结核分枝杆菌Rv0440 CTL表位肽的免疫原性研究

目的 体外鉴定结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）Rv0440蛋白序列中表位肽362 370 aa和369-377 aa的HLA A＊0201限制性CD8＋ CTL表位的免疫原性,为基于表位的结核疫苗研究提供实验依据.方法 根据T2细胞HLA-A＊ 0201分子与多肽结合力分析实验结果,选取结核分枝杆菌Rv0440蛋白质氨基酸序列中对HLA-A＊ 0201分子高亲合力的Rv0440 1（362-370 aa,KLQERLAKL）和Rv0440-2（369 377 aa,KLAGGVAVI）作为候选表位肽.用候选表位肽刺激PPD（＋＋＋）健康志愿者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）检测细胞分泌IFN γ的水平.用候选表位肽诱导特异性CTL细胞,检测特异性CTL细胞对负载表位肽的T2细胞的杀伤活性,观察Rv0440-1和Rv0440 2的HLA-A＊ 0201限制性CD8＋ CTL表位的免疫原性.结果 ELISPOT实验结果显示,表位肽Rv0440-1能够明显诱导HLA-A＊ 0201（＋）、PPD（＋＋＋）健康志愿者PBMC分泌IFN γ（P＜0.05）;且表位肽Rv0440-1负载DC诱导的CTL在效靶比为10：1时对负载相应表位肽的T2细胞的特异性杀伤活性高于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,表位肽Rv0440 2没有诱导能力.结论 表位肽Rv0440-1（362-370 aa,KLQERLAKL）具有良好的免疫原性,是有效的结核分枝杆菌的HLA-A＊0201限制性CTL表位.     

西藏藏族结核分枝杆菌临床分离株的MIRU-VNTR基因多态性分析与评价

目的 了解西藏地区藏族人群中结核分枝杆菌24位点MIRU-VNTR的基因多态性及其评价.方法 应用欧盟推荐的24位点MIRU-VNTR分型方法,将本次分型结果与MIRU-VNTRplus数据库进行比对,并应用BioNumerics5.0软件进行聚类分析.结果 577株结核分枝杆菌分为347种基因型,其中299株分为69个基因簇,另278株表现为独特的基因型.MIRU31、Qub11b2、Qub26、Qub4156c、Mtub21、MIRU20和MIRU26七个位点对西藏地区藏族人群中结核分枝杆菌临床分离株的分辨力较高,另17个位点的分辨力较低,其中MIRU24位点分辨率为0.结论 西藏地区藏族人群中结核分枝杆菌MIRU-VNTR分型具有良好的多态性,且该地区以现代型结核分枝杆菌为流行优势菌.     

B细胞免疫应答与抗结核分枝杆菌感染的研究进展

已有大量的研究阐释了细胞免疫机制在抵御结核分枝杆菌方面的重要性。然而,最近的研究表明,B淋巴细胞通过与细胞免疫应答产生多种相互作用扮演了一个曾被低估的角色,形成宿主防御结核分枝杆菌的一个重要方面。因此,作者提倡在结核病免疫学中应有一种进步性的视角,即细胞免疫和体液免疫并不是相互排斥的。本文对最近支持B细胞在结核分枝杆菌感染方面的重要作用进行了综述。     

耐药肺结核患者支气管肺泡灌洗液CD_4~+ CD_(25)~+ Treg细胞检测

目的研究耐药肺结核患者支气管灌洗液CD+4CD+25Treg细胞水平与非耐药肺结核患者之间的差异。方法采用流式细胞技术测定40例耐药肺结核患者、60例非耐药肺结核患者及50例健康体检者外周血及支气管肺泡灌洗液CD+4CD+25Treg细胞水平,观察三组之间的差别。结果耐药组外周血CD+4CD+25Treg细胞水平(15.50±1.49)%,非耐药组(11.62±2.34)%,对照组(6.74±2.13)%,三组间有统计学差异(P0.05);耐药组支气管肺泡灌洗液CD+4CD+25Treg细胞水平(19.33±2.15)%,非耐药组(15.56±1.98)%,两组间有统计学差异(P0.05)。结论调节性T细胞在耐药肺结核局部病灶中发挥重要的免疫抑制作用,它与肺结核耐药机制的形成可能有关。     

