热休克蛋白70对H2O2诱发大鼠心肌细胞凋亡的保护作用

摘要目的:探讨热休克蛋白70(HSP₇₀)对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:体外培养大鼠心肌细胞同时温度诱导细胞产生HSP₇₀,用过氧化氢(H₂O₂)造成心肌细胞损伤。采用免疫组化、DNALadder、流式细胞仪、细胞色素C氧化酶及琥珀酸脱氢酶比活力的测定、电镜观察等作为检测指标的方法。结果:温度诱导后HSP₇₀在胞浆中大量表达,H₂O₂损伤组与HSP₇₀保护组凋亡率(12.18±1.94,6.42±0.86,P<0.01)、细胞色素C氧化酶比活力(5.824±1.949,10.375±2.513)及琥珀酸脱氢酶比活力(0.884±0.152,1.174±0.214,P<0.01)有显著差异。电镜观察损伤组细胞膜、细胞器损伤明显,并出现凋亡小体。结论:HSP₇₀可延迟细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。      

1, 6-二磷酸果糖抑制阿霉素致大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

摘要目的:探讨1,6-二磷酸果糖(FDP)对阿霉素(ADM)导致大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:24只Wistar大鼠随机分为3组:对照组、ADM组、FDP干预组。用比色法测定心肌组织的丙二醛(MDA)含量、NO^-₂/NO^-₃含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用TUNEL法检测心肌细胞凋亡;用原位杂交法检测心肌细胞的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA表达。结果:FDP干预组心肌组织的NO^-₂/NO^-₃含量、MDA含量及心肌细胞的iNOSmRNA表达水平、BaxmRNA表达水平、凋亡数量均明显低于ADM组(P＜0.01),而其心肌组织的SOD活性、GPx活性及心肌细胞的Bcl-2mRNA表达水平均明显高于ADM组(P＜0.01)。结论:FDP拮抗ADM所致心肌细胞的Bcl-2mRNA表达降低、BaxmRNA表达增加而抑制ADM导致心肌细胞凋亡。      

PKC和ERK在大鼠心肌缺氧预处理延迟保护机制中的作用

摘要目的:探讨蛋白激酶C(PKC)和细胞外信号调节激酶(ERK)在大鼠缺氧预处理(APC)延迟保护机制中的作用及二者之间的相互关系。方法:建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤和APC延迟心肌保护模型,用PKC兴奋剂(PMA)模拟预处理延迟保护模型,分别应用PKC和ERK抑制剂干预模型,并在各组相当于预处理后10min取材检测ERK活性。以实验终点检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞存活率、心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量作为心肌细胞损伤的指标。结果:预处理组心肌细胞存活率和SOD含量均显著高于A/R组(P＜0.05),培养液内LDH漏出和心肌细胞内MDA含量显著低于A/R组(P＜0.05),ERK活性显著高于A/R组(P＜0.05),应用PMA激活PKC可以模拟预处理的保护作用;ERK阻滞剂PD98059消除了缺氧和PMA的预处理保护作用,并抑制了预处理后的ERK活性的升高;PKC抑制剂多粘菌素B对APC引起的ERK激活及延迟保护作用无明显影响,但可抑制PMA诱导的保护现象。结论:ERK活化可能是APC延迟保护机制中的必须信号转导途径;PKC活化可以通过激活ERK启动缺氧预处理的延迟保护机制。      

不同鼠龄大鼠心肌组织中钙敏感受体的表达及与缺氧-再灌注损伤的关系

目的：观察不同鼠龄大鼠心肌组织钙敏感受体（CaSR）的表达规律及与心肌缺氧-再灌注损伤的关系。方法：采用RT-PCR技术,检测不同情况下心肌组织CaSR的表达差异;Lagendorff离体心脏灌流的方法复制心脏缺氧-再灌注模型;用透射电镜观察心肌超微结构的变化。结果：大鼠出生后,心肌组织中CaSR的表达逐渐升高,1个月时达到高峰,2、3个月保持在出生水平,此后上升并维持在较高水平。大鼠心肌缺氧40min及再灌注1h、2h心肌组织CaSR的mRNA表达升高,再灌注3h、4h后降低;同时随再灌注时间延长,心肌超微结构损伤愈严重结论：大鼠心肌组织存在钙敏感受体,其表达与月龄有一定关系,并可能参与心肌缺氧-再灌注损伤的发生。     

