小柴胡汤对HL-60白血病细胞株体外分化的诱导作用研究

目的 观察小柴胡汤对HL-60白血病细胞的体外分化诱导作用,并初步探讨其作用机制.方法 通过药物作用后观察细胞形态学的变化,细胞吞噬功能及硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力的改变;流式测定细胞周期改变和免疫组化检测抑癌基因P53的表达变化初步揭示其作用机制.结果 小柴胡汤能使HL-60细胞显著向成熟粒系细胞分化而且吞噬功能、NBT还原能力出现增强的趋势,以中、高剂量组最为显著(P<0.05);并使 HL-60的细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞数减少,抑癌基因P53表达明显升高(P<0.05).结论 小柴胡汤可诱导HL-60细胞向粒系成熟分化;其作用机制可能与阻滞细胞于G0/G1期,并且上调抑癌基因P53的表达有关.     

番荔枝内酯诱导白血病细胞凋亡的机理

目的　研究番荔枝内酯(squamocin)诱导白血病细胞凋亡的机理。方法　DNA凝胶电泳法、荧光染色等检测细胞凋亡。试剂盒检测caspase-3的活性。Westernblot法检测PARP和caspase-3的剪切片断和磷酸化的SAPK/JNK量的变化。结果　Squamocin处理HL-60细胞后,导致染色质浓缩、片断化,DNA梯形条带出现,完整PARP的116ku条带逐渐减少,而85ku的片断逐渐增加,caspase-3酶的活性也增加。Caspase-3的特异性抑制剂DEVD-CHO预处理HL-60细胞,可阻止squamocin诱导的DNA片断化、PARP的剪切和细胞死亡。Squamocin激活HL-60细胞中SAPK/JNK。结论　Squamocin诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,squamocin激活caspase-3可能与SAPK/JNK的激活相关     

四种砷拮抗剂对三氧化二砷诱导的三种粒系白血病细胞凋亡和端粒酶活性的减量调节作用(英文)

目的:研究巯基供体N-乙酰半胱氨酸(NAC)和二巯丁二钠(NDMS)、抗氧化剂过氧化氢酶(CAT)和Ca~(2 )清除刘(Quin 2)对三氧化二砷诱导的三种粒系白血病细胞凋亡和端粒酶活性改变的调控作用。方法:用流式细胞仪和PCR ELISA法分别检测NAC、NDMS、CAT或Quin 2与三氧化二砷共同作用于三种粒系白血病细胞后其凋亡和端粒酶活性的变 化。结果:三氧化二砷0.6、2.7和8.1μmol/L可分别诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,慢性粒细胞白血病细胞株K562,急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞发生40％-60％的凋亡,同时下调三种细胞的端粒酶活性。NAC 4mmol/L,NDMS 200μmol/L,CAT 80kU/L,Quin 220μmol/L不同程度抑制这种凋亡作用。NAC和CAT既可独立降低三种细胞的端粒酶活性,也可促进三氧化二砷对端粒酶的下调作用,而Quin 2可抑制K562和HL-60细胞中的这种下调作用。结论:三氧化二砷诱导的三种细胞的凋亡过程涉及了疏基失活、自由基的改变、细胞内Ca~(2 )浓度改变及端粒酶活性下降。NAC、NDMS、CAT及Quin 2可不同程度拮抗三氧化二砷对三种细胞的作用。     

Bcl-2 siRNA抑制HL-60细胞bcl-2基因表达

目的应用RNA干扰技术观察Bcl2siRNA对白血病细胞HL60中bcl2基因表达的影响,探讨siRNA技术在白血病治疗中的作用。方法利用化学合成法体外化学合成Bcl2siRNA,将Bcl2siRNA与HL60细胞共孵育,用MTT法、荧光染色观察细胞增殖及凋亡情况,用RTPCR检测Bcl2mRNA水平,用荧光染色测Bcl2蛋白水平。结果Bcl2siRNA与HL60细胞共孵育48h后,HL60细胞凋亡率增加,Bcl2mRNA水平下调,Bcl2蛋白表达水平降低。转染GAPDHsiRNA组的细胞对Bcl2表达无影响。结论Bcl2siRNA能够特异性降低Bcl2mRNA水平及蛋白质的表达,促进HL60细胞凋亡。     

