蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生促进肝癌发展

目的 探讨蛋白激酶CβⅡ（PKCβⅡ）在肝细胞癌(HCC)发展中的作用机制。方法 免疫印迹法观察PKCβⅡ在肝细胞系L02和肝癌细胞系SK-hep1、HepG2、BEL-7404、7721、Hep3B和huh7中的表达,构建稳定高表达PKCβⅡ的细胞系,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫荧光观察E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达的变化;通过免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和放线菌酮（CHX）追踪实验,观察PKCβⅡ调控E-cadherin、N-cadherin和Snail表达的分子机制;小室迁移和侵袭实验(transwell assay)以及裸鼠尾静脉注射观察PKCβⅡ对肝癌细胞转移的影响;成管实验观察PKCβⅡ对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管形成能力的影响,酶联免疫吸附法（ELISA）观察PKCβⅡ对肝癌细胞上清中血管内皮生长因子A（VEGFA）含量的影响。结果 PKCβⅡ在肝癌细胞系中的表达高于肝细胞系L02,PKCβⅡ促进肝癌细胞形态从鹅卵石样上皮细胞向梭行间质样细胞的转变,通过mRNA水平下调E-cadherin（P<0.05）和上调N-cadherin（P<0.01）的蛋白表达,通过翻译水平上调Snail蛋白表达,PKCβⅡ还促进了肝癌细胞的迁移、侵袭（P<0.01）以及VEGFA的分泌（P<0.01）和血管新生（P<0.01）。结论 蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生在肝癌的发展中有重要作用。     

人血管瘤裸小鼠移植模型形态学动态观察

目的建立人血管瘤裸小鼠异种移植模型并动态观察移植物形态学变化。方法将人婴幼儿血管瘤组织切分为96个小块移植于16只裸小鼠皮下，定期测量瘤体体积，取不同时期移植瘤作HE染色和抗人CD31免疫荧光标记。结果移植瘤大部分（81／96）存活，在移植后1～2个月期间体积明显增大，继而缓慢缩小。组织学观察显示移植瘤早期出现缺血改变，瘤性内皮细胞坏死、问质纤维化，约在移植后1个月出现瘤细胞增生，血管瘤增长，继而瘤内血管扩张，瘤性内皮细胞逐渐减少，血管瘤消退，代以纤维脂肪组织。结论将快速生长的人血管瘤组织移植于裸小鼠体内，移植瘤可存活，其缺血期后生长模式与人血管瘤自然发展过程相似。     

原位裸小鼠肝癌模型的建立及高场MR成像的实验研究

目的:直接注射法制作裸小鼠肝癌模型,小动物专用高场MR(7.0T)观察其表现.方法:抽取H22肝癌荷瘤鼠腹水,直接注射法种植于20只裸小鼠肝脏,术前及术后不同时间应用MR对种植肿瘤进行观察,并与病理切片对照分析.结果:20只模型小鼠肝脏均可见肿瘤病灶,移植成功率100％,3d后MR检查可见单发肿瘤病灶,直径约(0.6±...     

天花粉蛋白对荷人肝癌裸小鼠的抑癌作用

目的 探讨天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对荷人肝癌裸小鼠的抑癌作用。方法 采用人肝癌原位移植模型。将24只裸小鼠分为TCSⅠ组、TCSⅡ组、TCSⅢ组和对照组，TCS剂量分别为0．2mg／kg、0．4mg／kg、0．6mg／kg，对照组用生理盐水0．2ml／只腹腔注射，共10次。第21天称瘤重和裸小鼠体重，计算抑癌率。应用免疫组织化学技术，检测瘤组织中Ki67的表达。结果 对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组平均瘤重分别为0．99g、0．81g、0．22g和0．20g。用药组瘤重与对照组相比有显著性差异(P＜0．05)。TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组抑癌率分别为18．18％、77．78％、79．80％。对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组平均鼠重增加为2．22g、1．22g、0．28g、一2．37g。用药组与对照组鼠重变化有显著性差异(P＜0．05)。对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组Ki67蛋白阳性表达百分率分别为31．33％、29．92％、10．25％和9．67％。TCSⅠ组Ki67百分率与对照组相比无显著性差异(P＞0．05)。TCSⅡ组和TCSⅢ组Ki67百分率与对照组相比有显著性差异(P＜0．05)。结论 TCS对荷人肝癌裸小鼠的移植瘤有明显的抑癌作用。TCS抑制肿瘤细胞增殖可能是其抑癌的机制之一。     

