5-氟尿嘧啶诱导Jurkat细胞凋亡及Fas、FasL的表达

目的探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导Jurkat细胞株的凋亡和Fas、FasL的表达。方法不同浓度的5-FU分别处理Jurkat细胞12h和24h后,流式细胞仪检测细胞表达CD95、CD95L的百分率。结果与对照组相比,5-FU在10、20、40μg.mL-1浓度下明显促进Jurkat细胞表达Fas、FasL;且5-FU在24h比处理12h有更强的诱导效果。结论 5-FU可显著提高Jurkat细胞凋亡率,并增强Fas、FasL的表达率。     

齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对PTEN表达的影响

本研究旨在探讨齐墩果酸诱导人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡及对PTEN表达的影响。应用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,用Hoechst33258染色观察凋亡细胞形态,Annexin V/PI双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,并应用实时定量RT-PCR和Western blot方法分别检测PTEN基因及其蛋白表达水平。结果表明:齐墩果酸以时间和剂量依赖方式抑制Jurkat细胞增殖,12、24和48小时的半数抑制浓度(IC50)分别约为85.35、53.66和33.18μmol/L。流式细胞术检测显示,齐墩果酸以0、40、80和160μmol/L浓度作用细胞24小时凋亡率分别为6.72%、19.8%、28.72%和30.12%(p<0.05)。80和160μmol/L齐墩果酸分别处理Jurkat细胞24小时后PTEN-mRNA及蛋白表达上调。结论:PTEN基因和蛋白表达上调可能参与齐墩果酸对Jurkat细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

Evidence for a CD4-associated calcium influx independent of the phosphoinositide transduction pathway in human T cells

We recently showed, using human Jurkat T cell variants lacking the T cell receptor (TCR)/CD3 complex, that the lectin jacalin is able to trigger intracellular calcium increase provided that CD4 is expressed on the cell surface. Involvement of the CD4 molecule in jacalin-induced biological effects was furthermore demonstrated in differentiated U937 myelomonocytic cells expressing or not expressing CD4, and is confirmed here in human CD4-transfected mouse thymoma cells. In the present paper, we analyze the CD4-associated calcium response triggered by jacalin independently of the TCR/CD3 complex. We show that the observed calcium rise results from a direct long-lasting calcium influx from the outside without release of calcium from intracellular stores. We demonstrate that it is independent of the phosphoinositide phospholipase C transduction pathway. Moreover, we show that this peculiar calcium response can be blocked by protein tyrosine kinase inhibitors (herbimycin and genistein) giving evidence of the involvement of a protein tyrosine kinase, the best candidate of which is the CD4-associated p56^lck. Altogether, our results suggest that, independently of the TCR/CD3 complex, CD4 may be involved in the triggering of a calcium signal dependent on a protein tyrosine kinase and independent of the phosphoinositide transduction pathway.     

cblN/Zap嵌合分子的构建及其对Jurkat细胞TCRζ的下调

目的:构建cblN/Zap嵌合分子,稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响。方法:提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA,以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段。以含有人全长cblcDNA的质粒pEFHAcbl作为模板扩增cbl基因的N端(cblN),并在其N末端带上含24bp的flag标签。用重叠延伸PCR法,在cblN基因内部的SH2两端引入BamHI和EcoRV酶切位点并克隆入pcDNA3.1( )中。再以Zap基因的SH2置换cblN基因的SH2,即成为pcDNA3.1( )cblN/Zap。酶切鉴定及测序正确后,采用脂质体法稳定转染Jurkat细胞,用RTPCR和Westernblot鉴定flagcblN/Zap的表达,用Westernblot检测其对细胞TCRζ表达的影响。结果:重组质粒pcDNA3.1( )flagcblN/Zap经酶切后可产生与理论预期长度相符的片段。且测序证实其序列正确。脂质体法稳定转染Jurkat细胞后,检测到目的基因在RNA和蛋白水平的表达。表达的cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ。结论:重构嵌合分子cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ。     

