单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B基因疫苗的构建及其诱导小鼠细胞免疫应答

目的:构建、制备单纯疱疹病毒1型截短糖蛋白B DNA疫苗，检测其诱导机体产生的细胞免疫应答效果。方法:利用PCR技术从HSV-1 SM44毒株基因组中扩增出编码HSV-1 gB14～507氨基酸序列的一段基因。定向插入真核表达质粒pcDNA₃载体中，构建出重组真核表达质粒pcDNA₃-gBt，并对其进行酶切分析、PCR鉴定及测序鉴定。于BALB/c鼠注射免疫3次，抗体分析CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群的变化，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)/碘化丙碇(PI)双标记的流式细胞计数法检测CTL活性。结果:PCR及测序鉴定结果显示，插入的克隆基因与GenBank中HSV-1F株gB基因序列一致，证实了HSV-1 gBt核酸疫苗的构建；pcDNA₃-gBt免疫组BALB/c鼠的CD4⁺T细胞数较空质粒（pcDNA₃）对照组和生理盐水对照组增加，CTL活性也较对照组明显增强，但是pcDNA₃-gBt免疫组BALB/c鼠的CD8⁺T细胞、CD4⁺/ CD8⁺T细胞比值与对照组比较差异均无显著性（P＞0.05）。结论:HSV-1 gBt核酸疫苗诱导较强的细胞免疫应答。     

应用SELDI-TOF-MS技术分析慢性乙肝患者血清差异表达蛋白

【目的】应用表面加强激光解析离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术分析慢性乙肝患者血清差异表达蛋白。【方法】选择临床明确诊断的慢性乙肝患者和正常健康体检者各12名,利用弱阳离子芯片CM10经质谱分析血清中差异表达蛋白。【结果】样品血清中共获得与芯片结合的67个有效蛋白质峰。其中相对分子质量4107、4980、5650、5923道尔顿的4个蛋白峰有差异,相对分子质量为4980道尔顿的蛋白峰在慢性乙肝组高表达。经检索,发现相对分子质量为4980道尔顿的蛋白与细胞色素B相对分子质量相符。【结论】利用SELDI-TOF-MS技术寻找慢性乙肝患者无创性血清学指标是一种可行的方法,细胞色素B可能在慢性乙肝形成中起一定作用。     

损伤上皮细胞ERK1/2通路活化并诱导上皮下成纤维细胞增殖

目的:探讨气道上皮损伤过程中ERK1/2信号通路的活化及其病理意义。方法:将原代培养的人支气管上皮细胞给予机械性损伤和(或)加入ERK1/2信号通路特异性抑制剂PD98059,采纳免疫组化、Western blotting或Zymog-raphy方法检测气道上皮细胞经机械损伤后ERK1/2的激活及MMP-2活性的变化;将损伤或加入MMP-2抑制剂的损伤上皮细胞上清刺激上皮下成纤维细胞,应用BrdU免疫组化检测成纤维细胞增殖的变化。结果:损伤诱导了上皮细胞ERK1/2信号通路的活化并促进活性MMP-2的释放,阻断ERK1/2信号通路减弱了损伤诱导的活性MMP-2水平;损伤上皮上清促进了成纤维细胞增殖,MMP-2抑制剂可阻断损伤上皮细胞上清的促增殖效应。结论:ERK1/2信号是损伤气道上皮高表达MMP-2进而诱导上皮下纤维化的一条重要信号通路。     

血必净对多器官功能障碍综合征患者血浆蛋白C活性的影响

目的:观察中药血必净注射液对多器官功能障碍综合征(MODS)患者血浆蛋白C水平的影响。方法:将60例MODS患者随机分为对照组与治疗组,30例对照组患者采用西医常规治疗,30例治疗组患者在西医治疗基础上加用血必净注射液治疗。观察两组患者病死率、急性生理与慢性健康评估(APACHEⅡ)评分及血浆蛋白C水平的变化。结果:治疗组患者较对照组患者病死率降低、APACHEⅡ评分下降、血浆蛋白C水平升高(P<0.05)。结论:中药血必净注射液可提高MODS患者血浆蛋白C水平,缓解临床症状,降低病死率。     

老年髋部骨折患者血浆血栓素B2和6-酮-前列环素F1α水平的变化及临床意义

目的:探讨老年髋部骨折患者血浆血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列环素F1α(6-k-PGF1α)的变化及对临床的影响。方法:老年髋部骨折患者、老年上肢骨折患者及老年非骨折患者各60例分为老年髋部骨折组(A组)、非骨折组(B组)和老年上肢骨折组(C组),3组患者分别于入院24h后、1周、2周、3周、4周后采取静脉血监测TXB2和6-k-PGF1α水平。结果:A组TXB2水平与B组比较增高,A组内比较1周后TXB2水平较24h后增高,两周达高峰,至第4周其水平下降;B组和C组比较TXB2水平无明显变化。A组6-k-PGF1α水平与B组比较在入院24h后没有明显变化,1周后其水平下降,且持续到第4周仍较低;A组内比较1周后其水平下降,2周后下降明显至第4周有所升高。B组和C组比较6-k-PGF1α水平无明显变化。结论:老年髋部骨折患者TXB2水平增高而6-K-PGF1α水平降低,二者比例失衡,此对患者下肢深静脉血栓形成与心脑血管应激反应的发生均有影响。     

