重组人粒细胞集落刺激因子rhG—CSF的纯化工艺探讨

粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor G-CSF)主要来源于巨嗜细胞,内皮细胞及纤维母细胞。能高度特异性的刺激中性白细胞系的功能活化因子。在这里我们对rhG-CSF的纯化工艺进行探讨。通常对rhG-CSF的纯化采用S-200和DE柱进行纯化,在这里我们采用另外一种方法,即采用Q柱和CM柱进行纯化。并对其比较讨论。     

粒细胞集落刺激因子影响白血病细胞增生的研究

 目的 探讨粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对急性白血病（AL）细胞增生的影响。方法 急性髓系白血病（AML）患者30例,急性淋巴细胞白血病（ALL）患者20例,正常对照20例。化疗前留取骨髓5 ml,制备其单个核细胞（MNC）悬液,并分别加入不同浓度G-CSF培养24 h后用流式细胞仪（FCM）检测其DNA倍体的量。同时检测MNC的G-CSF受体（G-CSFR）表达率。结果 骨髓MNC培养24 h后各浓度的DNA倍体量在AML随着G-CSF浓度的增加有线性上升趋势,在ALL和正常对照呈直线。骨髓MNC G-CSFR表达率AML（68.59±13.99）%;ALL（1.90±0.93）%;正常对照（70.50±10.80）%。结论 G-CSF 可促进AML细胞增生,对ALL和正常粒细胞增生无促进作用。G-CSFR于恶性及正常粒细胞表达,淋巴细胞不表达。     

The in vitro biological activity of selected South African Commiphora species

Ten South African Commiphora (Burseraceae) species were investigated to validate their use in traditional healing rites. The leaf and stem extracts of each species were analysed for the anti-oxidant (ABTS and DPPH assays), antimicrobial (MIC and death kinetic assays), anti-inflammatory (5-LOX assay), anticancer (SRB assay) properties, as well as the cytotoxic effects (tetrazolium-based assay). The best anti-oxidant activity (ABTS assay) was observed for the stem extracts of Commiphora tenuipetiolata IC(50)=5.10 microg/ml), Commiphora neglecta (IC(50)=7.28 microg/ml) and Commiphora mollis (IC(50)=8.82 microg/ml). Extracts generally exhibited poor anti-oxidant activity in the DPPH assay, with the exception of Commiphora schimperi (stem), Commiphora neglecta (stem), Commiphora tenuipetiolata (stem and leaf), and Commiphora edulis (stem), with IC(50) values ranging between 7.31 and 10.81 microg/ml. The stem extracts exhibited moderate to good 5-LOX inhibitory activity with Commiphora pyracanthoides (stem) displaying the greatest inhibitory effect (IC(50)=27.86+/-4.45 microg/ml). For the antimicrobial (MIC) assay, a greater selectivity was exhibited by the extracts against the Gram-positive bacteria (0.01-8.00 mg/ml) and the yeasts (0.25-8.00 mg/ml) than against the Gram-negative bacteria (1.00-8.00 mg/ml). Using death kinetic studies (time-kill studies), the rate at which Commiphora marlothii (stem) kills Staphylococcus aureus over a 24h period was determined. Mostly, a concentration-dependent antibacterial activity was observed beginning after ca. 30 min. All concentrations exhibited antibacterial activity, with complete bactericidal effect achieved by the 24(th) hour. The most active Commiphora species against the HT-29 cells (SRB anticancer assay) were Commiphora glandulosa (leaf and stem) and Commiphora marlothii (leaf). The MCF-7 cells (SRB anticancer assay) exhibited the highest sensitivity to indigenous Commiphora species, with Commiphora edulis (leaf and stem), Commiphora glandulosa (leaf and stem), Commiphora marlothii (leaf), Commiphora pyracanthoides (leaf and stem), Commiphora schimperi (stem), and Commiphora viminea (stem) all possessing a percentage inhibition greater than 80% at 100 microg/ml. Commiphora glandulosa (leaf and stem) and Commiphora pyracanthoides (leaf and stem) were the two most active species against the SF-268 cells (SRB anticancer assay), with IC(50) values ranging between 68.55+/-2.01 and 71.45+/-1.24 microg/ml. The majority of the Commiphora extracts were largely non-cytotoxic against Graham human kidney epithelial cells when investigated in the MTT assay.     