二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立

目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。     

阿霉素在人白血病敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60/ADR的分布和积聚变化

目的了解化疗药物阿霉素(ADR)在人白血病敏感细胞株HL-60和多药耐药细胞株HL-60/ADR细胞内的分布和积聚变化及其与耐药的关系。方法应用共聚焦激光扫描显微镜和流式细胞术研究ADR在细胞内的分布和积聚,以及维拉帕米、BSO、布雷菲尔得菌素、氯喹对细胞内ADR异常分布的影响。以3种特异染色线粒体、高尔基体和溶酶体的荧光物质Rhodamine123、NBD-ceramide和中性红作为探针,鉴定分隔储留ADR的细胞器。结果与ADR在HL-60细胞核、胞质均匀分布不同,在HL-60/ADR,ADR呈点棘状分布于细胞质,核内ADR荧光很少。这种分布方式与NBD-ceramide荧光在该细胞的分布极其相似。BSO和布雷菲尔得菌素可逆转ADR在HL-60/ADR的异常分布和积聚,而维拉帕米和氯喹无此作用。结论ADR在耐药细胞的异常分布和积聚与肿瘤细胞耐药的形成有关。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)对急性早幼粒细胞系HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :应用四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;倒置显微镜观察细胞形态学变化 ;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数 (AI) ;流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡 ;RT PCR半定量检测生存素mRNA的表达。结果 :5～ 2 0 μmol·L-1生存素ASODN对HL 6 0细胞增殖均有抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性。ASODN组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论 :生存素ASODN能有效抑制HL 6 0细胞生存素mRNA的表达并诱导细胞凋亡 ,表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

60Co γ照射加深低温保存对大鼠同种带瓣主肺动脉免疫原性的作用

目的 本实验应用60Co γ射线照射加液氮深低温保存大鼠同种带瓣主肺动脉(valvedpulmonary homograft conduits,VPHC),并建立大鼠VPHC颈总动脉移植模型,观察不同照射剂量对同种带瓣主肺动脉免疫原性的作用,寻找合适照射剂量,为进一步基础研究及临床应用提供理论依据.方法 1月龄封闭群Wistar大鼠50只作为供体鼠,雌雄不拘,随机分为单纯深低温保存组(实验对照组)、300 Gy照射组、600 Gy照射组、900 Gy照射组和1200 Gy照射组;成年雄性SD大鼠50只作为受体鼠,随机分为5组;另取10只SD大鼠行颈总动脉切断吻合术,作为空白对照组.应用流式细胞术对VPHC移植术后1周、2周、3周受体鼠外周血行CD4+T细胞及CD8+T细胞检测.结果 照射组VPHC移植术后1周、2周、3周CD4+T细胞、CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与实验对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 应用60Co γ对VPHC进行照射在保持VPHC活性的同时明显降低了其免疫原性.     

Deoxyribonucleic acid of Chlamydia trachomatis in fresh tissue from the Fallopian tubes of patients with ectopic pregnancy

OBJECTIVES: The role of persistent chlamydial infection of the Fallopian tubes in ectopic pregnancy is still unresolved. Therefore, we examined tissue of the Fallopian tubes from patients with ectopic pregnancy for the presence of Chlamydia trachomatis. In addition, other markers of C. trachomatis infection implicated in the pathogenesis of tubal damage were studied including antibodies to heat shock protein 60 of chlamydial and human origin. STUDY DESIGN: Fresh frozen tubal tissue from 55 patients with ectopic pregnancy in a hospital setting were examined for the presence of C. trachomatis DNA by polymerase chain reaction (PCR) and blood sample were analysed for antibodies to C. trachomatis including heat shock protein 60 (hsp60). RESULTS: Chlamydial DNA was not detected in any of the 55 tubal specimens using a commercial test, Cobas Amplicor, Roche, and an in-house real time PCR able to detect a few copies of the organism. Logistic regression showed that chlamydial IgG antibodies were more common in a subgroup of patients with previous PID than in controls (OR=7.84, CI 1.78-34.6). Specific antibodies to hsp60 of chlamydial (OR=7.00, CI 1.50-32.6) but not of human origin (OR=2.13, CI 0.14-31.6) were associated with ectopic pregnancy in this group. CONCLUSIONS: No evidence of persistent infection of C. trachomatis in the fallopian tubes at the time of ectopic pregnancy was found in this study.     

人白血病细胞裸鼠异种移植模型的建立

我们成功地将人T淋巴细胞白血病细胞（MOLT－4）、人早幼粒细胞白血病细胞（HL-60）移植到裸鼠体内。裸鼠经环磷酰胺（2.5mg／只）预处理后分别将（5～10）×10~6MOLT-4细胞及（2～4）×10~7HL－60细胞移植到动物皮下能形成实体瘤，该肿瘤呈进行性生长。MOLT－肿瘤在裸鼠间连续传代4次，移植成功率为69.2％，HL-60肿瘤连续传代3次，成功率为100％。肿瘤染色体分析属于人体细胞核型，细胞学研究显示裸鼠体内MOLT-4、HL-60细胞与体外培养的细胞具有良好的一致性，故裸鼠体内MOLT-4、HL-60肿瘤模型的建立对于研究人白血病提供了有用工具。