2型糖尿病血管病变患者C反应蛋白、纤维蛋白原、D二聚体检测的意义

目的 探讨2型糖尿病血管病变患者C反应蛋白（CRP）、纤维蛋白原（Fbg）、D二聚体（D-D）水平的变化及其临床意义。方法 检测81例2型糖尿病患者的空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（VINS）、CRP、Fbg、D-D。按是否合并血管病变分为糖尿病血管病变组、单纯糖尿病组。结果糖尿病血管病变组CRP、血浆Fbg、D-D水平高于单纯糖尿病组，且差异具有统计学意义（P〈0．05）；CRP、Fbg、胰岛素抵抗（IR）三者之间具有相关性（P〈0．05）。结论 CRP可能是2型糖尿病血管病变的危险因子，参与糖尿病血管病变的发生和发展。     

蛋白质Z及凝血因子在恶性实体瘤患者中的变化

目的研究蛋白质Z（protein Z,PZ）在恶性肿瘤患者中的变化,并探讨其临床意义。方法对86例恶性肿瘤患者的PZ、FⅦ：C、FⅧ：C、FX：C、FⅪ：C进行测定。PZ用ELISA法,血浆FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C、FⅪ：C用一期法与ACL-2000全自动凝血仪进行测定。45名健康人作为对照。同时对复发转移组与未复发转移组作分析比较。结果恶性肿瘤组的PZ水平（1210．89ng/ml±251．13ng/ml）明显下降（对照组为2378．83ng/ml±429．51ng/ml）,FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C、FⅪ：C水平明显升高,分别为162．42%±36．57%、201．95%±77．54%、120．27%±77．54%、145．88%±56．48%（对照组分别为116．70%±28．80%、70．15%±21．28%、76．13%±19．26%、77．23%±16．22%）,P值均＜0．01。相关研究中,发现恶性肿瘤组及对照组中的PZ水平与FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C水平之间均存在明显负相关（P值均＜0．001）,而PZ与FⅪ：C无相关性（P＞0．05）。对肿瘤的病情研究发现,复发转移组PZ、FⅦ：C、FⅧ：C、FⅩ：C、FⅪ：C与未复发转移组比较,转移组的PZ更低,FⅦ：C、FⅧ：C、FX：C、FⅪ：C水平更高（P＜0．01）。结论PZ水平在恶性肿瘤患者中明显减低,且与病情有关。PZ与FⅦ：C、FⅧ：C、FX：C存在明显负相关。提示PZ缺乏可能是恶性肿瘤患者获得性易栓症的一个新的发病因素。     

慢性乙型肝炎病毒基因型与血清病毒载量的关系

目的探讨徐州地区慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中乙型肝炎病毒（HBV）基因型与病毒载量的关系。方法采用型特异性引物多重PCR方法对徐州地区160例CHB患者的HBV进行基因分型，用荧光定量PCR方法检测HBVDNA水平。结果B型14例（8．7％），C型88例（55．0％），BC混合型51例（31．9％），未分型7例（4．4％），未发现A、D、E、F型。不同基因型之间HBVDNA载量无明显差别。结论徐州地区CHB患者中HBV基因型主要是C型和BC混合型，感染的HBV基因型与血清病毒载量之间无明显相关。     

TK自杀基因的构建及鉴定

目的利用分子生物学技术,构建胸苷激酶基因（TK）自杀基因并测定其结构,为该自杀基因的进一步研究提供良好的实验基础。方法以人类单纯疱疹病毒Ⅰ（HSV1）基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应（PCR）法,扩增出约为1 100 bp TK基因,定向克隆到载体PEGM-T,构建克隆载体。两端分别引入限制性内切酶NotⅠ、XholⅠ酶切位点,经PCR及酶切鉴定初步证实为重组体后,测序认证。结果经PCR、酶切鉴定和测序鉴定完成TK基因的构建,同源性高达98.70%,完全具备表达该目的基因的要求。结论成功扩增出TK基因,为继续研究打下基础。     

慢性乙型肝炎干扰素治疗后长期随访中复发与相关因素的研究

目的 观察和分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)经重组α干扰素(rIFN-α)治疗取得完全应答后,在长期随访过程中的复发情况,及其影响复发的相关因素.方法 523例经肝穿刺活检证实的CHB患者,给予rIFN-α 1 b治疗,疗程6～25个月,治疗中每1～3个月检测肝功能、HBVDNA、乙肝病毒e抗原(HBeAg).治疗后随访至少12个月,随访时每3～6个月检查肝功能、HBVDNA、HBsAg及HBeAg.结果 523例患者经rIFN-α治疗后,近期应答302例(57.7%).近期应答者经随访39.2±21.5个月,持续应答183例(35.0%),复发119例(39.4%).患者年龄、治疗前HBeAg状态、以及随访时间是影响复发的相关因素:复发组平均年龄(34.27±8.69岁)显著高于持续应答组的平均年龄(25.28±8.65)岁(P＜0.001);HBeAg( )组复发率76/225例(33.8%)显著低于HBeAg(-)组43/77例(55.8%)(P＜0.001);按随访每12个月为一时间段,分1～12个月、13～24个月、25～36个月、37～48个月、49～60个月和≥61个月6个时间段,各时间段复发的发生率有显著性差异(P＜0.001),累计复发率亦有显著性差异(P＜0.001),但25个月以后的4个时间段累计复发率差异无显著性(P=0.670).患者性别、治疗前ALT水平和HBVDNA水平、肝组织炎症活动度(G)、肝纤维化程度(S)及治疗疗程与复发无明显相关性,但在HBeAg( )组中,复发组的平均基线HBV DNA水平6.98±1.14 Log拷贝/ml高于持续应答组6.21±1.04 Log拷贝/ml(P=0.017).结论 CHB患者经rIFN-α治疗后,患者年龄、治疗前HBeAg状态以及随访时间是影响其在随访过程中复发的相关因素.在HBeAg( )CHB中,治疗前HBV DNA水平亦是影响复发的相关因素.