规范的抗结核治疗,广泛彻底病灶清除,消除残腔,充分引流...     

优质护理服务模式对初治肺结核患者的影响

目的探讨优质护理服务模式指导下护理干预措施对初治肺结核患者的影响。方法本次研究选择的对象共132例．均为2012年1月-2013年1月我院初治肺结核患者,分为干预组和对照组各66例,对照组予内科常规护理,干预组在常规护理的基础上采用优质护理服务模式,实施系统的、精心的护理干预。统计比较两组患者的临床有效率、住院时间及患者满意度;采用焦虑自评量表（SAS）和抑郁自评量表（SDS）评定两组护理前与护理后6个月的心理变化;应用生存质量测评表（QOL—UCC）评价两组患者护理干预前与干预6个月后的生活质量。结果干预组患者临床有效率、住院时间及患者满意度均明显优于对照组（P均〈0．05）;护理干预6个月后,干预组的SAS及SDS评分均明显低于对照组（P均〈0．01）;干预组QOL—UCC评分明显低于对照组（P〈0．05）。结论对初治肺结核患者实施优质护理服务模式,给予系统的、精心的护理干预,可显著提高患者临床治疗的有效率,提升满意度,降低其负性情绪,缩短住院时间,促进患者生活质量的提高,利于病情的控制及康复,值得临床进一步推广使用。     

重组结核分枝杆菌CFP10的克隆与表达

目的:克隆和表达结核分枝杆菌CFP10,并分析其免疫学活性。方法:自结核分枝杆菌标准株H37Rv提取基因组DNA,PCR扩增cfp10基因,克隆至T载体pMD18T,转化入大肠杆菌JM109,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析。将测序正确的pMD18-cfp10的cfp10基因亚克隆至表达载体PQE30,构建重组质粒PQE30-cfp10,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,PCR和双酶切鉴定阳性重组体,IPTG诱导CFP10表达,亲和层析纯化,western-blot分析其免疫活性。结果:成功构建PQE30-cfp10重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约10kDa的CFP10,并能被结核病人血清识别。结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌CFP10。     

1040株人型结核分枝杆菌耐药性分析

目的分析研究汕头市第三人民医院2012~2013年肺结核患者结核分枝杆菌耐药性。方法对汕头市第三人民医院2012~2013年收集的结核分枝杆菌用WHO推荐的比例法进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)、左氧氟沙星(Lfx)、丙硫异烟胺(Pto)、卷曲霉素(Cm)、丁胺卡那(Am)、对氨基水杨酸(PAS)和卡那霉素(Km)的耐药性检测。结果2012年458株结核分枝杆菌中有135株耐药,总耐药率为29.5%(135/458);耐多药(MDR)率为14.4%(66/458)。耐单药顺位从高到低依次为H、S、R、E、Lfx、Pto、Cm、Am、PAS和Km。2013年582株结核分枝杆菌中有198株耐药,总耐药率为34.0%(198/582);耐多药(MDR)率为16.1%(94/582)。耐单药顺位从高到低依次为S、H、R、E、Lfx、Km、Cm、Am、PAS和Pto。结论结核分枝杆菌的耐药率仍然较高,临床应加强监测,指导防控工作和临床合理用药。     

佛山市顺德区2008~2013年儿童青少年肺结核疫情分析

目的 分析2008～2013年间顺德区0～24岁儿童青少年肺结核报告发病特征,探讨该人群结核病流行情况,为制定有效的防控措施提供科学依据.方法 采用描述性流行病学方法对2008～2013年顺德区结核病管理信息系统报告的0～24岁儿童青少年肺结核患者患病情况进行分析.结果 2008～ 2013年顺德区共报告0～24岁儿童青少年肺结核2024例,其中学生患者所占比例最大（28.46％）,年龄主要集中在20～24岁,男性明显多于女性;春季发病较多,冬季较少.结论 顺德区儿童青少年肺结核的疫情形势较严峻,肺结核病预防控制工作任重而道远,尤其要加强学生的结核病防控工作.     

