人工虫草对糖尿病大鼠足细胞上皮间质转分化影响的研究

目的 探讨人工虫草(金水宝)对糖尿病大鼠肾脏足细胞数目及转分化的影响.方法 利用链脲佐菌素诱导建立糖尿病大鼠模型,SD大鼠按随机数字表法分为3组:对照组、糖尿病模型组和人工虫草治疗组.干预8周后检测各组大鼠肾小球足细胞数目、nephrin、desmin及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平.结果 与对照组比较,糖尿病模型组大鼠足细胞数目、nephrin水平明显下降(P＜0.05),desmin及MCP-1均明显升高(均P＜0.05).与糖尿病模型组相比,人工虫草治疗组足细胞数目、nephrin表达水平均明显增加,desmin和MCP-1的含量明显下降(均P＜0.05).结论 人[虫草对糖尿病大鼠足细胞转分化有明显的改善作用,并且能显著增加足细胞数目.     

The challenge and response of podocytes to glomerular hypertension

Glomerular hypertension (ie, increased glomerular capillary pressure), has been shown to cause podocyte damage progressing to glomerulosclerosis in animal models. Increased glomerular capillary pressure results in an increase in wall tension that acts primarily as circumferential tensile stress on the capillary wall. The elastic properties of the glomerular basement membrane (GBM) and the elastic as well as contractile properties of the cytoskeleton of the endothelium and of podocyte foot processes resist circumferential tensile stress. Whether the contractile forces generated by podocytes are able to equal circumferential tensile stress to effectively counteract wall tension is an open question. Mechanical stress is transmitted from the GBM to the actin cytoskeleton of podocyte foot processes via cell-matrix contacts that contain mainly integrin α3β1 and a variety of linker, scaffolding, and signaling proteins, which are not well characterized in podocytes. We know from in vitro studies that podocytes are sensitive to stretch, however, the crucial mechanosensor in podocytes remains unclear. On the other hand, in vitro studies have shown that in stretched podocytes specific signaling cascades are activated, the synthesis and secretion of various hormones and their receptors are increased, cell-cycle arrest is reinforced, cell adhesion is altered through secretion of matricellular proteins and changes in integrin expression, and the actin cytoskeleton is reorganized in a way that stress fibers are lost. In summary, current evidence suggests that in glomerular hypertension podocytes primarily aim to maintain the delicate architecture of interdigitating foot processes in the face of an expanding GBM area.     

马兜铃酸损伤大鼠肾小球足细胞的研究

目的 探讨马兜铃酸是否能损害肾小球足细胞.方法 用关木通浸膏水溶液间断灌胃制作马兜铃酸肾损害大鼠模型,分别于第1、4周末检测早期马兜铃酸肾损害大鼠24 h尿蛋白量,并以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳观察尿蛋白成分.随后处死大鼠取肾组织,用激光显微切割捕获技术分离肾小球;用实时荧光定量PCR检测肾小球中nephnn、podocin、CD2AP、podocalyxin、podoplanin的mRNA表达;电镜下测量肾小球足突的平均宽度.结果 模型大鼠4周末尿蛋白量较对照组显着增多(P＜0.01),其中白蛋白含量明显增加.电镜结果显示肾小球足突平均宽度较对照组显著增宽(P＜0.01).肾小球中nephrin、podocin、CD2AP、podocalyxin、podoplanin的mRNA表达均较对照组显著减少,分别下调34％、62％、56％、50％(P＜0.01)及27％(P＜0.05).结论 马兜铃酸能损伤肾小球足细胞,导致足细胞相关蛋白mRNA表达下调,足突节段增宽,并出现白蛋白尿.     

