交联抗DR5单抗YM366EC诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化。结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加。结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9。     

胆固醇缺乏对Jurkat细胞增殖的影响

利用间接免疫荧光染色、荧光探针标记、免疫细胞化学染色及免疫印迹等实验方法 ,从细胞增殖转化功能、细胞膜脂质流动性、蛋白酪氨酸激酶 (PTK )活性以及细胞周期调控蛋白表达的变化等方面探讨了胆固醇缺乏对Jurkat细胞的功能影响及其分子机制。结果显示 :经去脂血清培养基培养的Jurkat细胞加洛伐他丁处理 3d后 ,细胞膜脂流动性明显增大 ,细胞生长速度明显下降 ,细胞增殖受抑 ,PTK活性及细胞周期素D1(cyclinD1)、周期素依赖性激酶 4 (CDK4 )蛋白的表达明显降低 ,加入低密度脂蛋白可以部分逆转上述变化。结果提示 ,无论是内源性还是外源性胆固醇的缺乏都能使Jurkat细胞膜脂流动性发生变化 ,细胞PTK活性下降 ,cyclinD1、CDK4蛋白表达降低 ,推测这一变化与细胞增殖受抑有直接关系     

Synthesis and properties of the immunotoxin CD5-ricin

Synthesis and properties of an immunotoxin produced by conjugating ricin with a novel monoclonal antibody (IgG3 of the ICO-104 class) are described. Cytolytic activity of the synthesized immunotoxin, determined by two independent methods and expressed in LD₅₀, is 0.3–0.6×10⁻⁷ M. Its specificity for target cells containing the CD5 antigen is shown. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 119, N ^o 1, pp. 76–79, January, 1995 (Presented by Yu. A. Romanov, Member of the Russian Academy of Medical Sciences)     

芦荟大黄素对Jurkat T细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的 研究芦荟大黄素对Jurkat T细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨可能的机制.方法 应用细胞计数测定增殖,Hoechst/PI双染法及DNA片断化分析细胞凋亡特征,流式细胞术检测细胞周期分布.进一步应用二氢乙锭荧光染色测量活性氧产物,Western blotting检测胞浆细胞色素C(Cyt-c)的量,比色法检测caspase-3和caspase-9活性.结果 芦荟大黄素剂量和时间依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖.芦荟大黄素诱发细胞核皱缩,核DNA片断化,细胞周期出现亚G1期凋亡峰,且停滞于G2/M期.芦荟大黄素介导细胞内活性氧水平显著提高,线粒体释放Cyt-c量显著增加,caspase-3和caspase-9活性显著增强.结论 芦荟大黄素剂量依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖并诱导其凋亡.诱导凋亡的机制中,包括增加活性氧产物和线粒体损伤途径.     

催乳素对Jurkat细胞CD154表达的影响

经RT-PCR法证实Jurkat细胞株表达催乳素(PRL)受体mRNA。发现在植物血凝素(PHA)和重组人PRL(rhPRL)共刺激下，Jurkat细胞CD154表达量明显增加。推测PRL与其受体结合，增加CD154表达而发挥免疫调节作用。     

MIP-1α 诱导 Jurkat 细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层能力分析简

本研究为探究人急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞脑转移发生中枢神经系统白血病的机制及MIP-1α在T-ALL模式细胞Jurkat穿过人脑微血管内皮细胞（HBMEC）过程中的作用.应用real-time PCR、siRNA试验、跨内皮迁移试验和细胞黏附试验,分别检测MIP-1 α的表达、Jurkat细胞穿透能力、迁移能力和黏附力.结果表明,Jur-kat细胞作为研究T-ALL细胞穿过血脑屏障（BBB）机制的模式细胞MIP-1α表达均高于正常人T淋巴细胞以及其他3种T-ALL细胞系（HSB2、CEM、SUP-T1）,Jurkat细胞分泌的MIP-1α使其穿过HBMEC单层能力增强.MIP-1 αsiRNA干扰后的Jurkat细胞对HBMEC黏附和跨内皮迁移力下降.结论：Jurkat细胞分泌的MIP-1α参与了Jurkat细胞穿过HBMEC单层的过程.     

MTS1基因β启动子转录活性研究

目的 研究IMTSl基因β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况，鉴定β启动子转录活性的功能片段区。方法 用DNA重组方法，构建MTS1基因口启动子3′端转录起始点相同，而5′端序列不同的7种pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法，将构建的重组质粒分别转染MTSl基因双等位缺失的Jurkat细胞株，检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达，观察β启动子在Jurkat细胞中的激活情况及其基础转录活性片段区。结果 成功构建了MTSI基因β启动子7种不同片段的重组质粒，它们在Jurkat细胞中均有转录活性，其中0．38kb Sac Ⅱ-Sac Ⅰ酶切片段是MTSl基因β启动子转录活性的基础片段。结论 IMTSlβ启动子可在Jurkat细胞中被激活。     

地西他滨诱导人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡机制的研究

目的研究地西他滨诱导人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的机制。方法常规体外培养人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株,取对数生长期的细胞传代24 h后加入不同浓度(0.5、1.0、5.0及10.0μmol/L)地西他滨处理,分别继续培养24、48、72 h后,用CCK-8法测定细胞增殖活性;倒置显微镜下观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测地西他滨作用后人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的凋亡率;应用透射电镜观察人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞发生凋亡的形态学特征;实时荧光定量Real time-PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2在mRNA水平表达变化的情况。结果地西他滨可以抑制Jurkat细胞增殖,并且呈浓度和时间依赖性(P0.05)。倒置显微镜观察到地西他滨作用后细胞形态发生了显著改变;流式细胞术检测细胞凋亡的结果表明地西他滨能够诱导人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡并且呈浓度依赖性(P0.05);透射电镜观察结果证明地西他滨可以诱导人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞出现凋亡性细胞死亡,5.0μmol/L地西他滨作用Jurkat细胞72 h后出现大量凋亡小体。另外,Real time-PCR实验研究结果发现地西他滨能够上调促凋亡基因Caspase-3的表达,下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达。结论地西他滨能通过上调促凋亡基因Caspase-3的表达和下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达诱导细胞凋亡。     

不同来源骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞生物学特性的影响

目的观察正常及急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞生物学特性的影响。方法收集与正常及急性淋巴细胞白血病骨髓基质细胞微环境共培养10d的Jurkat细胞,观测Jurkat细胞增殖、细胞周期分布、凋亡、分化及DNR摄药量的改变。结果白血病骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞黏附、趋化及降低摄药量的作用强于正常骨髓基质细胞微环境;抑制增殖及促分化作用弱于正常骨髓基质细胞微环境。白血病骨髓基质细胞微环境抑制Jurkat细胞凋亡,而正常骨髓基质细胞微环境促进其凋亡。结论正常骨髓源基质细胞微环境较白血病源骨髓基质细胞微环境对Jurkat细胞具有更强的促进凋亡、分化及抑制增殖的作用,增加Jurkat细胞对DNR的敏感性。