巴豆油体外抗结核分枝杆菌作用实验研究

目的：观察巴豆油体外对结核杆菌的生长抑制作用。方法：在用新鲜的人型结核分枝杆菌标准菌株(H37RV),分别接种于含有不同浓度巴豆油、食用色拉油、链霉素和空白对照的豆浸液结核分枝杆菌培养基,观察各组、各管结核分枝杆菌的生长情况。结果：空白对照组、色拉油组菌落生长情况正常,各浓度巴豆油组(1：10～1：5120)均对结核菌生长有抑制作用,其中,1：10～1：160组到培养终止期(40d)仍无细菌生长。巴豆油1：160组的抗菌效果与含链霉素(100μg／mL)培养基基本相似。将无细菌生长的巴豆油培养基表面颗粒状物接种到空白对照培养基经恢复培养,均无结核菌生长。结论：巴豆油有体外抗结核菌的作用,一定浓度的巴豆油对结核菌有不可恢复的杀灭作用。     

多重PCR法检测结核分枝杆菌耐药基因研究

目的:建立多重PCR法快速检测结核分枝杆菌耐药基因。方法:采用多重聚合酶链反应(PCR)同时扩增46株结核分枝杆菌临床分离株、48株北京标准菌株、40例耐药及40例非耐药的结核分枝杆菌临床分离菌株的inhA、katG、rpoB、IS1081等基因并采用测序的方法进行验证。结果:所有耐药样本基因(包括利福平、异烟肼耐药基因)及野生型菌株均被成功扩增。结论:应用多重PCR技术可同时快速检测结核分枝杆菌耐药基因。     

江苏省农村居民结核病危险因素病例对照研究

目的　了解江苏省农村结核发病危险因素 ,为结核病控制提供依据。方法　采用 1∶1配对病例对照方法 ,分层整群抽取病例和对照各 318人进行问卷调查 ,计算OR值和 95 %CI ,并用条件Logistic回归模型进行多因素分析。结果　在单因素分析中 ,人均收入、住房类型、人均住居面积、膳食营养 (鸡蛋、肉类 )、劳动疲乏、经济负担重、有负性事件、结核相关疾病史、吸烟、有结核病 (TB)接触史等因素的OR值分别为 0 72 6 ,0 6 4 9,0 82 3,0 913,0 90 6 ,1 84 9,2 0 2 7,3 86 7,2 35 5 ,1 389,3 5 99;P均 <0 0 5。在多因素分析中 ,人均收入低、家庭经济负担重、劳动疲劳、有结核相关疾病史、有负性事件、有TB接触史是影响农村结核病的主要因素。结论　加强结核病人发现、治疗、管理 ,并针对其他危险因素采取控制措施对降低农村疫情有重要意义。     

灌云县非结防机构网络直报疑似肺结核病病人情况分析

目的描述江苏省灌云县非结防机构网络直报疑似肺结核病病人到位情况,探索提高病人发现的方法。方法收集灌云县2005—2007年间传染病网络直报系统中非结核病防治机构报告的疑似肺结核病病人资料并进行分析。结果灌云县网络直报病人数从2005年的203人增加到2007年的445人,3年总计847人。病人转诊到位率为42.7%,追踪到位的病人占44.7%。52.5%的到位病人诊断为肺结核病,其中38.7%为涂阳病人,13.8%为涂阴病人。乡镇医疗机构转诊到位率(73.9%)高于县、市及以上医疗机构以及外地医疗机构(小于38.9%),前者总体到位水平(98.6%)亦高于后者(小于90.8%)。未到位病人共106例,原因主要包括未追踪(地址不详)、拒绝就诊、外出和查无此人。结论乡镇医疗机构肺结核病管理工作优于县、市及以上等级综合医疗机构。为提高病人发现和管理水平,须加强综合医疗机构对病人的健康教育和转诊工作,同时针对综合医疗机构应建立更完善的内外督导机制;流动人口应建立新的肺结核病管理模式。