粒细胞集落刺激因子动员骨髓内皮祖细胞对急性肾损伤的修复作用

目的急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)影响肾内皮细胞的结构和功能,所以内皮的修复是AKI治疗的重要靶点。观察应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)对由内毒素诱导的AKI小鼠外周血中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的数量、骨髓源性EPCs的增殖能力,以及向肾组织中归巢的影响。并观察由骨髓动员的EPCs对肾损伤的修复作用。方法健康CD-1雄性小鼠30只,随机分为假手术组(A组)、肾损伤对照组(B组)和G-CSF预处理肾损伤组(C组),每组10只。观察各组小鼠肾功能以及肾组织形态学变化、炎性因子水平、外周血中EPCs数量、肾组织细胞凋亡指数、CD34+和胎肝激酶-1(fetla liver kinase 1,FLK-1+)阳性细胞的表达。并获取小鼠骨髓,分离、培养EPCs,检测EPCs的增殖、迁移和黏附能力。结果 B组和C组小鼠肾功能受损,炎性反应、肾组织学改变前者比后者重(P<0.05);外周血EPCs含量B组比A组多,明显比C组少,肾组织CD34和FLK阳性细胞的表达B组比A组多,但少于C组(P<0.05);肾细胞凋亡指数B组最高(P<0.05);B组骨髓来源的EPCs数量比A组多,但增殖能力和迁移能力与A组比较差异无统计学意义,各指标均明显低于C组(P<0.05)。结论 G-CSF可降低AKI小鼠炎性反应的水平,有效动员骨髓来源的EPCs,并促进其增殖和迁移,增加外周血EPCs含量,对AKI小鼠肾功能起到保护作用。     

粒细胞集落刺激因子对急性脊髓损伤中小胶质细胞的作用

目的探讨粒细胞集落刺激因子对急性脊髓损伤条件下小胶质细胞神经保护/损伤功能转变的影响。方法建立小鼠半切脊髓损伤模型。体内实验是造模成功术后第1天开始给予粒细胞集落刺激因子,连续3 d,进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分后处死,取脊髓切片进行免疫荧光检测小胶质细胞的募集。体外实验是取小鼠脊髓的组织上清液,加到小胶质细胞株BV-2培养基中共培养24 h,治疗组加入粒细胞集落刺激因子12 h后收集细胞。采用RT-PCR和免疫印迹法,检测小胶质细胞炎症因子的分泌及信号通路的改变。结果粒细胞集落刺激因子能够促进急性脊髓损伤后运动功能的恢复,促进小胶质细胞募集。体外实验结果显示,粒细胞集落刺激因子可以降低小胶质细胞NF-κB信号通路p65的活性,改变小胶质细胞因子的分泌,促炎性因子IL-1β表达降低,抗炎因子TGFβ表达升高。结论应用粒细胞集落刺激因子治疗脊髓损伤可以促进小鼠运动功能的恢复并调节小胶质细胞的分布和功能,诱导小胶质细胞向神经保护的方向转化。     

临沂市2004年部分健康人群流脑免疫水平检测

[目的]了解临沂市健康人群流脑免疫水平,掌握流脑流行趋势.[方法]2004年,对临沂市兰山区部分健康人群进行流脑抗体水平检测.[结果]合格采样216人,流脑A群、C群抗体阳性率分别为97.69%,86.57%,GMT分别为1：22.48、1：11.03.[结论]临沂市健康人群流脑A群、C群抗体阳性率、GMT均较高,极有可能存在C群流脑菌的自然感染.     

rhEPO、rhG-CSF对芥子气全身吸收中毒犬疗效观察

目的　评价重组人红细胞生成素 (rhEPO)、重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对芥子气全身吸收中毒犬的治疗效果。方法　以成年家犬为中毒模型 ,共 10条 ,中毒剂量为 12mg kg,皮下注射。随机分为中毒对照组 4条 ,治疗组 6条 ,治疗组动物在中毒后 30min即进行相应的药物治疗。中毒前所有犬各测一次血常规的基础值 ,中毒后每日监测血常规的动态变化 ,持续 1周。结果　对照组犬于 3天内死亡 3条 ,治疗组犬全部成活。对照组白细胞计数 (WBC)在中毒后第 3开始剧烈下降 ,红细胞计数 (RBC)在中毒后即有轻度上升 ,之后回落 ;而治疗组WBC、RBC在中毒后 1周内均无显著变化。两组的淋巴细胞计数 (LYM)在中毒后都有显著下降 ,治疗组稍好于对照组。治疗组的网织红细胞计数 (RC)于中毒后第 2天开始显著增长 ,之后维持在高水平 1周左右。治疗组的RC变化不明显。结论　犬芥子气中毒后 ,应用rhEPO、rhG CSF能明显改善中毒犬的部分血常规指标     