实时定量qPCR检测耐异烟肼结核分枝杆菌Ag85B和38ku蛋白mRNA表达水平

目的运用实时定量qPCR(quantitative real-ti me PCR)检测结核分支杆菌耐异烟肼菌株和敏感株Ag85B和38 ku蛋白编码基因(fbpB、psts1)的表达水平,分析结核分支杆菌耐异烟肼株和敏感株的蛋白抗原在转录水平的差异性。方法根据GenBank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1及内参基因Sigа的特异引物,将fbpB、psts1及Sigа扩增片段克隆入载体pMD18-Tsi mple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用实时定量PCR检测22株耐异烟肼菌株及25株敏感菌株(含H37Rv标准株)中fbpB、psts1的表达水平。结果耐异烟肼菌株的fbpB表达水平为0.65±0.22,敏感菌株fbpB表达水平为0.36±0.13,差异有统计学意义(t=5.683,P<0.01);耐异烟肼菌株的psts表达水平为13.63±4.16,敏感菌株psts1表达水平为9.86±2.79,差异有统计学意义(t=3.869,P<0.01)。结论应用实时定量PCR检测耐异烟肼菌株的fbpB、psts1的表达水平显著高于敏感菌株,为耐药结核的实验室诊断提供分子标识。     

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌阿米卡星耐药性方法的建立及应用评价

目的 建立结核分枝杆菌阿米卡星(Am)耐药性的噬菌体生物扩增法(PhaB)快速检测技术,并探讨其临床应用价值。 方法 通过不同菌量及药物浓度的筛选,建立PhaB测定结核分枝杆菌阿米卡星药敏检测方法;用该方法对108株结核分枝杆菌临床分离株进行了阿米卡星药敏检测,同步进行Bactec MGIT 960的Am药敏检测,对2种方法的检测结果进行比较分析。结果不符合的菌株测定其Am的最低抑茵浓度(MIC)。 结果 以细菌接种量10^-3 mg／ml、药物浓度2 μg／ml、37℃作用48-h为药敏最佳检测条件,噬菌体检测108株结核分枝杆菌临床分离株阿米卡星敏感82株、耐药26株,Bactec MGIT 960检测敏感80株、耐药28株;2法测定均为敏感79株、均为耐药25株。以Bactec MGIT 960测定结果为判断标准,则PhaB的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值及符合率分别为89.3%、98.8%、96.2%、96.3%、96.3%。 结论 PhaB检测结核分枝杆菌的Am耐药性有较高的敏感性、特异性和准确性,整个检测只需3 d,且操作简单、不需特殊仪器设备,可作为 M .TB临床分离株Am药敏快速检测备选方法之一。     

转化生长因子β和气管支气管结核

转化生长因子β是一类多功能的细胞因子超家族,能调节细胞的增殖、分化、附着、迁移、凋亡和细胞外基质的合成等多种细胞生物学活性,在疾病的发生发展过程中起着重要作用.本文将阐述转化生长因子β家族的成员、结构和生物学作用,及其与气管支气管结核关系的研究进展.     

山东省社区结核病控制项目实施效果分析

目的 分析山东省省级结核病控制项目“完善和发挥社区卫生服务机构在结核病控制工作中的作用”实施的效果,为山东省结防工作进社区探索经验。 方法 收集项目年度山东省4个项目县（区）的项目季报表,及项目实施前项目地区收集的基线调查数据和社区肺结核病人的调查问卷,对项目实施情况进行分析评价。 结果 项目实施期间,4个项目区社区卫生服务机构肺结核患者及疑似患者报告率达78.9%;转诊率为67.7%;转诊到位率为84.1%,追踪率100%,追踪到位率为92.7%。同时,对辖区内肺结核患者均按照项目要求进行了督导和管理。 结论 项目促进了项目地区社区卫生服务机构结核病防治工作的开展,为结核病工作进社区提供了理论基础。     

