重叠延伸PCR法在合成人骨保护素N端编码序列中的应用

目的：获得人骨保护素(OPG)N端D1-D4结构域编码序列。方法：OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码。采用改良方法自人血标本提取基因组DNA，以此DNA作为模板，PCR分别扩增OPG基因外显子2和外显子3，并使外显子2的3’引物和外显子3的5’引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物的混合物作为模板，采用重叠延伸法再次进行PCR，扩增产物克隆于载体pGEM—Teasy进行序列分析。结果：PCR扩增得到N端编码序列，序列分析证实该序列完全正确。结论：重叠延伸PCR法合成人OPGN端编码序列的完成为基因工程研制有生物活性蛋白提供了可行的技术手段。     

血清骨保护素与2型糖尿病及合并冠心病的关系

目的：探讨血清骨保护素（ OPG）与2型糖尿病及合并冠心病的关系。方法选择健康个体、2型糖尿病患者及2型糖尿病合并冠心病患者各30例。用ELISA方法测定OPG,生化法测定空腹血糖（ FPG）及糖化血红蛋白（HbA1c）,免疫化学发光法测定空腹胰岛素（FINS）,计算胰岛素敏感指数（ISI）及胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,并观察组间各指标的变化。结果2型糖尿病组及合并冠心病组血清OPG、FPG、HbA1c、HOMA-IR明显高于对照组（ P均＜0.01）,ISI明显低于对照组（ P＜0.01）。2型糖尿病合并冠心病组FINS显著高于对照组（ P＜0.05）。2型糖尿病组HbA1 c明显高于2型糖尿病合并冠心病组（ P＜0.01）。结论2型糖尿病及其合并冠心病患者血清OPG水平、血糖、胰岛素及HOMA-IR明显增高,2型糖尿病患者冠心病发生与血清OPG、血糖、胰岛素升高以及胰岛素抵抗有关,OPG作为心血管疾病的预测因子可能与胰岛素的影响有关。     

前列腺素E2调节成骨细胞核因子-κB受体激活物配基和护骨素表达的信号通路研究

目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞核因子-κB受体激活物配基(RANKL)和护骨素(OPG)mRNA表达的调节及其信号转导机制.方法 培养大鼠UMR106成骨细胞,采用不同浓度的PGE:和不同的信号通路调节剂干预细胞后,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果 PGE2、福司可林和db-cAMP均促进RANKL mRNA表达和抑制OPG mRNA的表达,RANKL mRNA表达分别为对照组的2.8倍(P=0.002)、2.2倍(P=0.006)和2.1倍(P=0.005).OPG mRNA表达分别为对照组的12%(P<0.01)、85%(P=0.005)和70%(P=0.013).A23187则下调RANKL和OPG表达58%(P=0.002)和53%(P=0.017).KT-5720下调PGE2诱导的RANKL mRNA表达约53%(P<0.01),而白屈菜红碱、维拉帕米、钙调蛋白抑制剂(W7、KN-62和PD98059)则对PGE:诱导的RANKL mRNA表达无明显影响(P>0.05).KT-5720、维拉帕米和W7分别阻断PGE2对OPG mRNA表达的抑制作用47%(P=0.01)、38%(P=0.029)和43%(P<0.01),而KN-62、PD98059和白屈菜红碱则均不影响PGE2对OPG表达的调节(P>0.05).结论 PKA信号通路介导了PGE2诱导的RANKL表达,而PGE2对OPG表达的下调作用则由PKA和Ca2+钙调蛋白信号通路介导.     

