结核分枝杆菌链霉素耐药性的噬菌体检测技术研究

目的 建立结核分枝杆菌（结核菌）链霉素耐药性的噬菌体快速检测技术，并探讨其临床应用价值。方法 应用分枝杆菌噬菌体感染结核菌建立链霉素耐药性的噬菌体检测技术，并对最佳测定条件进行探讨；将所建立的方法用于38株世界卫生组织药敏质控株和372株临床分离株链霉素耐药性测定，并与绝对浓度法和Bactec 960药敏结果比较，对不符合菌株进行最低抑菌浓度（MIC）和rpsL耐药基因检测。结果 链霉素终浓度5μg／ml作用24h、噬菌体10^8噬菌体形成单位／ml感染60min、杀毒剂5％室温作用5min为选择的检测条件。噬菌体法检测38株药敏质控株结果完全符合。372株临床分离株链霉素耐药性检测结果表明，如以绝对浓度法药敏结果为判断标准，则本法敏感性为97.4％、特异性为91．0％、阳性预测值为81.7％、阴性预测值为98.9％、准确性为92.9％；如以Bactec 960药敏结果为判断标准，则本法敏感性为97.2％、特异性为97.1％、阳性预测值为94.6％、阴性预测值为98.5％、准确性为97．1％。有22株噬菌体法药敏结果与常规药敏试验结果不符，其中的11株噬菌体法检测结果与MIC和rpsL耐药基因检测结果相同。结论 噬菌体法检测链霉素耐药性快速、简便，具有很高的敏感性和特异性，可作为结核菌链霉素耐药性的快速检测方法。     

多药耐药基因多态性和单倍体对环孢素A血药浓度的影响

目的探讨中国健康志愿者中多药耐药基因(MDR1)12外显子C1236T、21外显子G2677T/A和26外显子C3435T多态性及3个位点单倍体连锁不均衡性对环孢素A(CsA)药代动力学特性的影响。方法高效液相色谱法(HPLC)测定20名健康男性单次口服CsA500mg后,24h中不同时间点的血药浓度。采用聚合酶链反应(PCR)结合基因测序法测定3个位点的基因多态性和单倍体类型。结果20名男性健康志愿者中,C1236T位点1名为CC型,8名为CT型,11名为TT型;G2677A/T位点4名为GG型,7名为GT型,4名为AT型,5名为TT型;C3435T位点5名为CC型,11名为CT型,4名为TT型;MDR1的C1236T和G2677A/T的基因多态性与峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0inf)差异均无统计学意义(均P>0.05),C3435T的基因多态性与Cmax无相关性(P>0.05),而与AUC0inf相关(P<0.05)。CC型、CT型和TT型的Cmax分别为2124.7±179.4ng/ml、1934.2±372.8ng/ml和1765.2±415.6ng/ml;AUC0inf分别为13922.4±2881.5ng/h-1·ml、11511.8±2192.1ng/h-1·ml和8514.9±1063.4ng/h-1·ml;至少含有1个C等位基因的基因型(CC型和CT型),二者的AUC0inf比TT型增高49%。单倍体分析表明,26与12和21外显子间存在单核苷酸多态性的连锁不均衡性,不同单倍体类型对CsA药动力学特性无影响(P>0.05)。结论MDR1C3435T的多态性可能是口服CsA后,生物利用度变异大的影响因素。     

BiPAP呼吸机治疗重症肺结核继发Ⅱ型呼吸衰竭20例护理体会

目的:探讨经口/鼻面罩双水平气道正压通气(BiPAP)治疗重症肺结核继发Ⅱ型呼吸衰竭的护理方法.方法:将40例重症肺结核继发Ⅱ型呼吸衰竭患者随机分为治疗组和对照组各20例,治疗组采用BiPAP 常规治疗,对照组仅采用常规治疗;比较两组治疗前、治疗2h后、24h后动脉血气及呼吸频率、心率的改变.结果:治疗组BiPAP治疗后动脉血气分析中的PaO2、pH值、呼吸频率、心率较治疗前均明显改善,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05);平均住院天数及病死率均明显少于对照组(P＜0.05).结论:BiPAP可明显改善重症肺结核继发Ⅱ型呼吸衰竭的症状,缩短住院时间,防止并发症的发生.     

泛耐药鲍曼不动杆菌ICU交叉感染防控策略

目的探索防控泛耐药鲍曼不动杆菌交叉感染的有效方法。方法2005年收集RICU患者分离的泛耐药鲍曼不动杆菌共7株,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分型,分析相关临床资料,实施"降阶梯防控策略"。结果4例患者检出的5株泛耐药鲍曼不动杆菌药物敏感试验相同,存在交叉感染高危因素,PFGE图形一致,明确存在交叉感染;采取"降阶梯防控策略"后,无其他患者发生交叉感染。结论"降阶梯防控策略"对控制泛耐药菌交叉感染有重要临床意义。     

