基质金属蛋白酶-9基因启动子甲基化在非小细胞肺癌治疗中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因启动子甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测NSCLC患者及健康人外周血白细胞MMP-9启动子的甲基化状态。用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血浆MMP-9的含量及RT-PCR检测外周血白细胞中MMP-9mRNA的表达水平。结果 NSCLC组MMP-9基因启动子平均甲基化密度显著降低,与对照组相比有显著性差异(23.5±4.7vs40.6±3.8,P<0.05);NSCLC组MMP-9mRNA表达显著增强,与对照组相比有显著性差异(1.35±0.31vs0.76±0.07,P<0.05);NSCLC组MMP-9含量显著增高,与对照组相比有显著性差异(597±143vs242±65,P<0.05)。MMP-9甲基化状态与NSCLC患者的肿瘤组织类型、TNM分期无关(P>0.05);MMP-9mRNA表达及MMP-9蛋白水平与NSCLC的组织类型无关(P>0.05),但和TNM的分期有关:Ⅲ期、Ⅳ期MMP-9mRNA表达及MMP-9蛋白水平均明显高于Ⅱ期(P>0.05)。经相关性分析,MMP-9mRNA表达与其基因启动子甲基化密度变化成正相关(R=0.79,P<0.05);MMP-9含量与其基因启动子甲基化密度变化成正相关(R=0.82,P<0.05);MMP-9含量与MMP-9mRNA的表达成正相关(R=0.77,P<0.05)。结论 NSCLC患者MMP-9基因启动子处于低甲基化状态,其通过增强MMP-9mRNA表达及促进MMP-9蛋白分泌在肿瘤的发生发展中发挥作用。     

采用甲基化特异性聚合酶链反应研究急性白血病p15基因CpG岛甲基化

目的　探讨ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化作为各型急性白血病通用的基因标志物的可行性。方法　采用甲基化特异性聚合酶链反应（ＭＳＰ）法检测４０ 例初治或复发急性白血病、５ 例完全缓解期白血病及８ 例（ 份） 正常骨髓的ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化,并对ＭＳＰ产物进行序列测定。结果　急性白血病患者ｐ１５ 基因ＣｐＧ岛甲基化阳性率为８０％ ,ＡＭＬ与ＡＬＬ的阳性率（分别为８３％ 和７３％） 差异无显著性;５ 例完全缓解期白血病患者中１ 例ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化阳性（该例患者不久白血病复发）;正常骨髓８ 例均为阴性,表明ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化为白血病细胞所特有;ＭＳＰ产物测序结果与理论结果相符合,ＭＳＰ敏感度可达１０ －３。结论　ｐ１５ ＣｐＧ岛甲基化在各型急性白血病中均有很高的发生率,可以作为各型急性白血病通用的微量残留病（ＭＲＤ） 指标;白血病完全缓解期ｐ１５ ＣｐＧ 岛甲基化仍为阳性可能预示着复发;ＭＳＰ法ＤＮＡ需要量极少,不需要有特异性酶切位点,无同位素污染,对标本要求不高,敏感度高,是甲基化研究的一个简便、敏感、特异的新手段。     

甲基化在子宫内膜癌中的研究进展

甲基化是表观遗传学的重要内容之一,甲基化异常与恶性肿瘤细胞增殖、自噬、凋亡、细胞间黏附、浸润和转移密切相关。子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,研究发现,基因的异常甲基化与子宫内膜癌发病的高危因素、分型、肿瘤进展、早期诊断、化疗耐药、孕酮抵抗和预后评估有关。特异的甲基化标志物可用于子宫内膜癌的早期诊断和预后评估,调控关键基因的甲基化状态能改善子宫内膜癌细胞对化疗和孕酮的敏感性。综述DNA、RNA和组蛋白甲基化在子宫内膜癌发病机制、早期诊断、药物治疗和预后评估中的研究进展。     

基于TCGA数据库分析PFKFB4在肝细胞癌的临床意义及分子机制

目的 研究6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶4(PFKFB4)在肝细胞肝癌(LIHC)中表达和甲基化与预后的关系,分析PFKFB4在LIHC恶性进展中的作用机制.方法 从TCGA数据库下载LIHC的RNA-seq数据和临床信息,分析比较PFKFB4在LIHC样本和正常样本中的表达差异,利用卡方检验分析PFK...     

WNT4在脑胶质瘤中甲基化下调及抑制恶性胶质瘤细胞增殖的研究

目的 探讨WNT4在脑胶质瘤细胞系和组织中细胞系的表达与甲基化对脑胶质瘤细胞系U87增殖的作用和机制。方法 qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析WNT4在脑胶质瘤组织中的表达和甲基化及WNT4在脑胶质瘤细胞系中的表达;以胶质瘤U87细胞为本实验研究对象,分别转染慢病毒载体pLVX-Gfp-WNT4(实验组)和pLVX-Gfp-NC(对照组);细胞增殖和克隆形成实验分析WNT4基因对细胞增殖的影响;免疫蛋白印迹法验证WNT4对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果 与正常人星形胶质细胞相比,WNT4 mRNA在脑胶质瘤细胞系中的表达下调(P＜0.001),与正常脑组织相比,WNT4 mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中表达下调(P＜0.001);脑胶质瘤分级越高WNT4 mRNA表达越低(P＜0.001),高表达WNT4 mRNA患者的预后好(P＜0.001);WNT4在脑胶质瘤中甲基化程度明显高于正常脑组织。过表达WNT4后细胞活性和增殖能力受到抑制(P＜0.001);恢复WNT4表达后Wnt/β-catenin信号通路及其下游细胞因子明显受到抑制。结论 WNT4在人脑胶质瘤组织中表达甲基化下调,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路参与脑胶质瘤的进展。     

