Pilot study of an HLA-A2 peptide vaccine using flt3 ligand as a systemic vaccine adjuvant

A pilot vaccine study was conducted to test the safety and immunological efficacy of four monthly immunizations of an MHC class I peptide vaccine, the E75 HLA-A2 epitope from HER-2/neu, using flt3 ligand as a systemic vaccine adjuvant. Twenty HLA-A2-expressing subjects with advanced stage prostate cancer were randomly assigned to one of four immunization or treatment schedules: (a) Flt3 ligand (20 g/kg per day) administered subcutaneously daily for 14 days on a 28-day cycle, monthly for four months; (b) flt3 ligand course as above with the E75 peptide vaccine administered on day 7 of each flt3 ligand cycle; (c) flt3 ligand course as above with the E75 peptide vaccine administered on day 14 of each flt3 ligand cycle; or (d) E75 peptide admixed with granulocyte–macrophage colony-stimulating factor and administered intradermally once every 28 days, as has previously been reported. The primary endpoints of the study were the determination of safety and immunological efficacy in generating E75-specific T cells as determined by peptide-specific interferon-gamma ELIspot. Adverse events included one grade 3 skin reaction and the development of grade 2 autoimmune hypothyroidism in two subjects with preexisting subclinical autoimmune hypothyroidism. Dendritic cells were markedly increased in the peripheral blood of subjects receiving flt3 ligand with each repetitive cycle, but augmentation of antigen-presenting cells within the dermis was not observed. Apart from a single subject, no significant peptide-specific T-cell responses were detected by ELIspot, whereas delayed-type hypersensitivity responses were detectable in control subjects and in subjects receiving peptide vaccine early in the course of flt3 ligand administration. The absence of robust peripheral immune responses in the current study may be attributable to the small numbers of subjects or differences in the subject population. In addition, the inability of flt3 ligand to augment the number of peripheral skin antigen-presenting cells may have contributed to the absence of robust peptide-specific immunity detectable in the peripheral blood of immunized subjects treated with flt3 ligand.     

SBT、SSOP法分析湖北土家族妇女HLA-A2超型各等位基因及与宫颈癌的关联

目的通过检测湖北土家族人群HLA-A2超型(包含A*0201、A*0202、A*0203、A*0204、A*0205、A*0206、A*0207、A*6802、A*6901)各等位基因,分析与宫颈癌关联的等位基因及其结构与功能特点.方法提取湖北土家族正常人群236名育龄妇女及59例原发性宫颈癌患者外周血DNA,采用SBT(sequence based typing)、SSOP(Sequence Specific Oligonucleotide Probes)HLA基因分型技术,对HLA-A2超型各等位基因型进行分型,比较宫颈癌病例组和正常对照组中HLA-A2超型中相应等位基因型构成比的差异,并分析相关等位基因的结构特点.结果有7种HLA-A2超型等位基因HLA-A*0201(17.3%)HLA-A*0202(9.5%)HLA A*0203(1.4%)HLA-A*0204(3.8%)HLA-A*0205(3.1%)HLA-A*0206(10.8%)HLA-A*0207/0215N(9.8%),其中HLA-A*0202和HLA A*0206在正常对照组和宫颈癌病人组的构成比有显著性差异(p＜0.05),HLA-A*0202(OR=0.24,95%CI=0.05～0.48)和HLA A*0206(OR=0.2,95%CI=0.67～1.07)对于宫颈癌发生的易感性有保护作用.结论湖北土家族人群HLA-A*0201所占比例最高达17.3%,HLA-A*0202和HLA-A*0206对于宫颈癌发生的易感性有保护作用.     

人类群体遗传结构的图论主成分分析方法

目的 提出基因频率矩阵的图论主成分分析方法，探讨该法在人类群体遗传结构研究中的应用。方法 从分析基因频率矩阵的结构特征入手，将主成分分析与图论中的最小生成树有机结合，构建人类群体遗传结构的图论主成分模型，并以中国26个汉族人群HLA-A基因座遗传结构分析为例，验证图论主成分分析的科学性和适用性。结果 图论主成分分析的基本步骤可概括为：①对中心化基因频率的协方差矩阵进行主成分分析；②按图论原理求过”t维空间”个点的最小生成树；③利用求“颈”法分割最小生成树；④将最小生成树整合到二维主成分散点图中构建图论主成分分类图。根据此步骤，对中国26个汉族人群HLA-A基因座遗传结构进行了图论主成分分析，分析结果符合中华民族源与流的客观规律。结论 图论主成分分类图既可显示各群体的遗传结构特性，又可利用最小生成树的链接关系揭示各群体间的内在联系；图论主成分分析是分析人类群体遗传结构的一种较好方法。     