131I-抗ProGRP（31-98）单克隆抗体E-B5放射免疫显像及放射免疫治疗实验研究

目的了解131I标记的胃泌素释放肽前体（ProGRP）单克隆抗体E-B5在荷小细胞肺癌裸鼠的体内分布及放射免疫显像情况,观察131I—E—B5对荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法（1）分别建立荷小细胞肺癌、荷肺腺癌及荷大肠癌裸鼠模型。（2）自荷小细胞肺癌裸鼠尾静脉注射131I—E-B5后1,12,24,48,72和96h处死裸鼠并取各主要脏器组织,计算各时间点的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）和肿瘤／非肿瘤放射性（T／NT）比值。（3）分别对荷小细胞肺癌、荷肺腺癌和荷大肠癌裸鼠模型进行131I—E—B5放射免疫显像,观察移植瘤的显影情况,并计算移植瘤体／对侧相同部位的放射性（T／B）比值。（4）以未经任何治疗处理组为对照,采用瘤内注射法观察比较3．7,7．4,14．8和22．2MBq131I-E—B5和Na131I对荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用。采用SPSS13．0软件处理数据,行两样本均数t检验。结果（1）体内分布研究示：注射后72h,荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤体的放射性摄取达到最高值,为（14．1±2．9）％ID／g,高于其他脏器及组织（t=4．11～8．58,P均〈0．05）,瘤体与各脏器组织的T／NT比值随时间延长而逐渐升高,72h时瘤体与肌肉组织的T／NT比值高达4．67±0．66。（2）放射免疫显像发现：注射131I—E—B5后24h荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤部位放射性明显聚集,随时间延长放射性浓聚程度逐渐增强,72至96h时最为清晰。荷肺腺癌裸鼠移植瘤局部无明显的放射性浓聚。荷大肠癌裸鼠移植瘤模型显像结果与荷小细胞肺癌裸鼠模型显像结果类似,但其T／B比值低于荷小细胞肺癌裸鼠模型（t=4．29,P〈0．01）。注射后72h,荷小细胞肺癌、荷大肠癌及荷肺腺癌裸鼠的T／B比值分别为5．27±0．97,2．28±0．72和1．26±0．65。（3）131I—E-B5对荷小细胞肺癌移植瘤的生长抑制作用明显大于Na131I（t=2．88～17．77,P均〈0．05）。结论131I—E—B5对小细胞肺癌有较好的靶向作用,可以抑制小细胞肺癌移植的生长并破坏肿瘤组织,有望成为一种较为理想的小细胞肺癌放射免疫显像及放射免疫治疗药物,值得进一步深入研究。     

荷人肝细胞肝癌裸鼠模型的建立及其MRI研究

目的　建立一种裸鼠移植性人肝细胞肝癌模型 ,观察其MRI表现。材料与方法　将对数生长期人肝细胞肝癌FHCC 98制成细胞悬液 (1× 10 7/ml ) ,取 0 .2ml分别注射于裸鼠胁部皮下 ,建立裸鼠肝癌动物模型。应用MR平扫及静脉注射钆 喷替葡甲胺 (Gd DTPA)后增强扫描T1WI观察其生长及影像学表现。扫描后处死裸鼠 ,对应扫描切面取肿瘤标本行病理学观察。结果　裸鼠模型于 1周左右生长出可触及的肿瘤 ,3周左右肿瘤生长直径可达 0 .5～ 0 .8cm。 10例裸鼠移植性人肝细胞肝癌模型成瘤率为 10 0 % (10 / 10 )。MRI上表现为长T1长T2 信号 ,边缘较清晰 ,有轻微～中等强化。病理学检查示裸鼠移植性人肝细胞肝癌与人体肝细胞肝癌肿瘤标本所见相似。结论　本研究所建立的裸鼠移植性人肝细胞肝癌模型成瘤率高 ,移植瘤生长良好 ,便于MRI观察 ,是一种适合于分子影像学研究的动物模型。     

脐血CD133+细胞移植治疗裸鼠实验性缺血性心肌病

目的探讨人脐血CD133+细胞移植于缺血心肌后的增殖分化情况和对缺血心肌梗塞面积和纤维化程度改善情况.方法从新鲜脐血中纯化的CD133+细胞,PKH26标记后注射于结扎冠状动脉后的裸鼠缺血心肌内,并以无血清培养基注射动物为对照组.2周后观察移植细胞的分化情况,检测心肌纤维化程度和梗塞面积的变化.结果CD133+细胞移植后2周,对照组梗塞面积(26.3±3.8)%,纤维化程度(12.8±1.1)%;而实验组梗塞面积(7.8±1.3)%,纤维化程度(5.5±0.7)%(P<0.05).结论CD133+细胞移植能明显减少实验动物心肌梗塞面积和纤维化程度.     

重构型Caspase-3对人脑胶质瘤抑瘤效应的实验研究

目的 探讨重构型Caspase-3对裸鼠皮下人脑胶质瘤生长的影响.方法 用脂质体包裹法将重构型Caspase-3基因的真核表达载体pcDNA-Rev-Caspase-3注入裸鼠皮下SHG 44人脑胶质瘤内,观察肿瘤生长情况并计算抑瘤率,结合病理组织学、电镜确定重构型Caspase-3对人脑胶质瘤的作用.结果 重构型Caspase-3在荷瘤裸鼠瘤体内获得表达,裸鼠肿瘤生长受到抑制,抑瘤率达到46.1%.结论 重构型Caspase-3能够促进肿瘤凋亡,导致肿瘤细胞死亡,抑制人脑胶质瘤生长.为进一步研究胶质瘤的基因治疗打下了基础.     

辐射促进多药耐药反义寡核苷酸逆转耐药的实验研究

目的探讨辐射促转染的多药耐药基因（mdr1）反义寡核苷酸（ASON）逆转肿瘤细胞KBv200的耐药效果。方法应用MTT法比较脂质体介导的ASON直接转染与联合辐射转染的情况下KBv200细胞对长春新碱（VCR）的半数抑制量（IC50），再利用RT-PCR方法和流式细胞仪检测两种不同的转染方法对KBv200细胞的mdr1-mRNA及其表达产物P-糖蛋白（P-gp）的调控情况。采用耐药细胞株KBv200移植于裸鼠皮下，肿瘤局部2Gy^60Coγ射线照射后1h，瘤内注射脂质体介导的mdr1ASON，经VCR联合化疗。结果联合照射的ASON组明显优于未照射组（P〈0．05）。KBv200细胞的IC50、mdr1-mRNA的表达水平及P-gp的阳性率，均明显低于未照射组（P〈0．05）。联合照射组与未照射组肿瘤体积和肿瘤重量差异有统计学意义（P〈0．01）。结论辐射促转染的mdr1 ASON对肿瘤细胞具有较强的耐药逆转作用。