加味济生肾气汤对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠足细胞及其自噬的影响＊

目的 探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响，为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法 将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组，模型组，羟苯磺酸钙组，加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后，各组分别以生理盐水，羟苯磺酸钙，1 mL/kg/d、4 mL/kg/d、10 mL/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理。6周后，取大鼠肾脏，电镜观察肾脏足细胞形态；免疫组化检测Nephrin的表达；Western blot检测LC3II/I和P62的表达。结果 模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚，足细胞排列较紊乱，数目减少，足突融合，在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解；与对照组比较，模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低，LC3II/I比值显著下降，P62水平显著升高。与模型组比较，加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高，LC3II/I比值均显著升高，P62水平显著降低（P < 0.05）。结论 加味济生肾气汤通过提高自噬水平，减少足突发生融合，提高肾脏的过滤功能。     

足细胞上皮-间充质转分化与肾小球疾病

目的足细胞对于维持肾小球滤过屏障的稳定性极为重要。足细胞的损伤可导致肾小球滤过功能障碍和相关肾脏疾病的发生。上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是足细胞损伤的一种表现形式,也是多种肾小球疾病的始动因素之一。本文主要针对足细胞EMT的定义、具体表现、诱导因素、发生机制及相关肾小球疾病及其防治进行综述,以期阐明足细胞EMT最近研究进展,为相关肾脏疾病的治疗提供参考。     

足细胞分子高表达致阿霉素肾病大鼠发生蛋白尿

目的 动态观察足细胞裂孔隔膜复合体分子nephrin、podocin、CD2AP及α-actinin-4在阿霉素肾病大鼠蛋白尿发生发展中的表达变化，探讨其在蛋白尿发生发展中的分子行为及其机制。方法 尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型，3、7、14、28 d每组处死6只大鼠留取肾脏标本。应用间接免疫荧光染色、实时定量PCR、Western 印迹分别检测各个时间点nephrin、podocin、CD2AP、α-actinin-4的分布、mRNA和蛋白表达量的变化。结果 (1)14 d肾病组大鼠24 h尿蛋白显著高于对照组(P < 0.01)，增高持续到28 d。(2)透射电镜显示14 d肾病组足突不同程度变宽，28 d足突弥漫性融合。(3)与对照组相比，从第7天开始肾病组nephrin和podocin染色从沿肾小球毛细血管袢线样分布向不连续粗颗粒样的分布模式转变；CD2AP节段染色增强区逐渐扩大，有的区域呈斑片状和连续线状增强；α-actinin-4从沿肾小球毛细血管袢均匀的点线样分布向不均匀粗颗粒的分布转变，而且随时间进展这种转变逐渐加重。(4)与对照组相比，肾病组于7 d时nephrin mRNA表达显著增高(P < 0.01)；podocin mRNA表达14 d时显著增高(P < 0.05)，直至28 d(P < 0.05)；CD2AP mRNA表达28 d时显著增高(P < 0.05)。(5)与对照组相比，肾病组nephrin蛋白表达28 d时显著增高(P < 0.05)；podocin蛋白表达于7 d时显著增高(P < 0.05)，而28 d时又显著降低(P < 0.05)；CD2AP蛋白表达于14 d时显著增高(P < 0.05)，直至28 d (P < 0.05)。(6)α-actinin-4 mRNA与蛋白表达在实验过程中未出现明显变化。结论 nephrin、podocin和CD2AP的表达增加及分布异常是导致阿霉素肾病大鼠蛋白尿发生发展的分子机制，而分子表达的增加是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。     

