湖南汉族群体4个STR基因座的遗传多态性调查

STR基因座以其等位基因片段长度小，可复合扩增．对DNA检材质量要求不高．分析方法简捷明了，且在人群中分布广泛，多态性好，突变率低，种属特异性高，成为法科学DNA分析中最常用的遗传标记。作者选择D16S539、TH01、TPOX、CSF1PO等4个STR基因座，运用荧光标记复合扩增，扩增产物在DNA测序仪上自动荧光检测并分型的方法，对湖南地区汉族群体173例无关个体进行遗传多态性调查，获得其遗传学数据，为法科学个体识别和亲权鉴定提供理论依据。     

AS-PCR法鉴别炮制辅料鳖血和常见掺伪品的研究

目的 建立一种炮制辅料鳖血等位基因特异性PCR(AS-PCR)鉴别方法,快速、准确地鉴别鳖血与其它常见动物血液。方法 通过比较鳖血基原中华鳖和驴、牛、羊、鸡、猪、兔为代表的常见动物的COⅠ序列差异,根据SNP位点设计鳖血特异性鉴别引物,优化PCR反应体系,并进行耐受性、适用性、掺伪灵敏度考察验证。结果 实验条件为退火温度62℃、循环次数29次、引物用量0.2μL、DNA模板浓度100 ng时,鳖血使用设计的ZHB286引物经PCR扩增和凝胶电泳后出现约286 bp的明亮条带,其他动物血液样品均无条带出现。结论 该AS-PCR鉴别方法具有高度特异性,能准确鉴别鳖血和其他常见动物血液,进而可用于鳖血与驴、牛、羊、鸡、猪、兔血掺伪鉴别,在血液类药材分子鉴定中具有广泛应用价值。     

强直性脊柱炎易感基因IL-1RN和TNF-α的单核苷酸多态性的研究

目的检测中国深圳地区汉族强直性脊柱炎(AS)患者IL-1RN和TNF-α基因的单核苷酸多态性(SNPs)。方法在54名AS患者和42名健康对照者中,采用基因芯片技术对IL-1外显子6上SNPs(31017C/G、30735T/C)、TNF-α启动子上的SNPs(-857C/T)进行基因分型,分析单个位点的等位基因频率和基因型频率是否与AS相关,采用SAS软件分析数据。结果AS患者中,IL-1RN的31017C/G的等位基因G频率和30735T/C的等位基因C频率(分别是60.42%vs36.36%,32%vs17.19%)和IL-1RN的31017C/G的基因型GG频率和30735T/C的基因型CT频率(分别是43.75%vs12.12%,64%vs39.39%)显著性高于健康对照者,差异具有统计学意义(P<0.01)。TNF-α的-857C/T的等位基因T频率(25%vs9.52%)和基因型CT频率(42.59%vs19.05%)也显著高于健康对照者(P<0.01)。在健康人中31017CG/857CC基因型组合要显著高于AS患者(P<0.01),在AS患者中31017GG/30735CT/857CT基因型组合要显著高于健康对照者(P<0.05),其差异均具有统计学意义。结论IL-1RN基因的31017C/G和30735T/C的两个SNPs及其基因型频率与中国深圳汉族AS之间存在显著相关性,31017CG/857CC基因组合可能是保护性的基因组合,而31017GG/30735CT/857CT组合可能增加AS患病的易感性。     

新乡地区支气管哮喘患儿发病风险与相关核转录因子等位基因间相关性探讨

目的 探讨新乡地区支气管哮喘患儿发病风险与相关核转录因子等位基因间相关性。方法 本次研究纳入河南省新乡市第二人民医院2018年1月至2020年1月收治的小儿支气管哮喘患儿260例和体检健康儿童290例,采用SSP-PCR法检测核转录因子STAT3基因单核苷酸多态性（SNP）,分析两组基因型和等位基因分布差异。结果 支气管哮喘组rs2293152位点CC基因型比例高于体检健康组（P<0.05）;支气管哮喘组rs2293152C/G位点C等位基因比例高于体检健康组（P<0.05）;C等位基因儿童发生支气管哮喘风险为G等位基因的1.57倍（■=1.57, 95%CI:1.07～2.33）。两组rs957970位点基因型和等位基因比例比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 本地区小儿支气管哮喘发病与STAT3基因rs2293152C/G位点有关,其中C等位基因可能为常见易感基因。     

硒蛋白单核苷酸多态性与幽门螺旋杆菌感染的关联性

目的 探讨硒蛋白S（selenoprotein S,SelS）rs34713741位点、硒蛋白P（selenoprotein P,Sepp1）rs7579位点单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）与幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染的关联性。方法 采用等位基因特异性PCR（allele - specific PCR,AS - PCR）技术检测195例Hp感染者和200例对照者SelS（rs34713741）、Sepp1（rs7579）SNPs,统计分析其与Hp感染的关系。结果 rs34713741位点SelS基因SNP与Hp感染存在关联（P＜0.05)。与C等位基因携带者相比,携带T等位基因者感染Hp风险增高1.578倍（OR = 1.578,95%CI:1.191～2.091）;与CC基因型者相比,CT和TT基因型者感染Hp风险均增高（OR = 1.890,95%CI:1.134～3.148;OR = 1.807,95%CI:1.140～2.864）;rs7579位点Sepp1基因SNP与Hp感染无关联（P＞0.05)。结论 SelS基因rs34713741位点T等位基因提高了Hp感染风险,是Hp感染遗传易感基因。     