假体周围骨保护素表达与磨损微粒分布的关系

目的 :观察骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG)在假体周围各区的浓度变化 ,研究各区OPG表达与磨损微粒聚积之间的关系。　方法 :临床选取 4例人工全髋关节翻修术病例 ,于术中按照Delee Charnley髋臼分区法和Gruen Amstutz股骨分区法 ,采取松动假体周围各区的反应界膜组织 ,采用羊抗人OPG多克隆抗体对界膜进行免疫标记 ,比较OPG在各个分区中的浓度 ,并以电镜观察统计界膜各个分区中磨损微粒聚积的数目。　结果 :髋臼分区中OPG阳性细胞数目三区显著高于一区和二区 (P <0 .0 5 ) ,股骨分区中OPG的阳性细胞数目一区、六区和七区显著高于其余各区 (P <0 .0 5 )。髋臼分区中三区磨损微粒聚积数明显高于一区和二区 (P <0 .0 5 ) ,股骨分区中一区、七区中黑色磨损微粒均匀弥漫存在 ,明显高于其余各区 (P <0 .0 5 )。　结论 :假体周围OPG的表达具有一定规律性 ,并与磨损微粒的局部聚积密切相关。     

慢性肾衰竭患者血清骨保护素浓度与心脏瓣膜钙化的关系

目的探讨慢性肾衰竭（CRF）患者血清骨保护素（OPG）水平与心脏瓣膜钙化的关系。方法以75例CRF患者[非透析组（ND）25例,腹透组（PD）28例,血透组（HD）22例1和10例健康人（对照组）为研究对象,采用酶联免疫复合物法测定患者血清OPG水平,分析其与心脏瓣膜钙化之间的关系。结果各组CRF患者血清中OPG水平[ND组（4.77±1.74）μg/L、PD组（5.22±1.57）μg/L、HD组（5.35±1.72）μg/L]显著高于对照组[（2.04±0.57）μg/L,P〈0.01]。OPG水平与年龄（r=0.311,P〈0.05）和C反应蛋白水平（r=0.353,P〈0.01）呈正相关。根据有无心脏瓣膜钙化分组后发现,存在瓣膜钙化的CRF患者OPG水平较无瓣膜钙化组显著升高[（6.28±1.66）μg/L比（4.59±1.40）μg/L,P〈0.01]。Logistic回归分析显示血清OPG水平是CRF患者心脏瓣膜钙化发生的一项独立危险因素（P〈0.01）。结论在CRF患者中,血清OPG水平与心脏瓣膜钙化相关。     

Plasma osteoprotegerin levels predict cardiovascular and all-cause mortality and deterioration of kidney function in type 1 diabetic patients with nephropathy

Aims/hypothesis  The bone-related peptide osteoprotegerin is produced by vascular cells and is involved in the process of vascular calcification. The aim of this study was to investigate the predictive value of plasma levels of osteoprotegerin in relation to mortality, cardiovascular events and deterioration in kidney function in patients with type 1 diabetes. Methods  This prospective observational follow-up study included 397 type 1 diabetic patients with overt diabetic nephropathy (243 men; age [mean±SD] 42.1 ± 10.6 years, duration of diabetes 28.3 ± 9.9 years, GFR 67 ± 28 ml min⁻¹ 1.73 m²) and a group of 176 patients with longstanding type 1 diabetes and persistent normoalbuminuria (105 men; age 42.6 ± 9.7 years, duration of diabetes 27.6 ± 8.3 years). Results  The median (range) follow-up period was 11.3 (0.0–12.9) years. Among patients with diabetic nephropathy, individuals with high osteoprotegerin levels (fourth quartile) had significantly higher all-cause mortality than patients with low levels (first quartile) (covariate-adjusted hazard ratio [HR] 3.00 [1.24–7.27]). High osteoprotegerin levels also predicted cardiovascular mortality (covariate-adjusted HR 4.88 [1.57–15.14]). Furthermore, patients with high osteoprotegerin levels had significantly higher risk of progression to end-stage renal disease than patients with low levels (covariate-adjusted HR 4.32 [1.45–12.87]). In addition, patients with high levels of plasma osteoprotegerin had an elevated rate of decline in GFR. Conclusions/interpretation  High levels of osteoprotegerin predict all-cause and cardiovascular mortality in patients with diabetic nephropathy. Furthermore, high levels of osteoprotegerin predict deterioration of kidney function towards end-stage renal disease.     