维生素D3对2型糖尿病小鼠肾脏的保护作用

目的 探讨维生素D3对2型糖尿病小鼠肾脏的影响。方法 将雄性db/db小鼠随机分为4组:糖尿病(diabetes mellitus, DM)模型组、维生素D3低剂量组(250 IU/(kg·d))、中剂量组(500 IU/(kg·d))和高剂量组(1 000 IU/(kg·d)),与其匹配的db/m小鼠作为正常对照组。维生素D3各剂量组每天灌胃相应浓度的维生素D3玉米油溶液,正常对照组和DM模型组灌胃玉米油。连续饲养16周后,测定各组小鼠空腹血糖、血肌酐及24 h尿微量白蛋白,电镜观察各组小鼠肾脏足细胞超微结构,检测各组小鼠肾脏组织肾病蛋白(Nephrin)和足细胞标记蛋白(Podocalyxin, PCX)的蛋白表达情况。结果 与DM模型组小鼠相比,维生素D3干预组空腹血糖、血肌酐及24 h尿微量白蛋白显著降低(F=4.132,P<0.05; F=5.552,P<0.05; F=8.023,P<0.05),足细胞超微结构显示足细胞损伤有明显改善,高剂量组小鼠肾脏组织中Nephrin表达显著升高(P<0.05),中剂量和高剂量组小鼠肾脏组织中PCX的表达显著升高(P<0.05)。 结论 维生素D3可上调足细胞Nephrin和PCX的表达降低足细胞损伤,减少2型糖尿病小鼠尿白蛋白排泄,进而延缓糖尿病肾病的进展。     

狼疮性肾炎患者尿液足细胞和podocalyxin变化及其意义*

目的：探讨狼疮性肾炎（LN）患者足细胞损伤及尿液中podocalyxin（PCX）浓度变化与肾脏损害的关系。方法：选择SLE患者60例,其中LN 43例,无肾脏损害SLE 17例,肾病综合征患者（NS）20例,健康对照组10例。肾病组63例包括狼疮性肾炎和肾病综合征;非肾病组27例包括系统性红斑狼疮无肾脏受累和健康对照组。根据SLEDAI评分,将LN患者分为中/重度活动组（≥10分）23例和轻度活动/稳定组（＜10分）20例;采用ELISA法检测尿液PCX浓度,免疫荧光法检测尿液中足细胞数目;收集LN患者的相关临床和实验室资料,分析各组患者尿液PCX水平及与临床和实验室指标之间的相关性。结果：（1）肾病组患者尿液PCX浓度183.06±79.59 ng/L高于非肾病组16.75±4.97 ng/L;中/重度活动组LN患者尿液PCX浓度270.8±25.50 ng/L高于轻度活动/稳定组90.10±14.08 ng/L和对照组12.74±2.28 ng/L;轻度活动/稳定组尿液PCX浓度高于对照组。（2）LN、NS患者尿液PCX浓度与24小时尿蛋白定量呈正相关（P<0.01）。（3）LN患者尿液PCX浓度与抗ds-DNA抗体水平、SLEDAI评分呈正相关,与C3、C4呈负相关（P<0.01）。（4）肾病组尿液足细胞数目及阳性率均高于非肾病组。结论：PCX是足细胞重要的靶蛋白,可作为LN肾损伤和疾病活动度的标志之一。     

ACTH4-10 protects the ADR-injured podocytes by stimulating B lymphocytes to secrete interleukin-10

ObjectivesIn the present study, we aimed to assess whether adrenocorticotropic hormone (ACTH) could protect the podocytes from adriamycin (ADR)-induced injury by stimulating B lymphocytes to secrete the associated cytokines.MethodsProliferation assay was used to assess the proliferation and activity of podocytes. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to examine the secretion of IL-10 and IL-4. TUNEL apoptosis detection kit was used to detect the apoptosis of podocytes. Real-time PCR and Western blotting analysis were used to examine the expressions of nephrin and podocin at the mRNA and protein levels.ResultsCompared with the normal control group, the podocyte proliferation of ADR group was significantly inhibited. However, compared with the ADR group, the podocyte proliferation of the supernatant (1 µg/L, 10 µg/L or 100 µg/L ACTH_4-10) + ADR groups was generally increased, and the pro-proliferative effect of the supernatant containing 10 µg/L ACTH_4-10 was the highest. Moreover, we found that after B lymphocytes were intervened by 10 µg/L ACTH4-10, the IL-10 level in the cell supernatant was significantly elevated (p < 0.05). When anti-IL-10R was added, the podocyte proliferation of the supernatant (10 µg/L ACTH_4-10) + ADR group was significantly inhibited. Furthermore, the supernatant of B cells stimulated with 10 µg/L ACTH_4-10 could better decrease the apoptosis rate of injured podocytes and increase the expressions of nephrin and podocin at the mRNA and protein levels by elevating the secretion of IL-10.ConclusionCompared with ACTH_4-10, the supernatant of B cells stimulated with ACTH_4-10 could better protect the podocytes from ADR-induced injury by elevating the secretion of IL-10.     