丙型肝炎病毒HLA-A＊1101和A＊2402限制性CD8＋T细胞表位的研究

目的：鉴定出丙型肝炎病毒（HCV）特异性HLA-A＊1101限制性和A＊2402限制性CD8＋T细胞表位.方法：采用T细胞表位预测软件SYFPEITHI预测HCV特异性CD8＋T细胞表位,合成HLA-A＊1101限制性、A＊2402限制性候选表位;建立永生化的HLA-A＊1101阳性、A＊2402阳性B细胞株,采用竞争性肽结合实验检测候选表位与HLA-A＊1101或A＊2402分子的结合力;候选表位体外分别刺激HLA-A＊1101阳性或A＊2402阳性HCV感染者外周血单个核细胞（PBMCs）后,采用酶联免疫斑点（ELISPOT）和细胞内细胞因子染色（ICS）实验分别检测肽特异性分泌γ-干扰素（IFN-γ）的细胞的水平和（肝） 异性IFN-γ＋CD8＋T细胞的水平.结果：5条HLA-A＊1101限制性候选表位中,NS3_609（ITLTHPITK）和NS2_165（VVFSDMETK）与HLA-A＊1101分子具有高结合力.3条HLA-A＊2402限制性候选表位中,NS3_373 （KCDELASKL）和NS5b_382 （YYLTRDPTI）与HLA-A＊2402具有高结合力;在HLA-A＊1101阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3 609和NS2_165特异性分泌IFN-γ的CD8＋T细胞,而在HLA-A＊2402阳性HCV感染者PBMCs中存在NS3_373和NS5b 382特异性分泌IFN-γ的CD8＋T细胞.结论：本研究证实NS3_609（ITLTHPITK）和NS2_165（WFSDMETK）为全新的HCV特异性HLA-A＊1101限制性CD8＋T细胞表位,NS3_373 （KCDELASKL）和NS5b_382 （YYLTRDPTI）为全新的HCV特异性HLA-A＊2402限制性CD8＋T细胞表位.     

人载脂蛋白Eε3等位基因的克隆及表达

目的:克隆人载脂蛋白E(Apolipoprotein E,APOE)ε3等位基因,测定序列,并构建带有人源性APOEε3等位基因的真核表达载体.方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胎儿脑组织中克隆得到APOEε3等位基因,与PMD19-T载体连接,再酶切PMDl9-T-APOE ε3,获得APOEε3基因,然后将其与表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体.重组质粒转染293T细胞后,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用Western-Blot的方法检测目的蛋白在293T细胞中的表达.结果:经酶切和DNA测序证明APOEε3基冈序列正确,真核表达载体构建成功.将重组质粒转染293T细胞,在转染后的细胞中检测到目的蛋白的表达.结论:成功构建了pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体,该表达载体能在真核细胞中正确表达.     

等位基因特异PCR技术检测结核分支杆菌rpoB基因突变研究

目的 建立并评价等位特异多聚酶链反应检测结核分支杆菌耐利福平基因rpoB突变的方法。方法 设计与rpoB基因突变后的碱基配对的引物用于扩增突变基因，建立AS－PCR检测rpoB基因突变的方法，并对58株结核菌进行了检测。结果 AS－PCR检测结核菌耐利福平相关基因rpoB的敏感性为77.3%，特异性达91.7%。AS－PCR检测rpoB基因，有1628A→T、1657C→T，G和1673C→T突变分别占耐利福平结核菌株的18.2%，22.7%和36.4%。检测rpoB突变与MIC测定RFP耐药率和PCR－SSCP检测的总符合率分别为86.2%和74.1%。检测试验可在3－4h内完成。结论 AS－PCR方法是检测结核菌耐利福平基因突变的敏感和快速方法，可在临床实验室使用并为临床医师提供治疗依据。     

HLA-DQB1基因多态性与湿热内蕴型免疫性不育症相关性研究

目的 :探讨湿热内蕴型免疫性不育症与HLA-DQB1基因多态性的关系。方法 :采用聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对70例抗精子抗体阳性的湿热内蕴型免疫性不育症患者和60例正常健康者的HLA-DQB1基因进行分型研究。结果 :免疫性不育症组HLA-DQB1*0601等位基因频率明显高于正常对照组(P<0.05)。结论 :HLA-DQB1*0601等位基因可能是抗精子抗体阳性的湿热内蕴型免疫性不育症的易感基因。     

应用等位基因特异性PCR检测胆固醇酯转运蛋白基因突变

目的:建立检测胆固醇酯转运蛋白(cholesterol ester transfer protein,CETP)基因6种常见突变的等位基因特异性PCR技术。方法:应用针对CETP基因TaqIB(G→A)、I405V(A→G)、D442G(A→G)、R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)这6种常见的突变位点设计的等位基因特异性PCR技术,对海南汉、黎族人群中CETP基因突变类型进行了检测,同时对经上述等位基因特异性PCR检测的样本进行序列测定。结果:在海南汉、黎族人群中,TaqIB(G→A)突变位点可检测出GG、GA、AA3种基因型,I405V(A→G)突变位点可检测出AA、AG、GG3种基因型,D442G(A→G)突变位点可检测出AA、AG2种基因型,但在海南汉、黎族人群中未检测到R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)3种突变类型,用等位基因特异性PCR鉴定的CETP基因突变的基因分型结果与序列测定结果完全符合。结论:等位基因特异性PCR技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为鉴定CETP基因突变类型的可行方法。