不同毒力结核杆菌的纯化蛋白质衍生物对人巨噬细胞凋亡的诱导及其与Toll样受体-2的相关性

目的 了解两种不同毒力结核杆菌的纯化蛋白衍生物刺激下人单核-巨噬细胞(THP-1)凋亡的差异及其与Toll样受体-2(TLR-2)的相关性.方法 分别用等浓度的高毒力结核杆菌衍生蛋白(H37Rv-PPD)和低毒力结核杆菌衍生蛋白(BCG-PPD)在3、8、15和24 h刺激分化成熟的THP-1细胞;Hochest染色后观察细胞凋亡及坏死情况.流式细胞仪检测细胞Annexin V蛋白以判定凋亡及TLR-2表达情况;加入TLR-2阻断剂后,再用流式细胞仪测定细胞表面TLR-2的阻断效果及凋亡情况.结果 BCG-PPD刺激下细胞以凋亡多见,而H37Rv-PPD刺激下细胞核则多呈坏死状.凋亡率随时间升高,第24小时凋亡比例高达30.2%,而同时间点TLR-2的比例为8.8%;应用TLR-2阻断剂后,每个时间点TLR-2表达比例均在3%以下,对应时间点凋亡比例下降,第24小时凋亡比例仅为10.5%.H37Rv-PPD可引起TLR-2高表达,第24小时TLR-2表达率为17.2%,该时间点凋亡率仅为7.7%;TLR-2阻断后,其表达率在对照波动范围内,但凋亡率与TLR-2未阻断前相比变化不大.结论 BCG-PPD主要诱导THP-1的凋亡,且与TLR-2有一定的相关性;而H37Rv-PPD主要诱导THP-1的坏死.

Abstract：

Objective To study the cell death in macrophages (THP-1) stimulated with different agonists (H37Rv-PPD or BCG-PPD) and to investigate the relationship between Toll like receptor (TLR)-2 and THP-1 apoptosis. Methods H37Rv-PPD and BCG-PPD were used to stimulate THP-1 cells for 3 h, 8 h, 15 h and 24 h, respectively with or without TLR-2 blockade. Cells were analyzed by flow cytometry to detect the TLR-2 expression. Annexin V staining and Hochest staining were performed to evaluate apoptosis. Results The apoptosis cells were increased when stimulated with BCG-PPD and the percentage was 30.2% at 24 h, which were confirmed by Hochest staining.However, the expression of TLR-2 did not increase simultaneously with percentage of 8.8% at 24 h.Nevertheless, most cells presented with necrosis form when stimulated with H37Rv-PPD and the expression of TLR-2 remained at high level with the percentage of 17.2% at 24 h, while the percent of apoptosis rate was only 7.7%. Under treatment of TLR-2 antibodies, the percentage of apoptosis decreased to 10.5% at 24 h of BCG-PPD stimulation and TLR-2 expressions were down-regulated to less than 3% at all time points; but after H37Rv-PPD stimulation, the percentage of apoptosis and TLR-2 expression did not changed obviously. Conclusions The attenuated BCG-PPD induces THP-1 apoptosis predominately, which is partially correlated with TLR-2 expression. While virulent H37Rv-PPD induces THP-1 necrosis predominately.     

Prediction of the duration needed to achieve culture negativity in patients with active pulmonary tuberculosis using convolutional neural networks and chest radiography

BackgroundWe aimed to predict the duration needed to achieve culture negativity in patients with active pulmonary tuberculosis using convolutional neural networks (CNNs) and chest radiography.MethodsMedical records were searched for eligible patients with culture-confirmed active pulmonary tuberculosis. The eligible patients were randomly assigned to the training dataset group (N = 180) and the validation dataset group (N = 59). Posteroanterior X-ray radiographs in the standing position were obtained at diagnosis. The image data were augmented by a factor of 10 by randomly shifting and rotating the original image. Thus, 1800 images (112 × 112 pixels, 8-bit grayscale) from 180 patients in the training dataset group were used for training the CNN model. The model performance was evaluated on the validation dataset.ResultsThe values predicted by the CNN model were significantly associated with the actual values (Pearson's correlation coefficient 0.392, p = 0.002). The mean absolute error was 18.0. The visualization of the layer outputs suggested that the CNN model recognized some of the chest radiographic findings that were useful in predicting the duration needed to achieve culture negativity.ConclusionsThe CNN model was useful for predicting the duration needed to achieve culture negativity in active pulmonary tuberculosis, although the accuracy was unsatisfactory. This study suggests that chest radiography findings are as important as other clinical factors for prediction and could be learned by the machine.