表达载体sHLA-A2-IgG1-Fc的构建与鉴定

目的构建表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2-IgGl-Fc,为进一步真核表达可溶性HLA-A2-IgG1-Fc蛋白奠定基础。方法从T2细胞中提取总RNA,借助RT-PCR技术扩增包括信号肽的可溶性HLA-A2的cDNA序列并把其插入真核表达载体pcDNA3.0,然后经酶切和测序法鉴定;用PCR的方法从含IgG1-Fc基因的PIG质粒中扩增目的基因IgG1-Fc段,然后经酶切后插入前面构建好的表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2中,最后经酶切和测序法鉴定。结果经酶切鉴定及测序分析,证实已将目的基因HLA-A2和IgG1-Fc片段插入载体pcDNA3.0。结论本研究成功构建表达载体pcDNA3.0-sHLA-A2-IgG1-Fc。     

大疱性类天疱疮与HLA—A、B等位基因的相关性

目的：确定山东汉族大疱性类天疱疮（BP）与HLA—A、B等位基因的相关性。方法：运用聚合酶链反应-序列特异性引物寡核苷酸探针杂交（PCR—SSOP）方法,对山东地区43例汉族BP患者和125例健康对照进行了HLL—A、B等位基因分型。结果：BP患者组HIA—A＊24频率高于对照组（P：0．033,Pc〉0．05）;HLA—A＊33、B＊44在患者组中频率低于正常对照组（P值分别为0．040和0．024,但Pc值均〉0．05）。结论：大疱性类天疱疮的遗传易感基因可能与HLA—A、B等位基因无相关性。     

中国彝族人群HLA-A基因的DNA分型

HLA具有高度多态性 ,不同民族和地区的人群在HLA基因型别和频率分布上存在很大差异。我国是一个多民族国家 ,分析不同民族人群HLA基因的多态性可为疾病相关联研究、移植免疫及群体遗传学提供有价值的参考数据。作者利用近几年发展起来的PCR SSPDNA分型方法对中国彝族人群HLA A基因的多态性进行了分析 ,以便为以后的免疫学研究提供背景资料。1　材料与方法1.1　研究对象　样本来自四川凉山彝族自治州 ,随机选取三代均为彝族且无亲缘关系的健康个体 10 2例。1.2　模板DNA的制备　取研究对象静脉血 2 0 0 μL用QIAampDNABloodMin…     

Seventeen more novel HLA-A locus alleles

This paper describes seventeen novel HLA-A locus alleles: A*0106, *0235, *0236, *0237, *1105, *2302, *2303, *24032, *2422, *2424, *2503, *2613, *3007, *3203, *3204, *6809 and *6810. All alleles were identified due to unexpected probe reaction patterns during routine SSOP typing. Exons 2 and 3 of these alleles were subsequently characterized by DNA sequencing. The alleles represent a shuffling of sequence motifs, likely by interallelic conversion, expanding the diversity of the HLA system.     

淋巴细胞HLA-A mRNA方法学建立及在乙型肝炎病毒感染患者中的应用

目的建立外周血淋巴细胞HLA-A mRNA的检测方法,探讨其在慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者中的应用价值。方法改良法提取人外周血淋巴细胞RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)一步法扩增HLA-A mRNA,琼脂糖凝胶电泳结果采用Bandscan软件分析相对灰度值,半定量HLA-A的基因表达。结果半定量HLA-A所得平均相对灰度值在慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组、正常对照组分别为0．54±0．21、0．34±0．27、0．22±0．16、0．95±0．19。慢性乙型肝炎组、肝硬化组、肝癌组均明显低于正常对照组(P<0．05),慢性乙型肝炎组与肝癌组,肝硬化组与肝癌组相比差异有统计学意义(P<0．05),慢性乙型肝炎组与肝硬化组有下降趋势。结论成功建立检测HLA-A基因的RT-PCR一步法,从基因转录水平上证实慢性乙型肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌患者外周血淋巴细胞HLA-A下调,且与相应患者细胞免疫功能减弱密切相关。     

中国鲁南地区汉族人群HLA-A,B,DRB1高分辨等位基因多态性分析

本研究旨在分析中国鲁南地区汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因的高分辨多态性分布特征。采用PCR-SBT对中国鲁南地区688名无血缘关系的汉族健康人群进行HLA-A、B、DRB1位点高分辨基因分型,并对分型结果做统计学分析。结果表明：688例样本A、B、DRB1座位分别检出31、63、39个等位基因,其中频率大于0.05的常见等位基因为A＊24：02、A＊30：01、A＊11：01、A＊02：01、A＊33：03、A＊02：06、B＊13：02、B＊44：03、B＊51：01、B＊46：01、B＊15：01、B＊58：01、DRB1＊07：01、DRB1＊15：01、DRB1＊09：01和DRB1＊08：03。上述A、B、DRB1位点常见等位基因累计基因频率分别为0.7223、0.4432、0.5453。最常见的A＊-B＊-DRB1＊单倍型是A＊30：01-B＊13：02-DRB1＊07：01（0.1151）,最常见的两位点连锁单倍型分别是A＊30：01-B＊13：02（0.1303）、A＊30：01-DRB1＊07：01（0.1157）和B＊13：02-DRB1＊07：01（0.1307）。结论：获得了中国鲁南汉族人群HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因和单倍型分布特征,为评估该地区患者找到HLA匹配供者的机率,为合理选择移植供者及移植免疫、HLA与疾病相关性研究提供了参考数据。