仿生人工腰椎及椎间盘复合体的设计及活动度分析

目的设计一种既能重建腰椎椎体高度又能保留相应椎间隙运动功能的可动腰椎假体用于治疗腰椎肿瘤、结核、骨折等疾病。方法提取我国60名健康成年男性的腰椎CT数据进行三维重建解剖参数采集,并对解剖数据进行统计学分析,根据统计结果设计仿生人工腰椎及椎间盘复合体,利用3D打印技术制作假体光敏树脂模型并进行活动度评价。结果椎体前后高度比中间大,上下终板的正中矢状径与冠状径均大于中间水平面,上下终板与侧面呈70余度夹角,同一椎体上下终板凹陷深度存在显著差异(0.05)。椎间盘厚度均呈前高中高后高的规律,前后高度之间具有显著差异(0.05)。仿生人工腰椎及椎间盘复合体由椎体部件、椎间盘部件及自攻锁钉螺钉三部分组成。椎体部件侧面设有植骨槽与羟基磷灰石涂层,其可动装置为防脱球窝关节,关节面进行高度抛光处理。假体的构成材料为在临床上被广泛应用的具有良好组织相容性的医用钛合金与高分子复合材料。结论 CT三维重建可以较准确的获得腰椎的解剖参数,理论上仿生人工腰椎及椎间盘复合体可在一定程度上满足腰椎的生理功能,并能通过调整椎间盘部件的大小来改变运动范围,但是该假体的屈服轻度、耐磨、耐腐蚀等性能尚需要体外力学测试及动物体内实验的进一步研究。     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.     

脊柱结核与布氏杆菌性脊柱炎的MRI表现研究

目的探索脊柱结核与布氏杆菌性脊柱炎的磁共振(magnetic resonance image,MRI)表现差异。方法回顾性分析我院自2012年1月至2013年10月收治的10例脊柱结核与12例布氏杆菌性脊柱炎患者的临床资料,所有患者均经MRI扫描,对比分析其MRI表现差异。结果脊椎结核椎体破坏严重,常伴有明显的后凸畸形和多节段椎旁脓肿,甚至邻近器官结核。布氏杆菌性脊柱炎椎体破坏较轻,脓肿局限,一般只波及邻近椎体。结论根据典型的MRI的表现差异,可以区分典型的脊柱结核与布氏杆菌性脊柱炎。     

细胞因子在肺结核病理生理过程及治疗随访中的临床意义

目的 探讨肺结核患者治疗前后血清细胞因子水平变化的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附分析(ELISA)测定215例肺结核患者治疗前后和60例正常对照组血清细胞因子IL-2,IL-10,IL-17,IL-18水平,并进行对比性分析,测定了215例肺结核患者治疗后的痰菌转阴率和有效率,通过测定灵敏度、特异度和准确度等指标比较了单项和多项细胞因子在肺结核患者诊断中的变化.结果 215例肺结核患者治疗前血清IL-2和IL-10水平较之60例正常对照组明显降低(tIL-2=3.216,tIL.10=3.164,P均＜0.01),而IL-17和IL-18水平明显增高(tIL-17=2.942,P＜0.01,tIL-18 =2.175,P均＜0.05),治疗后血清IL-2和IL-10水平明显增高(tIL-2=2.237,tIL-1o=2.248,P均＜0.05),而血清IL-17的水平降低(tIL-17 =2.120,P＜0.05),血清IL-18恢复至正常水平(tIL-18=1.873,P＞0.05).215例肺结核治疗后的痰菌转阴率为87.00％,有效率为92.1％.结论 细胞因子参与肺结核的病理生理过程,并是治疗后随访的有价值指标.单项细胞因子测定在肺结核诊断中的价值较低,四项联合测定的灵敏度,特异度和准确度分别为69.8％,65.0％和72.0％.     

肺癌多药耐药机制及其逆转方法的研究进展

肺癌是严重影响人类生存的恶性肿瘤之一,其死亡率已居全球恶性肿瘤之首.目前主要采取以化疗为主的综合治疗方案,但临床治疗失败率很高,主要原因是肺癌细胞对化疗药物产生多药耐药性(multi-drug resistance,MDR).因此,逆转耐药已经成为治疗肺癌的关键.本文就近年来对肺癌耐药机制及其逆转策略的研究进展作一综述.     

结核分枝杆菌重组蛋白CFP-10-ESAT-6-PPE68的表达、纯化与多克隆抗体的制备

目的构建重组质粒pET32a（＋）-cfp-10-esat-6-ppe68,得到重组结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白及兔抗结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白的多克隆抗体,为下-步应用于临床结核病的检测奠定基础。方法将结核分枝杆菌cfp-10-esat-6-ppe68基因转入质粒pET32a,将经PCR、酶切、序列测定鉴定为阳性的质粒转人大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达重组蛋白,经亲和层析法纯化重组蛋白后用凝血酶切除载体蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。结果成功构建重组质粒表达体系pET32a（＋）-cfp-10-esat-6-ppe68,制得去除载体蛋白的高纯度重组蛋白CFP-10．ESAT-6-PPE68,并成功得到高纯度抗结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6。PPE68蛋白的抗体。结论成功表达结核重组蛋白并制得高纯度多克隆抗体。