免疫细胞化学法检测尿足细胞的临床应用

目的：免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞的比较，以促其临床推广应用。方法：尿标本均为我科住院患者的肾活检日新鲜晨尿，采用抗人足细胞标记蛋白Podocalxin（PCX）单克隆抗体进行尿沉渣免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色。14例患者均经肾活检，肾组织由光镜、免疫荧光和电镜检查做出病理诊断。结果：（1）14份尿标本应用免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学方法均可检测到足细胞。（2）同一份尿沉渣采用免疫荧光细胞化学法检测足细胞均数为（16、7±15、1）／HP，而免疫酶细胞化学法检测足细胞均数为（26，1±24、3）／20HP，两组比较有统计学意义（P〈0、05）；但两种方法所测足细胞数之间有很好的相关性（r=0、969）。结论：免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞，前者较简便、镜下易辨认，后者设备简单、标本可保存。     

洛沙坦对糖尿病大鼠肾脏炎症反应及足细胞损伤的影响

目的 探讨洛沙坦对糖尿病大鼠模型肾组织炎症反应及足细胞损伤的影响。方法 Wistar大鼠随机分为3组：对照组（NC）、糖尿病组（DM）、洛沙坦治疗组（DL）。链脲菌素（STZ）注射建立糖尿病动物模型，洛沙坦治疗组在大鼠建立糖尿病同时即开始以洛沙坦（20mg·kg·d^-1）灌胃治疗。分别于2周和12周杀鼠，观察体重、肾重、肾重／体重指数、尿蛋白量（24h）、Scr、Ccr以及肾组织病理改变；免疫组化染色观察肾小球细胞间黏附分子（ICAM-1）、白细胞共同抗原（CD45）、nephrin、血管内皮生长因子（VEGF）表达的改变；免疫印迹观察肾组织nephrin、VEGF表达的改变。结果 （1）DL组大鼠肾重／体重指数、尿蛋白量（24h）、Ccr则均低于DM组，差异均有统计学意义（P均〈0．05），其病理改变程度也比DM组轻。（2）免疫组化及免疫印迹显示，DM组和DL组肾小球ICAM-1、CD45、VEGF表达均高于对照组，而DL组ICAM-1、CD45、VEGF表达均低于DM组；DM组和DL组大鼠肾小球nephrin表达低于对照组；DL组肾小球nephrin表达高于DM组，差异均有统计学意义（P均〈0．01）。结论 洛沙坦可能通过抑制肾组织白细胞浸润、炎症反应及减轻足细胞损伤，达到肾脏保护作用。     

IgA肾病患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清诱导足细胞凋亡

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清对足细胞凋亡的影响。 方法 用Jacalin 亲和层析柱和Sephacryl S-200 分子筛纯化蛋白。单体IgA1（mIgA1）热聚合为聚合体IgA1（aIgA1）。实验分为患者上清组、健康上清组和对照组，系膜细胞分别与IgAN患者的aIgA1、健康对照的aIgA1和5%胎牛血清共培养，收集上清，与同步化的足细胞作用。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。实时定量PCR 检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Fas和Fas-L表达情况。 结果 患者上清可诱导足细胞凋亡，其凋亡率显著高于健康上清组和对照组[（28.5±5.9）%比（22.5±5.8）%、（20.5±4.5）%， 均P < 0.05]。患者上清可诱导足细胞Fas mRNA 升高，为对照组的1.89倍（P < 0.05）， 而Bcl-2 mRNA下调为对照组的72%（P < 0.05）。患者上清组的AngⅡ和TGF-β1水平均高于健康上清组[（13.2±3.4） ng/L比（8.2±2.3） ng/L，P < 0.05；（15.4±3.4） ng/L比（10.8±3.2） ng/L，P < 0.05]。 结论 IgAN患者血清IgA1与系膜细胞共培养上清可诱导足细胞凋亡，可能参与IgAN的进展。