一种成人肾病综合征患者尿沉渣足细胞分子nephrin及Podocalyxin检测方法

目的:探讨采用ELISA方法以尿AQP(Aquaporin)-2校正检测肾病综合征尿nephrin podocalyxin排泌,以帮助评估成人肾病综合征的诊断和病情。方法:入组71例经肾穿刺明确病理诊断的成人肾病综合征(NS)患者,包括20例增殖性肾小球疾病的患者,49例非增殖的患者和2例淀粉样变性患者。22例FSGS患者(其中13例确定FSGS亚型诊断)。选取10例健康志愿者作为研究对照组。用ELISA法测定尿nephrin,podocalyxin和AQP-2。以尿AQP2作为内参照校正尿nephrin(neph/AQP)和podocalyxin(PCX/AQP)。结果:尿neph/AQP和PCX/AQP正相关(R=0.616,P<0.001),正常人尿neph/AQP和PCX/AQP显著低于NS患者(P<0.05),增殖和非增殖性肾病综合征患者的尿neph/AQP和PCX/AQP差异无统计学意义(P>0.05),FSGS患者尿neph/AQP和PCX/AQP中显著高于其他NS患者(P<0.05),在IgMN患者尿neph/AQP和PCX/AQP增加,肾淀粉样变性患者的尿neph/AQP和PCX/AQP较少。对13例明确FSGS病理亚型诊断的患者尿neph/AQP和PCX/AQP进行评估,发现各组间差异无统计学意义(P>0.05),但以细胞型FSGS尿neph/AQP排泌最高,NOS型其次,顶端型再次,以脐部型最低。尿PCX/AQP则以细胞型FSGS排泌最高,NOS型其次,脐部型再次,顶端型最低。对于肾病综合征患者FSGS的诊断,ROC曲线分析表明,当尿neph/AQP取临界值为0.165时其灵敏度为0.864,而特异性为0.603,尿PCX/AQP取临界值3.056时其灵敏度为0.773,特异性为0.672。结论:采用ELISA方法的以AQP-2作为内参检测成人肾病综合征尿足nephrin,podocalyxin较为简便。IgMN患者尿neph/AQP和PCX/AQP增高,肾淀粉样变性患者的尿neph/AQP和PCX/AQP较低。FSGS患者尿neph/AQP和PCX/AQP高于其他肾病综合征患者,在FSGS亚型中以细胞型及NOS型稍高于其他亚型FSGS患者,该方法还有助于在临床肾病综合征患者中帮助诊断FSGS。     

尿足细胞阳性IgA肾病患者不同蛋白尿水平临床病理分析

目的：探讨尿足细胞阳性的IgA肾病患者不同蛋白尿水平的临床病理特点.方法：选取原发性IgA肾病尿足细胞阳性患者41例,收集患者临床病理资料,根据尿蛋白水平分成3组：组1（≤0.5 g/24 h）（n=9）,组2（〉0.5 g/24 h,〈1.0 g/24 h）（n=14）,组3（≥1.0 g/24 h）（n=18）,比较3组临床病理特点.结果：（1）临床特点：组1患者收缩压、eGFR、UA均较组3差异有统计学意义（P〈0.05）,且这些指标在三组间随蛋白尿水平呈现递进表现.组2和组3仅在收缩压、UA方面差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）病理特点：组1在节段性肾小球病变比例及间质炎细胞浸润方面较组3轻,差异有统计学意义（P〈0.05）;组1在节段性肾小球病变比例及节段损伤积分方面较组2轻,差异有统计学意义（P〈0.05）;组2和组3两组病理改变差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：尿足细胞阳性的IgA肾病患者中,尿蛋白水平仍然是肾脏病轻重的一个指标,与临床病理关系密切.     