大鼠脑出血周边组织脑水含量、细胞凋亡和Bax表达的变化及粒细胞集落刺激因子的影响

目的研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对脑出血(ICH)大鼠神经功能损伤、脑水肿的影响,粒细胞集落刺激因子对大鼠脑出血周边组织Bax表达及细胞凋亡的影响。方法 Wistar大鼠112只,随机分为脑出血组、脑出血+G-CSF组,两组各分为(出血前、出血后4 h、6 h、12 h、24 h、72 h、7 d)7个时间点。免疫组化法测定大鼠脑出血周边组织Bax的表达,利用原位末端标记法测定出血周边组织中神经细胞的凋亡情况。并在脑出血后24 h、48 h、72 h、7 d测定大鼠神经功能评分和脑含水量。结果脑出血后24 h开始大鼠就出现明显的神经功能缺失症状,G-CSF治疗后神经功能缺失症状得到明显改善,在1 w内的各个时间点两组比较差异有显著性(P<0.01)。脑出血大鼠24 h即出现脑水肿,脑水肿形成的高峰时间在ICH后48 h~7 d左右,ICH大鼠在G-CSF治疗后脑水肿形成明显减轻,两组间比较差异有显著性(P<0.05;P<0.01)。大鼠脑出血周边组织Bax表达4 h开始升高(P<0.01),大约24 h左右Bax表达达峰值。大鼠脑出血周边组织6 h出现凋亡细胞,12 h上升显著(P<0.01),3 d达峰值,7 d时仍存在较多凋亡细胞。G-CSF干预后,Bax表达及凋亡细胞数量与脑出血组对应时间点比较显著下降(P<0.01)。结论脑出血大鼠出现明显脑水肿和神经功能损伤,脑出血周边组织神经细胞存在长时间凋亡。G-CSF可抑制大鼠脑出血后Bax蛋白表达,从而抑制神经细胞凋亡。     

动员自体骨髓干细胞对大鼠缺血/再灌注损伤后细胞增殖的影响

目的 探讨应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体骨髓干细胞对大鼠脑缺血/再灌注损伤后细胞增殖的影响.方法 大鼠随机分为G-CSF治疗组及对照组,根据取样时间点的不同每组又分为7、14、21d共3组,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型(MCAO/R),治疗组于MCAO/R后24h予G-CSF 50μg/(kg·d),连续5d,对照组给予皮下注射等量生理盐水.观察不同时间点大鼠的神经功能评分.采用5-溴-2′-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记处于增殖状态的细胞,应用免疫组化法检测BrdU阳性细胞.结果 大鼠脑缺血/再灌注后7、14、21d G-CSF治疗组神经功能评分明显优于对照组,有显著性差异(P＜0.05),G-CSF治疗组大鼠在脑缺血/再灌注后7、14、21d均可检测到BrdU阳性细胞,可见接近梗死的同侧皮质、室管膜下区域及血管腔周围,BrdU阳性细胞计数显示各个时间点G-CSF治疗组阳性细胞数明显多于对照组(P＜0.05).结论 应用G-CSF动员自体骨髓干细胞治疗MCAO/R大鼠,能够改善脑缺血动物的神经功能,促进骨髓干细胞在病损脑组织周围的增殖.     

检测腹水G-CSF、PCT对肝硬化腹膜炎患者的临床价值

目的探讨自发性细菌性腹膜炎（SBP）患者腹水粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、降钙素原（PCT）水平的变化和临床意义。方法采用双抗体夹心ELISA法测定G-CSF,免疫发光法测定PCT。结果32例SBP怠者血清和腹水G-CSF、PCT水平明显高于24例漏出性腹水患者（P〈0．01）。SBP患者腹水中的G-CSF、PCT水平明显高于血清中的水平。随着感染的控制,腹水中G-CSF、PCT水平连渐下降（P〈0．05）。结论腹水G-CSF和PCT的检测有助于对SBP的诊断和疗效观察。