胃癌多基因甲基化状态分析

目的:检测胃癌组织中p16,hMLH1,E-cadherin和RUNX3基因甲基化状态,探讨多基因甲基化在胃癌发病中的作用.方法:采用饱和氯化钠法提取肿瘤组织、瘤旁组织及正常胃黏膜组织DNA.采用甲基化特异PCR对上述基因甲基化状态进行分析.结果:在正常胃黏膜组织中,38.9%存在E-cadherin甲基化,16.7%存在RUNX3甲基化,没有发现p16和hMLH1甲基化;在癌旁组织中,p16、hMLH1、E-cadherin和RUNX3甲基化频率分别为8.3%,4.2%,54.2%和29.2%;在胃癌组织中,上述基因甲基化频率分别为33.3%,20.8%,0.8%和54.2%.66.7%胃癌被检出存在2个或2个以上基因甲基化,明显高于癌旁组织(37.5%,χ2=4.09,P<0.05)和正常胃黏膜组织(5.6%,χ2=15.94,P<0.01),而癌旁组织则高于正常胃黏膜组织(χ2=4.16,P<0.05).有5例胃癌没有检出任何一种基因甲基化.结论:多基因甲基化是部分胃癌发展过程中一种早期事件,提示多基因甲基化在这部分胃癌的发病中起重要作用.     

SOCS1基因与肝细胞癌的关系研究进展

SOCS1基因位于16p12-p13.1,它编码蛋白SOCS1并属于SOCS蛋白家族,通过抑制JAK—STAT信号转导通路发挥作用,其失活机制主要是甲基化和杂合性缺失。SOCS1在肝细胞癌中广泛甲基化和表达明显降低,提示SOCS1可能是抑癌基因,在肝细胞癌的发生发展中起十分重要的作用。     

燃煤型砷中毒病区人群与非病区人群砷甲基化代谢水平的比较

目的 描述燃煤型砷中毒病区人群与非病区人群砷甲基化代谢的特征,比较两区人群砷甲基化代谢水平的差异.方法 于2005年12月随机抽取某燃煤型砷中毒病区常住居民228名(包括116名砷中毒确诊患者,内对照成人60名,14岁以下儿童52名),同时随机抽取非病区常住居民218名(外对照组成人149名,儿童69名),采集空腹晨尿,用离子色谱氢化物发生原子荧光法测定尿中无机砷(InAs)、一甲基胂酸(MMA)和二甲基胂酸(DMA).结果 燃煤型砷中毒病区人群砷的甲基化水平均显著低于非病区人群(P＜0.05),但病区病例组与内对照组之间未见显著差异.病区男性和女性砷的甲基化水平分别低于非病区男性和女性;病区男性对砷的甲基化能力低于女性,但非病区男性与女性之间比较,差异未见统计学意义.病区各年龄段人群砷的甲基化水平均低于非病区居民;随着年龄增加,MMA比例和MMA/InAs比值呈增加趋势,而DMA比例和DMA/MMA比值呈下降的趋势.结论 燃煤型砷中毒病区人群砷的甲基化水平低于非病区人群,男性和女性对砷的甲基化能力存在差异,砷甲基化代谢水平随着年龄增加呈下降趋势.     

结直肠癌中p16基因的甲基化改变与蛋白表达的关系

目的 检测结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因启动子区异常甲基化改变及蛋白表达情况,探讨其与结直肠癌发生发展与临床的关系。方法 采用甲基化特异PCR(MSP)和免疫组织化学链霉素过氧化物酶(SP)方法,对32份结直肠癌标本p16基因甲基化改变及蛋白表达情况进行检测分析。结果 p16甲基化阳性率为40.6％;p16蛋白表达阳性率75.0％;在病理分期中,DukesC、D期患者肿瘤组织中p16甲基化发生率63.0％,p16蛋白表达发生率为69.0％;DukesA、B期患者p16甲基化发生率为25.0％,p16蛋白表达阳性率为81.0％;在组织分化程度中,低分化癌中的p16甲基化阳性率为100.0％,p16蛋白表达阳性率为20.0％;在高、中分化癌中,p16甲基化的阳性率为30.0％,p16蛋13表达阳性率为85.0％;淋巴结转移癌患者肿瘤组织中p16基因甲基化阳性率为63.0％,淋巴结未转移的阳性率为25.0％;在肿瘤部位中,直肠癌p16蛋白表达阳性率为65.0％,结肠癌的阳性率为100.0％。结论 p16甲基化的改变可能影响p16蛋白的表达;p16甲基化、蛋白表达与结直肠癌的发生发展密切相关,p16甲基化和蛋白表达是结直肠癌患者诊断及预后的候选标志物之一。