Investigating human microskin grafting technique in a new experimental model

Background

. Microskin graft technique is a possible solution for treating major burns. The goal of this study was to investigate microskin graft techniques using a new model of grafting human skin onto athymic nude mice.

Materials and methods

Twenty female nude mice were randomly divided into a research group and a control group (14 mice in the research group, six in the control group). On the 11th day after the procedure, the following parameters were investigated: percentage of epithelial coverage, degree of contracture, thickness of the epidermis, thickness of the dermis, number of blood vessels, number of melanocytes.

Results

The healing rate (epithelial coverage) of the wounds was an average of 100% (±0%) in the control group and 97% (±5%) in the research group (P > 0.05). The average degree of wound contraction in the control group was 30% compared to 63% in the research group (P < 0.01). The average thickness of the epidermis formed at the grafted site was 8.17 (±1.94)μm in the control group compared to 4.45 (±4.17)μm in the research group, at the wound margins (P > 0.05).

Conclusion

We found that the microskin graft, created by grinding a sheet of human skin, remained vital, and tissue of human origin was present at the grafted site. Our study shows that this novel method is feasible and has the advantage of enabling investigation of human skin on an animal model. Significant contracture appears to be a drawback of this technique, and we feel that the method should be improved before its clinical application on patients.     

抗皱眼霜抗皮肤衰老作用实验研究

目的:研究抗皱眼霜抗皮肤衰老作用。方法:裸鼠颈部注射D-半乳糖,并结合长波长和短波长照射裸鼠皮肤,建造裸鼠亚急性衰老及光老化模型,检测皮肤组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、羟脯氨酸(HYP)含量以及丙二醛(MDA)含量。结果:6周注射和光照,裸鼠正常组、对照组和实验组与模型组比较,皮肤组织中SOD活性显著升高(P<0.01),HYP的含量增加(P<0.05),MDA的含量减少(P<0.01)。结论:抗皱眼霜能改善皮肤衰老状态,具有抗皮肤衰老的作用。     

皖南蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ(Agkis-trodon halys venom antitumor component Ⅰ,AHVAC-Ⅰ)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法:取生长状态良好的浓度为1×107个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液0.1mL接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AH-VAC-Ⅰ高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果:AHVAC-Ⅰ在1.0mg/kg剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达42.2%;在3.0mg/kg剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-Ⅰ能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.     

人肝癌组织多药耐药特性裸鼠模型的建立

目的　在裸鼠肝脏建立人肝癌组织多药耐药(MDR)模型。方法　用组织学完整的原发性多药耐药人肝癌组织种植于裸鼠肝脏。然后分别用免疫组织化学方法(SP法)和逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)法检测瘤源及裸鼠种植瘤组织中MDR1、LRP蛋白及其mRNA的表达。结果　裸鼠原位种植瘤保持了人肝癌组织MDR特性。瘤源MDR1、LRP蛋白表达分别为3 1.2 6%和2 7.18% ;其mRNA量分别为61.47%和5 6.71%。裸鼠种植瘤MDR1、LRP蛋白表达分别为(2 9.2 0±2 .81) %和(2 5 .44±2 .43 ) % ;其mRNA量分别为(65 .42±13 .5 9) %和(5 8.63±9.3 7) % ,两种组织中MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达量差异无统计学意义(P >0 .0 5 )。结论　人肝癌组织裸鼠原位种植瘤可保持瘤源的MDR生物学特征,是体内研究人肝细胞癌MDR、筛选敏感化疗药物的较理想模型     

维生素E琥珀酸酯上调Fas表达诱导乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的研究

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)对荷乳腺癌裸鼠的体内凋亡诱导作用。方法裸鼠皮下接种Bcap-37乳腺癌细胞建立荷瘤裸鼠模型,以150mg/kg体重剂量给予VES治疗共5周,测量肿瘤大小,以流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞表面Fas表达,以免疫组织化学法检测肿瘤组织Fas表达并以TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数的变化。结果VES对荷乳腺癌裸鼠具有显著的增殖抑制作用。细胞周期分析显示,VES治疗后肿瘤细胞表现为G_0/G_1期阻滞,凋亡率升高。乳腺癌组织Fas表达值由对照组1.40±0.55升高至治疗组3.00±0.84(P＜0.05),Fas平均荧光强度由3.28升高为5.62。肿瘤细胞的凋亡指数由5.6±1.7升高为16.6±4.6(P＜0.05)。结论VES对于荷乳腺癌裸鼠具有强效的体内生长抑制作用,VES治疗能够上调肿瘤细胞Fas表达,促进细胞凋亡。     