地塞米松拮抗脂多糖对TRPC6表达及足细胞损伤的影响

目的观察脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导足细胞（podocyte,PC）瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（transient receptor potential cation channel 6,TRPC6）表达及胞内Ca2＋浓度的变化,探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）对TRPC6及Ca2＋变化的影响。方法体外分化培养的永生化小鼠PC随机分为：1对照组;2LPS组;3DEX组;4LPS＋DEX组。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2＋浓度,Annexin V-FITC/PI标记流式细胞测定PC的凋亡百分率,免疫荧光染色及半定量分析骨架蛋白F-肌动蛋白分布及数量,Western blotting检测足细胞TRPC6、nephrin及desmin蛋白的表达。结果1对照组、DEX组、LPS组、LPS＋DEX组PC Ca2＋荧光强度变化分别为15.6±6.1、17.8±6.5、116.2±15.4、57.2±13.6;凋亡百分率分别为（0.44±0.24）%、（0.45±0.18）%、（2.28±0.36）%、（1.78±0.33）%;F-肌动蛋白平均荧光强度分别为925±136、924±148、217±44.4、634±71.9;TRPC6蛋白的表达分别为0.33±0.09、0.36±0.08、0.81±0.13、0.61±0.12;nephrin表达为1.14±0.15、1.10±0.15、0.39±0.11、0.68±0.10;desmin表达为0.32±0.05、0.38±0.04、1.01±0.15、0.84±0.14。2与对照组及DEX组相比,LPS组足细胞Ca2＋浓度增加,凋亡百分率增加,F-肌动蛋白减少,TRPC6、desmin表达增加,nephrin表达降低。3与LPS组相比,LPS＋DEX组足细胞Ca2＋浓度及凋亡百分率降低,F-肌动蛋白增加,TRPC6、desmin表达下调,nephrin表达上调。结论 DEX拮抗LPS引起足细胞TRPC6高表达及细胞内Ca2＋水平增加,对足细胞有保护作用。     

HBV-DNA阳性血清对足细胞增殖、凋亡及其细胞周期调控蛋白mRNA表达的影响

目的：探讨人类乙肝病毒DNA阳性血清对体外培养小鼠足细胞增殖、凋亡及cyclin D1及p27mRNA表达的影响,并探讨其意义.方法：以体外培养的小鼠肾小球足细胞为对象,分别用健康人血清（C组）、携带HBV无肾损害者阳性血清（B组）和乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）者HBV-DNA阳性血清 [依据其HBV-DNA含量分为A1组（〈10^3 copy/ml）、A2组（10^4 copy/ml）及A3组（10^6 copy/ml）] 刺激,采用MTT检测足细胞增殖水平,Annexin V法检测足细胞凋亡,RT-PCR法检测足细胞cyclin D1及p27mRNA的表达水平.结果：人类HBV-DNA阳性血清对小鼠分化足细胞有明显刺激增生作用,与C组比较,A1组对足细胞增殖无明显影响,而A2、A3组及B组血清均能显著刺激足细胞发生增殖,但各组之间比较差异无统计学意义.HBV-DNA阳性血清对小鼠足细胞的凋亡无明显影响.与空白组及C组比较,A1、A2、A3组和B组阳性血清对小鼠足细胞cyclin D1mRNA的表达无明显影响,但可明显下调足细胞p27mRNA的表达,但各组之间差异无统计学意义.结论：人类HBV-DNA阳性血清可刺激小鼠分化足细胞发生增殖,但对细胞中cyclin D1的表达和凋亡没有影响,其刺激增殖作用可能与下调p27mRNA的表达有关.     

