结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达载体构建及在大肠杆菌中的表达

目的 构建结核分枝杆菌Ag85B／GSF融合蛋白表达质粒，并在大肠杆菌(E．coli)中诱导表达。方法 以质粒pUC18／Ag85B为模板，用PCR法扩增结核杆菌Ag85B基因，扩增的Ag85B上游含有EcoR Ⅰ酶切位点，下游含有SalⅠ酶切位点；将Ag85B基因定向插入质粒pGEX-4T-1中，构建原核表达质粒pGEX-Ag85B并转化E．coli B121，筛选阳性重组子，限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达，SDS-PAGE和Westem blot鉴定结果。结果 成功构建原核表达质粒pGEX-Ag85B并表达出Mr约56000大小的Ag85B／GSY融合蛋白，表达量占总菌体的30％。结论 为进一步进行纯化Ag85B蛋白和研究其在膀胱肿瘤治疗中的作用奠定了基础。     

一期前路病灶清除、后路内固定并横突间植骨融合治疗胸腰椎结核

目的:评价一期前路病灶清除、后路内固定并横突间植骨融合治疗胸腰椎结核的临床疗效。方法:采用一期前路病灶清除、后路内固定并横突间植骨融合手术治疗胸、腰椎结核患者17例,按照Frankel分级评定患者手术前后的神经功能,根据X线片评价植骨融合时间,测量术前、术后后凸角度及随访期内的角度丢失。结果:17例患者结核病灶清除彻底,切口均Ⅰ期愈合、无窦道形成,结核治愈无复发。后凸畸形平均矫正19.2°;在随访期内,后凸畸形矫正有1°~4°丢失。X线片示植骨界面骨性融合时间平均5个月。3例出现并发症,对症处理后好转。结论:一期前路病灶清除、后路内固定并横突间植骨融合治疗胸、腰椎结核的疗效确切,具有迅速缓解症状、早期离床活动和较理想的脊柱矫形等优点,是治疗胸、腰椎结核的有效方法。     

Comparison of redox and D29 phage methods for detection of isoniazid and rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis

Rapid, accurate and inexpensive methods are essential to detect drug-resistant Mycobacterium tuberculosis and allow timely application of effective treatment and precautions to prevent transmission. The proportion method, the MTT and Alamar Blue redox methods, and the D29 mycobacteriophage assay, were compared for their ability to detect resistance to isoniazid and rifampicin. When tested against a panel of known M. tuberculosis strains, the redox methods and the D29 assay showed good sensitivity and specificity compared to the proportion method, suggesting that they could be useful alternatives for identifying multidrug resistance in M. tuberculosis.     

Mycobacterium Tuberculosis Infection Incidence in Hospitalized Renal Transplant Patients in the United States, 1998–2000

The incidence, risk factors, and prognosis for Mycobacterium tuberculosis (MTB) infection have not been reported in a national population of renal transplant recipients. We performed a retrospective cohort study of 15,870 Medicare patients who received renal transplants from January 1, 1998 to July 31, 2000. Cox regression analysis derived adjusted hazard ratios (AHR) for factors associated with a diagnosis of MTB infection (by Medicare Institutional Claims) and the association of MTB infection with survival. There were 66 renal transplant recipients diagnosed with tuberculosis infection after transplant (2.5 cases per 1000 person years at risk, with some falling off of cases over time). The most common diagnosis was pulmonary TB (41 cases). In Cox regression analysis, only systemic lupus erythematosus (SLE) was independently associated with TB. Mortality after TB was diagnosed was 23% at 1 year, which was significantly higher than in renal transplant recipients without TB (AHR, 4.13, 95% CI, 2.21, 7.71, p < 0.001). Although uncommon, MTB infection is associated with a substantially increased risk of mortality after renal transplantation. High-risk groups, particularly those with SLE prior to transplant, might benefit from intensified screening.     

PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌耐药性

目的：探讨耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药性的关系以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(poly merase chain reaction-single strand cinfomlation polymorphism，PCR-SSCP)方法的临床应用价值。方法：用PCR-SSCP方法检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比。结果：经常规药敏试验检测，58株结核分枝杆菌临床分离株中共有41株耐药，其中，耐异烟肼(INH)为35株，高耐药株27株；耐利福平(RFP)为31株，高耐药株24株；耐链霉素(SM)有31株，高耐药株26株。同时耐3种药物的有21株(51．2％)，耐2种药物的14株(34．1％)，单耐药株6株(14．6％)．PCR-SSCP方法对58株临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变的检测率为40％(23／58)，45％(26／58)，38％(22／58)，其中检出3个基因同时突变的有13株(32％)，2种基因突变的12株(29％)，1种基因突变的有10株(23．8％)．常规药敏试验与PCR-SSCP法检出结核分枝杆菌同时耐3种药物的符合率为61．9％(13／21)，检出耐2种药物的符合率为85．70k，(12／14)，检出耐1种药物的符合率为50％(3／6)．高耐药株中突变率为80．5％(62／77)，低耐药株中突变率为60％(12／20)．结论：PCR-SS-CP方法对耐2种以上药物的结核杆菌检出率较高，且耐药基因突变率随着耐药浓度增高而增高。将PCR-SSCP法与药敏试验联合应用可互相弥补，已成为临床指导用药的好方法。     

肾结核90例临床分析

目的 探讨肾结核的临床特征及有效治疗方法。方法 回顾性分析90例肾结核患者的临床资料。结果 近年来肾结核病例仍较多见，早期诊断困难，单纯药物治疗可治愈者约16％，手术切除仍是主要治疗方法。结论 不典型肾结核的发病率仍较高。尿常规、B超、静脉肾盂造影为主要诊断方法，诊断性治疗仍是确诊的重要依据。     

内固定技术在脊柱结核外科治疗中的应用

内固定技术的应用是脊柱结核外科治疗的新发展,其目的是充分发挥内固定即刻重建脊柱稳定性的作用,促进局部结核控制和骨性融合达到结核病灶的静止与修复。临床实践证明在结核病灶局部植入组织相容性好、耐腐蚀性强的钛合金材料不会增加术后感染及结核扩散的发生率。内固定应用的适应证:①脊柱结核造成椎体破坏明显,在病灶清除或切除后必须用植骨来修复骨缺损及恢复椎间高度者;②病灶清除或切除后对脊柱的稳定性有明显损害者;③脊柱后凸畸形需矫正者。采用内固定时,须根据患者的具体病情,选择前路或后路内固定方法,采用Ⅰ期或Ⅱ期手术。应该明确,脊柱结核外科治疗只是辅助治疗方法,有效的抗结核化疗才是脊柱结核治疗的基础。     

结核分枝杆菌Rv1009基因蛋白的克隆和表达

目的 克隆表达结核分枝杆菌促Rv1009基因,序列测定正确后进行融合、表达.方法 采用热启动聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Rv1009编码基因,用限制性内切酶消化后插入pGEX 4T-2载体中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,目的基因经IPTG诱导,表达Rv1009基因蛋白.结果 经PCR扩增在1300bp处发现一条目的片段,获得了结核分枝杆菌H37Rv株Rv1009基因蛋白,经诱导后高效表达分子量为64KD的外源蛋白,与预期分子量大小一致,凝胶自动扫描分析,在A600值为0.6,IPTG终浓度为0.3 mmol/L,诱导表达3 h时融合蛋白表达量即达峰值,占菌体总蛋白的22.8%.结论 构建了结核分枝杆菌Rv1009基因重组表达载体,获得了RPF样融合蛋白的高效表达,为今后深入研究奠定了基础.     

HBV、TB合并感染时抗TB治疗对肝功能的影响

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)、结核(TB)杆菌合并感染时抗TB药物所致肝损伤的临床及组织学特点。方法:单纯TB感染者45例,TB合并HBV感染者35例,前4月均服用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇,后2月服用异烟肼、利福平。每2～4周复查肝功能、HBV标记物、T细胞亚群等指标,部分患者进行了肝穿刺病理检查。结果:TB HBV组肝功能异常发生率为34.3%,较单纯TB组高,发生时间较单纯TB组早半月,发生平均年龄小8岁;谷丙转氨酶水平、肝组织学炎症积分均较TB组高(P<0.05);肝功能异常者中80%为HBeAb阳性,T细胞免疫功能紊乱较重,CD4 细胞明显减少(P<0.05)。结论:HBV、TB合并感染时,抗TB药物的肝毒性增强,治疗过程中应及时复查肝功能。