保持人肝癌生物学特性的人肝癌组织裸鼠肝内种植模型的建立

目的建立保持人肝癌特性的裸鼠肝内种植模型。方法用新鲜的人肝癌组织种植于裸鼠肝脏 ;B型超声观察种植瘤的体积变化 ;解剖及显微镜下观察种植瘤的转移情况及组织细胞病理特征 ;免疫组化和RT PCR法测定其MDR1和LRP ;SPECT检测荷瘤鼠骨转移情况。结果第 1代种植 8只裸鼠 ,2w后种植瘤 10 0 %存活 ,并分泌AFP ;8～ 10w内有肝内转移的占 75 0 % ,骨转移占37 5 % ,10w末处死模型鼠 ,有肺转移的占 37 5 % ;种植瘤的病理特征与瘤源患者肝癌一致 ;种植瘤与原肿瘤源组织MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达差异均无显著性 (P >0 0 5 )。第 2和第 3代模型鼠各 8只 ,种植后 2w 10 0 %存活 ;10～ 14w裸鼠出现衰竭症状后其肝内、肺和骨均有转移。结论该模型保持了人肝癌生物学特性 ,可用于体内研究人肝癌的模型。     

食管癌细胞MUC1过表达对5-氟尿嘧啶及顺铂化疗效果的影响

目的探讨食管癌细胞MUC1过表达对5-氟尿嘧啶及顺铂化疗效果的影响。方法构建MUC1过表达及稳定沉默食管癌细胞株,建立食管癌细胞裸鼠移植瘤模型;顺铂（8mg／kg,d1,d7）及5-氟尿嘧啶（20mg／kg,d1～d6）腹腔注射,测量肿瘤体积及裸鼠体重,绘制生长曲线及体重曲线;计算肿瘤抑瘤率。结果顺铂与5-氟尿嘧啶均能抑制MUC1过表达食管癌移植瘤的生长,裸鼠体重及肿瘤体积与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,且顺铂的抑制效应更明显（P〈0．05）;在MUC1稳定沉默裸鼠无明显的抑制效应。结论顺铂与5-氟尿嘧啶都能抑制MUC1过表达食管癌移植瘤的生长,顺铂的抑制效应更明显,同时对体重的影响也更明显。     

As2O3对人胃癌细胞株SCG-7901裸鼠移植瘤的抗肿瘤机制研究

目的：探讨不同剂量的三氧化二砷（As2O3）对人胃癌细胞株SCG-7901裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤机制。方法：建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为实验组即As2O3低剂量组（1．0mg／kg）、As2O3中剂量组（2．5mg／kg）和As2O3高剂量组（5．0mg／kg）,空白对照生理盐水组及阳性对照5-Fu组（20mg／kg）,分别腹腔连续给药10天,停药后24小时处死裸鼠,称取瘤重,计算抑瘤率,流式细胞仪检测凋亡率及Caspase-3的活性变化。结果：低剂量As2O3组及5-FU组抑瘤率分别为60．6％及78．2％,与生理盐水组比较均有统计学意义（P〈0．05）,低剂量组与5-FU组抑瘤率差异无统计学意义（P〉0．05）;高、中、低剂量As2O3组流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,凋亡率分别为18．32％、17．86％、21．89％,同时伴有Caspase-3活性的增加,其中低剂量As2O3活性增加最显著。结论：低剂量As2O3在体内可通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。     

超声造影对裸鼠肝癌模型肿瘤内微血管血流灌注定量研究的初步探讨

目的探讨低机械指数灰阶谐波超声造影对于肿瘤内微循环血流灌注的定量分析的可行性及应用价值。方法建立裸小鼠皮下种植肝细胞肝癌模型,分别于种植后第27天(27D)、第31天(31D)、第38天(38D)、第59天(59D)、第72天(72D)进行超声造影检查,脱机应用计算机分析软件形成整个肿瘤的时间-强度曲线,比较分析曲线参数随肿瘤生长的变化。结果肿瘤细胞种植后,肿瘤体积随着时间不断增长,TIC参数a2、a3、PI、△SI、AREA、BF在不同的测量时间点之间存在统计学差异(P<0.05)。峰值减半斜率(a2)随着肿瘤生长时间呈下降趋势;峰值强度(PI)、强度增量(△SI)、曲线下面积(AREA)、血流量参数(BF)随着肿瘤生长时间呈上升趋势,但在后期由于肿瘤内产生明显坏死,出现下降变化。结论低机械指数实时谐波超声造影能正确地显示肿瘤内微循环的血流分布,TIC参数定量反映了血流灌注的变化情况。开拓了一种无创监测肿瘤抗血管生成治疗疗效的影像学方法。