TGF-β1及其信号蛋白Smad3对大鼠心肌细胞肥大的作用

目的：探讨转化生长因子β1（transforminggrowthfactor,TGF-β1）及其信号蛋白Smad3在诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法：培养新生大鼠心肌细胞,流式细胞仪检测心肌细胞总蛋白含量,RT-PCR法检测胚胎抗原ANFmRNA（atrialnatriureticfactor）及Smad3mRNA的表达,Westernblotting检测Smad3蛋白的表达。结果：不同浓度TGF-β1均能明显增加心肌细胞总蛋白含量和ANFmRNA的表达,Smad3基因反义寡核苷酸能抑制TGF-β1诱导的心肌细胞肥大,TGF-β1诱导肥大的心肌细胞内信号蛋白Smad3表达的增加。结论：TGF-β1及其信号蛋白Smad3可能参与诱导大鼠心肌细胞肥大的病理过程。     

二氮嗪预处理对大鼠心肌线粒体呼吸功能与呼吸酶活性的影响

目的：探讨特异性线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对离体大鼠缺血再灌注心肌线粒体呼吸功能和酶活性的影响。方法:采用Langendorff装置建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型,将72只SD大鼠随机分为正常组（NOR）、缺血再灌注组（IR）、二氮嗪预处理组（DIA）、5－羟葵酸拮抗二氮嗪组（5HD-DIA）。NOR组在平衡灌注20min后续灌100min,IR组在平衡20min后续灌30min,继后全心缺血40min,复灌30min。DIA组在缺血前给予含二氮嗪50μmol/L的K-H液10min后,全心缺血40min,复灌30min。5HD-DIA组在二氮嗪预处理之前先给予含5－羟葵酸100μmol/LK-H液10min,其余同二氮嗪预处理组。分别于平衡末、缺血前及再灌注末取心肌并分离、制备线粒体,测定各组线粒体的呼吸功能、呼吸酶活性。结果:再灌注末DIA组的线粒体呼吸功能（呼吸控制率、磷氧比、3态呼吸速率）和呼吸酶活性（NADH氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C氧化酶）明显优于IR组和5HD-DIA组（P0.05)。结论:线粒体钾通道开放剂二氮嗪预处理能够保护缺血/再灌注损伤心肌的线粒体,其机制与保护线粒体的呼吸功能及呼吸链的酶活性有关。     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

左旋卡尼汀对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化、凋亡影响的体外研究

目的：探讨左旋卡尼汀（L-carnitine）对缺氧/复氧（A/R）诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化、抗凋亡效应及其可能的作用机制。方法：采用原代培养乳鼠心肌细胞作为模拟缺血再灌注损伤实验模型,实验分3组：①正常对照组（control）;②A/R组:缺氧120min,复氧240min;③L-carnitine组：A/R前2h加用L-carnitine设4个浓度梯度,1组20mg/L,2组50mg/L,3组100mg/L,4组200mg/L。观察各组细胞经A/R损伤后,细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的变化情况,并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果：A/R组SOD活性、SDH活性明显低于对照组,MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组(P＜0.05）;在L-carnitine用药组,随给药浓度的增加,MDA含量逐渐恢复正常,SOD活性、SDH活性逐渐回升,而且细胞凋亡率下降,各药物治疗组与A/R组比较各实验指标均显著差异(P＜0.05);A/R组心肌细胞超微结构损伤明显重于药物治疗组。结论:左旋卡尼汀对心肌细胞具有保护作用,其作用在一定范围内呈剂量依赖关系。     

丹参在常氧、急性低氧及氧反常等条件下对心室肌细胞L-Ca电流的影响

目的：用不同浓度的丹参NaCl溶液作用于常氧、低氧、及氧反常的豚鼠心室肌细胞上,观察L-Ca通道电流的相对变化,以期解释丹参减轻及阻止细胞内钙超载的机理。方法：使用全细胞膜片钳技术研究心室肌细胞L-Ca通道电流的变化。结果：无论是常氧、缺氧和缺氧后复氧状态下,浓度为32、320、3200mg/L的丹参制剂都能有效降低L-Ca通道电流幅值并呈浓度依赖性。此外,低浓度32mg/L的丹参液对缺氧和氧反常细胞的作用更大于常氧细胞。结论：丹参溶液能有效降低低氧和氧反常造成的异常增大的L-Ca电流幅值,阻止钙超载发生。     

通脉汤含药血清对缺氧心肌细胞游离钙及L型钙通道的作用

摘要目的:研究通脉汤对缺氧心肌细胞钙离子超负荷的保护性作用机制。方法:采用血清药理学方法及建立心肌细胞体外缺氧模型,直接测定不同条件下心肌细胞内的游离钙离子浓度,并通过RT-PCR方法分析细胞膜上L型钙离子通道的表达。结果:在通脉汤含药血清干预下缺氧心肌细胞的游离钙离子浓度显著降低(376.89±78.78nmol/L),达到与左旋氨氯地平相当的水平,并同时降低缺氧条件下的细胞膜L型钙离子通道的表达,而左旋氨氯地平对L型钙通道的表达没有影响。结论:通脉汤可以减轻缺氧心肌细胞钙超负荷,并与钙拮抗剂起到协同作用。