沉默p35表达引起肾小球足细胞凋亡的研究

目的研究周期素蛋白依赖性激酶-5（Cdk5）激活剂p35表达在肾小球足细胞损伤中的作用。方法分别培养离体分化成熟的肾小球足细胞、并分离纯化肾小球,应用免疫印迹法和免疫沉淀、同位素标记等方法检测Cdk5和p35的表达及Cdk5的活性,同时观察小鼠肾小球发育成熟的时间周期和体外成熟分化足细胞的发育成熟时间周期中Cdk5和p35在肾小球发育和足细胞分化的不同时期的表达。并以分化成熟的离体足细胞为研究对象,分为正常细胞组和p35siRNA组（p35表达沉默组）,应用免疫印迹法观察2组中足细胞标志物WT1及促凋亡蛋白Cleavedcaspase3的表达及凋亡。结果Cdk5及其激活剂p35在成熟分化肾小球足细胞、分离纯化。肾小球中均有表达;在小鼠肾小球发育过程中（胚胎14、18、22d、生后2d及成年鼠）p35的表达随肾小球发育成熟的程度而增强（P〈0．05）,在不同分化成熟时期的足细胞（0、2、4、6、8d）中得到同样的结果（P〈0．05）;沉默p35的表达（p35SiRNA组）,可引起足细胞特异性标志物,WT1表达减少,表示细胞凋亡的Cleavedcaspase3蛋白增加,说明足细胞受到损伤、细胞内结构发生改变。结论Cdk5及其激活剂p35在足细胞中均有表达,p35的表达随足细胞分化成熟而增加;沉默p35的表达可引起足细胞促凋亡蛋白Cleavedcaspase5增多,WT1数量减少,说明p35在维持足细胞的功能和形态中起重要作用。     

雷公藤内酯醇和缬沙坦对高糖诱导小鼠足细胞活性的影响

目的观察不同浓度高糖对小鼠足细胞活性的抑制作用,以及不同浓度雷公藤内酯醇（TP）和缬沙坦（Val）对高糖抑制后小鼠足细胞活性的影响,探讨高糖对足细胞的损伤作用,以及有效的药物干预浓度范围。方法将培养成熟的小鼠足细胞随机分为对照组（11.1mmol/L葡萄糖）和不同浓度高糖组（16.1、21.1、26.1、31.1、36.1mmol/L）,以上述浓度培养48h后采用CCK-8检测足细胞活性的变化。取活性变化最大的浓度为高糖诱导浓度,在此基础上随机分为不同浓度的TP组（4、8、16、32、64ng/ml）和Val组（2×10-8、2×10-7、2×10-6、2×10-5、2×10-4mol/L）,以上述浓度干预48h后,采用CCK-8检测足细胞活性的变化。结果（1）与对照组相比,除16.1mmol/L高糖组外,其余各高糖组的足细胞活性显著减少,其中以26.1mmol/L葡萄糖组减少最为明显（P＜0.01）。（2）与26.1mmol/L葡萄糖组相比,TP组（除4ng/ml组外）和Val组（除2×10-8mol/L组外）足细胞活性部分恢复,其中以16ng/mlTP组和2×10-5mol/LVal组足细胞活性恢复最为明显（P＜0.01）。结论一定浓度范围的TP和Val可部分恢复受高糖抑制的小鼠足细胞活性。     

Angiotensin II induces reorganization of the actin cytoskeleton and myosin light-chain phosphorylation in podocytes through rho/ROCK-signaling pathway*

Aims In the present study, we have evaluated the effect of angiotensin II (Ang II) on actin cytoskeleton reorganization and myosin light-chain (MLC) phosphorylation in podocytes to demonstrate whether the Rho/Rho-associated coiled kinase (ROCK) pathway is involved podocyte injury. Methods Eighteen male Sprague–Dawley rats were divided into three groups and treated with Ang II, saline or telmisartan. Morphological changes were studied at 28 days after treatment. Immunohistochemistry and Western blotting were used to determine the renal expression of p-MLC and ROCK2. Cultured podocytes were treated with Ang II (10^?7?M) with or without Rho-kinase inhibitor (Y27632, 10^?6?M) for variable time periods. F-actin was visualized with fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated phalloidin or tetraethyl rhodamine isothiocyanate (TRITC)-conjugated phalloidin. p-MLC expression was evaluated by immunofluorescence and Western blot. The activation of Rho/ROCK was evaluated by Western blot. Results The expression of p-MLC in glomeruli increased significantly in rats treated with Ang II when compared to the control rats as shown by Western blot (p?Conclusion Ang II-induced podocyte cytoskeleton protein expression changing through the RhoA/ROCK2 p-MLC/F-actin pathway.