OPG、RANKL在2型糖尿病伴牙周炎大鼠牙槽骨中的表达

目的:探讨骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子(RANKL)在2型糖尿病伴牙周炎大鼠模型中的表达水平.方法:46只Wistar雄性大鼠,随机分为健康组10只;单纯牙周炎组12只;2型糖尿病组12只;2型糖尿病牙周炎组12只;分别建模,免疫组织化学方法检测牙槽骨OPG、RANKL蛋白表达.结果:与健康组相比,OPG在2型糖尿病组、单纯牙周炎组、2型糖尿病伴牙周炎组表达水平依次降低,RANKL的表达水平依次增强;OPG及RANKL的表达除2型糖尿病牙周炎组与单纯牙周炎组间比较无差异外,其余组间比较有统计学意义(P＜0.05).结论:炎症可能导致破骨细胞及免疫细胞中RANKL的上调和成骨细胞中OPG的下调.     

糖尿病肾病尿毒症患者成纤维细胞生长因子23和骨保护素与桡动脉血管钙化的相关性

目的检测糖尿病肾病尿毒症患者血清及桡动脉成纤维细胞生长因子-23(FGF-23)和骨保护素(OPG)的表达,探讨其与桡动脉血管钙化(VC)的相关性。方法选取36例糖尿病肾病尿毒症且尚未开始血液透析的患者为研究对象,并选取年龄、性别与之相匹配的健康人群40例作为对照组。在病例组建立自体动静脉内瘘吻合手术时留取修剪下的桡动脉,行von kossa染色检测有无钙化,并计算钙化积分;免疫组织化学检测桡动脉FGF-23和OPG的表达。测定两组血清FGF-23、OPG、血红蛋白浓度(Hb)、白蛋白(ALB)、钙(Ca)、磷(P)、全段PTH(i PTH)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、C反应蛋白(CRP)的水平。结果病例组血清FGF-23、OPG水平明显高于对照组(P0.05)。随着血管钙化程度加重,FGF-23和OPG在血清的水平升高,并且在血管壁免疫组织化学染色阳性表达吸光度值升高,病例组血P、FGF-23、OPG与桡动脉血管钙化有相关性。结论糖尿病肾病尿毒症患者普遍存在桡动脉血管钙化,FGF-23和OPG与桡动脉血管钙化呈正相关。     

骨保护素基因多态性及其血清浓度与人类相关疾病的研究进展

骨保护素(OPG)是一种可溶性的分泌型糖蛋白,其与骨密度(BMD)有着密切的关系。近几年研究发现OPG基因多态性及其血清浓度与冠状动脉病变、糖尿病、高血压、脑梗死、肿瘤、溃疡性结肠炎等密切相关。本文就有关骨保护素基因多态性及其血清浓度与人类相关疾病的研究进展作一综述。     

The imbalance between osteoprotegerin and cathepsin K in the serum of patients with longstanding rheumatoid arthritis

Osteoprotegerin (OPG) and soluble receptor activator of NF-kappa B ligand (sRANKL) together regulate the bone metabolism among other cytokines, whereby cathepsin K has a potent collagen-degrading activity. An imbalance of this system may be partly responsible for the skeletal complications of RA. Expanding on a previous study, we investigated the relationship between OPG, sRANKL and cathepsin K levels in the serum of patients with longstanding RA. We measured serum levels of OPG, sRANKL and cathepsin K of 100 patients with active, longstanding RA. We detected elevated serum levels of cathepsin K (median 54.8 pmol/l) and OPG (median 4.8 pmol/l), but normal sRANKL levels (median 0.2 pmol/l). Cathepsin K did not show a correlation with the overexpressed OPG (P = 0.64) and sRANKL (P = 0.81). The radiological destruction correlates significantly with cathepsin K (P = 0.004) and OPG (P = 0.007). We speculate that the increased levels of OPG are effective in compensating the action of sRANKL, but do not directly prevent bone degradation, as reflected by the elevated serum levels of cathepsin K.