P63蛋白在宣威与非宣威地区非小细胞肺癌表达的对比研究

目的研究宣威与非宣威地区非小细胞肺癌P63蛋白的表达,探讨其与生物学行为的关系。方法免疫组织化学法。结果P63蛋白在肺鳞癌组织中高表达;非小细胞肺癌中,P63蛋白的表达与患者的TNM分期、组织分化程度及淋巴结转移情况有关,与患者性别无关;P63蛋白在非小细胞肺癌中在相同病理类型、分期、组织分化、淋巴结转移情况及相同性别的阳性表达率,宣威组与非宣威组比较,差异无统计学意义。结论P63蛋白的表达在宣威并无地区特异性,并不是宣威肺癌高发的原因。     

P16表达在宫颈上皮内病变中的诊断价值

目的：探讨p16蛋白表达在宫颈上皮内病变中的诊断价值。方法方便选取云南省昭通市第一人民医院2004-2015年间的宫颈标本180例作为研究对象,采用免疫组化SP法检测180例宫颈良性病变及宫颈上皮内病变中p16蛋白的表达,并对其表达和意义进行分析。结果宫颈良性病变中p16表达率为0%,LSIL中p16表达率为45%且多为点灶状表达并主要局限于中间及表层,HSIL中p16表达率100%且多为带状强阳性表达,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p16可以作为宫颈良性病变、LSIL及HSIL之间鉴别诊断的一个有用的标记物。     

PTEN和P53在非肌层浸润性膀胱肿瘤中的表达及临床意义

目的:探讨非肌层浸润性膀胱尿路上皮肿瘤组织中PTEN和P53的表达及其临床意义?方法:采用免疫组化SP法,检测121例术前未经化疗患者膀胱癌组织中PTEN和P53的表达情况?进行临床资料随访,分析两者表达与肿瘤的分期?分级以及复发之间的关系?结果:121例标本中PTEN阳性表达89.2%,P53阳性表达39.6%?相关分析证明P53在T1期?高级别肿瘤中的表达明显,与肿瘤分期?分级呈正相关(P < 0.05),PTEN在T1期?高级别肿瘤中的表达较少,与肿瘤分期?分级呈负相关(P < 0.05)?生存分析显示膀胱癌的复发时间间隔与P53的表达有明显相关性,而与PTEN的表达无明显相关性?结论:PTEN?P53的阳性表达可能为明确膀胱肿瘤的生物学行为以及判断肿瘤术后复发提供依据?     

健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型P65、P50及磷酸化IκBα表达的影响

目的：探讨健脾补土法组方含药血清对体外嗅鞘细胞低氧/复氧损伤模型核因子KB（nuclear factor-kappa B,NF-KB）的亚单位P65、P50及NF-KB抑制蛋白（P-IκBα）表达的影响。方法将原代培养的嗅鞘细胞分为5组：正常血清对照组、正常血清+低氧组、低氧+依达拉奉含药血清组、低氧+健脾补土法组方含药血清组、正常血清+低氧+NF-KB抑制剂/抗氧化剂（PDTC,50μmol/L）组,采用微需氧袋低氧/复氧的方法诱导嗅鞘细胞形成脑缺血再灌注损伤样模型,用Western blot法检测嗅鞘细胞胞浆P65、P50、P-IκBα和胞核P65、P50的含量。结果与正常血清对照组比较,正常血清+低氧组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与正常血清+低氧组比较,低氧+依达拉奉组、低氧+健脾补土组、正常血清+低氧+PDTC组、低氧+健脾补土+PDTC组胞浆和胞核P65、P50,胞浆P-IκBα表达均降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论健脾补土法组方能通过抑制嗅鞘细胞缺氧/复氧损伤后P65、P50、P-IκBα的过度表达,对NF-κB通路的活化具有抑制作用。     

应用聚合酶链反应技术检测广佛手黄龙病病原的研究

[目的]建立鉴定广佛手黄龙病病原的有效方法,为无毒苗木的选育及病害防治提供早期诊断依据.[方法]在广佛手主要种植区进行调查,了解黄龙病的发病状况;根据柑桔黄龙病病原的DNA序列设计特异性的引物,对样品的DNA进行聚合酶链式反应（PCR）扩增.[结果]广东肇庆地区的广佛手出现类似柑桔黄龙病的症状,PCR检测结果表明,在表现发病症状的广佛手样品中有400bp的特异性DNA片段出现,而健康的样品中则没有扩增出特征带,表明广佛手的感病症状是由黄龙病病原引起的.[结论]PCR技术是广佛手黄龙病病原鉴定的有效方法之一.     

