成纤维细胞生长因子19转录活性及上游结合元件分析

目的 构建FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒,并研究分析其启动子区的转录活性和结合元件。方法 设计特异性引物PCR扩增基因组DNA,得到长为3323bp的FGF19基因启动子区片段,将此PCR产物插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic Vector,获得全长为3323bp的FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒。在此基础上设计特异性引物,构建5''端系列缺失荧光素酶报告基因质粒。通过瞬时转染实验检测所构建质粒的相对荧光素酶活性,分析不同启动子区片段对FGF19基因转录活性的影响,并用软件预测影响启动子转录活性的关键转录因子。结果 构建了7个FGF19基因启动子区荧光素酶报告基因质粒,经双酶切和测序验证均正确。瞬时转染及荧光素酶报告基因分析实验发现启动子区-2351~-2316是调控FGF19启动子转录活性的重要序列,且在线软件预测该序列存在潜在的转录因子位点。结论 FGF19基因启动子区-2351~-2316是调控其启动子转录活性的关键位置。     

反向前列腺特异性膜抗原增强子启动子调控重组质粒的构建及增强子调控活性的比较

目的 探讨前列腺特异性膜抗原（PSMA）启动子和增强子调控目的基因表达的前列腺细胞特异性,了解增强子增强转录效率的能力。方法 采用PCR方法从前列腺癌细胞DNA中分别扩增PSMA增强子序列．将其按不同方向亚克隆到含有报告基因——绿色荧光蛋白（GFP）的重组质粒载体pEGFP—PSMAPPro脂质体介导基因转染不同癌细胞并观察GFP在所转染的细胞的表达情况。结果 成功构建质粒pEGFP—PSMAE-P和pEGFP-PSMAE（r）-P,质粒转染结果显示PSMA表达阳性的LNCaP细胞中存在GFP的特异有效表达,增强子序列能使基因转录效率提高30倍,不同方向的增强子序列在增强转录效率方面具有同样效应。结论 反向PSMA增强子启动子调控GFP表达的重组质粒的构建证明该调控序列具有前列腺细胞特异性,增强子具有增强启动子转录效率的功能且没有方向性。     

脑胶质瘤组织时钟基因启动子区甲基化状态及意义

目的探讨脑胶质瘤组织中PER1、PER2、CRY1、CRY2、CLOCK、BMAL1和NPAS2时钟基因启动子区甲基化状态与脑胶质瘤发生、发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR检测脑胶质瘤组织及其癌旁正常组织（对照）PER1、CRY1、CRY2、CLOCK、BMAL1、NPAS2等时钟基因启动子区甲基化状态。结果脑胶质瘤组织与癌旁正常组织中PER1、CLOCK时钟基因启动子区均未有甲基化；脑胶质瘤组织中NPAS2、PER2时钟基因启动子区甲基化频率明显高于癌旁正常组织（均P＜0.05）；两种组织中CRY1、CRY2和BMAL1时钟基因启动子区甲基化频率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。不同级别脑胶质瘤组织中PER1、CLOCK时钟基因启动子区均未有甲基化；高级别脑胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）组织中NPAS2时钟基因启动子区甲基化频率高于低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）组织（P＜0.05）；不同级别脑胶质瘤组织中CRY1、CRY2、BMAL1和PER2时钟基因启动子区甲基化频率比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论NPAS2、PER2时钟基因启动子区甲基化频率明显增高；NPAS2时钟基因启动子区甲基化频率越高，脑胶质瘤的恶性程度越高。NPAS2、PER2时钟基因启动子区DNA甲基化修饰可能是脑胶质瘤发生、发展的重要机制。     

Epigenetic status of FBXW7 gene and its role in Ovarian cancer pathogenesis

Background: Chromatin immunoprecipitation (ChIP) analysis revealed that the FBXW7 gene and the long non-coding RNA (LINC01588) are potential candidates in epithelial ovarian cancer (EOC) pathogenesis. However, their exact role in EOC is not yet known. Thus, the present study sheds light on the impact of the mutations/ methylation status of the FBXW7 gene. Materials and Methods: We used public databases to assess the correlation between mutations/ methylation status and the FBXW7 expression. Furthermore, we performed Pearson’s correlation analysis between the FBXW7 gene and LINC01588. We performed gene panel exome sequencing and Methylation-specific PCR (MSP) in HOSE 6-3, MCAS, OVSAHO, and eight EOC patients’ samples to validate the bioinformatics results. Results: The FBXW7 gene was less expressed in EOC, particularly in stages III and IV, compared to healthy tissues. Furthermore, bioinformatics analysis, gene panel exome sequencing, and MSP revealed that the FBXW7 gene is neither mutated nor methylated in EOC cell lines and tissues, suggesting alternative mechanisms for FBXW7 gene regulation. Interestingly, Pearson’s correlation analysis showed an inverse, significant correlation between the FBXW7 gene and LINC01588  expression, suggesting a potential regulatory role of LINC01588. Conclusion: Neither mutations nor methylation is the causative mechanism for the FBXW7 downregulation in EOC, suggesting alternative means involving the lncRNA LINC01588.