胆固醇缺乏对Jurkat细胞周期调控蛋白表达的影响

本研究从细胞周期调控这一角度来探讨胆固酥缺乏对Ｔ淋巴细胞增殖影响的分子机制。结果显示;经去脂血清培养基培养的Ｊｕｒｋａｔ细胞加ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ处理３ｄｒｇｋ,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显下降,免疫细胞化学染色及免疫印迹法分析表明处理后的细胞ｃ７６ｌｉｎ Ｄ１,ＣＤＫ４及ｐＲｂ蛋白的表达加入低密度脂蛋白可以部分逆转上述变化。     

已烯雌酚诱导T细胞肿瘤Jurkat细胞系凋亡中转录因子Oct-1的表达

研究己烯雌酚对Ｔ细胞肿瘤的细胞凋亡诱导作用,以及凋亡过程中转录因子Ｏｃｔ－１的表达,方法采用ＤＮＡ梯形片段化,荧光染色流式细胞技术分析细胞凋亡,以电泳泳 动度迁移率法检测Ｏｃｔ－１的表达。结果己烯雌酚可诱导Ｔ细胞出现细菌凋亡,并有典型的ＤＮＡ梯形片段化,１０μｇ己烯雌酚诱导１２ｈ后,凋亡过程中细胞数达３０％以上。己烯雌酚诱导Ｔ细胞凋亡过程与Ｏｃｔ－１转录因子的表达有关。结论己烯雌酚可诱导Ｔ细胞肿瘤     

人参皂苷诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的研究

目的通过观察人参皂苷（GS）诱导人T淋巴细胞白血病细胞株（Jurkat细胞）凋亡,探讨GS影响T淋巴白血病细胞增生作用的机制。方法选用人T淋巴细胞株（Jurkat细胞）作靶细胞,采用MTT法和半固体集落培养法观察不同浓度的GS对Jurkat细胞增生的抑制效应;用Annexin V—FITC试验法分析Jurkat细胞的凋亡百分率,并进行DNA片段分析（DNA Ladder）。结果MTT法和半固体集落培养法均显示GS在50μg／mL浓度下能够明显抑制Jurkat细胞增生,并随浓度增加抑制作用增强;流式细胞术显示GS在一定浓度和时间范围内可引起细胞凋亡。结论GS在一定浓度范围内可抑制Jurkat细胞增生,并能够诱导其凋亡,为临床应用提供理论依据。     

全反式维甲酸对骨髓基质细胞黏附功能及JWA基因表达变化的影响

目的探讨全反式维甲酸对骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSC)黏附功能及JWA基因表达的影响.方法全反式维甲酸(all trans retinoic acid, atRA)作用BMSC后,流式细胞仪检测BMSC细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)和血管黏附分子-1(vascular adhesion molecule-1, VCAM-1)的表达,检测共培养条件下BMSC细胞对Jurkat细胞的黏附率及Jurkat细胞生长曲线变化,RT-PCR方法检测BMSC JWA mRNA表达变化.结果 atRA作用后,BMSC表面ICAM-1、VCAM-1蛋白表达增加,BMSC对Jurkat细胞的黏附能力增强,并可促进Jurkat细胞增殖,BMSC内JWA-mRNA表达增强.结论 atRA可增强骨髓基质细胞黏附功能,并上调JWA基因表达.     

砷诱导人T淋巴细胞表达HMG2基因的克隆研究

目的为了解三氧化二砷诱导人T淋巴细胞的差异表达基因,探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制.方法在体外用三氧化二砷处理人Jurkat T淋巴细胞(5μmol/L,24h)后,应用抑制性消减杂交技术(SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文库,用PCR技术和测序技术鉴定阳性克隆.结果用SSH技术构建了由三氧化二砷诱导的Jurkat T淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库.经测序分析结果显示,该文库中含有高泳动类蛋白2(HMG2)基因片段,同源性98%.结论我们的研究结果提示三氧化二砷(5μM,24h)可诱导HMG2的转录,它在砷诱导淋巴细胞凋亡机制中可能起着重要的作用.