一种新型慢病毒载体制备体系的改进

目的完善已初步建立的以痘病毒为辅助病毒的慢病毒载体(LV)瞬时制备体系。方法通过同源重组质粒pZIPPY-NEO/GUS,将vTF7-3痘病毒D13L基因的ORF通过同源重组被新霉素基因(neo)以及可视性筛选基因(GUS)替代,制备D13L缺陷性痘病毒(vTF7-3-ΔD13L)。结果经RT-PCR鉴定,D13L基因被完全敲除。制备体系中将vTF7-3-ΔD13L代替vTF7-3后,制备体系培养上清经RT-PCR、Western blotting分别检测到慢病毒载体特异性RNA序列以及特征性p24蛋白的存在,提示系统可以正常制备出慢病毒载体颗粒,并进一步评价了慢病毒载体的感染性。此外,对此系统的动力学特征也进行了初步分析。结论 vTF7-3-ΔD13L制备成功,通过此系统可制备出没有复制性痘病毒污染的慢病毒载体,本研究为该系统的大规模应用奠定了客观基础。     

TSA对食管癌细胞系EC9706细胞周期作用及分子机制的探讨

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对食管癌细胞 EC9706细胞周期的作用及机制.方法 将浓度为0.5、1.0、1.5 μmol/L TSA作用EC9706细胞24 h,用MTT观察不同浓度 TSA 对 EC9706细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞生长及周期;Western Blot检测TSA对食管癌细胞周期相关基因的表达.结果 1.0 μmol/L 浓度的TSA 对EC9706 细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μmol/L浓度之上可明显诱导食管癌细胞EC9706细胞周期阻滞,明显增强p21、p27基因的表达,明显降低 CCND1、CDK4D基因的表达.结论 一定剂量的TSA可抑制食管癌EC9706细胞的生长,通过调控多个细胞周期相关基因诱导食管癌细胞细胞周期阻滞,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、CDK4D基因表达的减少相关.     

外周血CGRP、SP水平及HRV与冠状动脉粥样硬化病变的关系研究

目的 观察冠状动脉造影患者血浆降钙素基因相关肽（CGRP）、P物质（SP）水平和心率变异（HRV）与冠状动脉粥样硬化严重程度的关系.方法 分析172例冠状动脉造影患者,135例诊断为冠心病,其中单支病变54例,双支病变41例,三支病变40例,冠状动脉造影阴性37例,采用放射免疫法检测入选患者的CGRP、SP水平和动态心电图检测HRV.结果 冠心病患者血浆CGRP含量均低于冠状动脉造影阴性组（P〈0.05）,其中冠状动脉造影阴性组与双支病变组、三支病变组比较,单支病变组与三支病变组比较,CGRP含量均明显升高,差异有显著性（P〈0.01）,冠心病三支病变的患者血浆SP含量均低于单支病变组（P〈0.05）及冠状动脉造影阴性组（P〈0.01）.正常窦性R-R间期标准差（SDNN）在冠心病三支病变的患者中均显著低于单支病变组及冠状动脉造影阴性组（P〈0.01）,双支病变组的患者均低于冠状动脉造影阴性组（P〈0.05）;每5mm的R-R间期标准差的平均值（SDNN index）在冠心病三支病变的患者中均显著低于单支病变组（P〈0.05）及冠状动脉造影阴性组（P〈0.01）,在双支病变的患者中均低于冠状动脉造影阴性组（P〈0.05）.结论 冠心病患者CGRP水平降低,CGRP、SP、HRV有关参数的降低与冠状动脉狭窄程度有密切关系,CGRP、SP与HRV联合检测可以作为评估冠心病患者冠状动脉病变程度及危险性的指标.     

小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究

目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系?方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用PstⅠ?BamHⅠ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆?将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达?以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量 RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19干细胞向心肌细胞方向分化的关系?结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确?载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RT-PCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率?转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P < 0.05)?结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化?     

环磷酰胺对小鼠肝细胞色素P450含量的影响

目的　了解环磷酰胺 (CP)对小鼠肝细胞色素P4 5 0含量的影响。方法　小鼠腹腔注射CP 2 0mg·kg-1·d-1和CP 4 0mg·kg-1·d-1,连续 4天。以聚乙二醇法制备微粒体 ,测定肝微粒体中P4 5 0的含量。结果　CP 2 0mg·kg-1和CP 4 0mg·kg-1两组动物肝微粒体P4 5 0含量与对照组相比明显下降 (P <0 .0 5 )。结论　CP具有抑制P4 5 0的作用