清燥救肺汤对结肠癌小鼠凋亡相关蛋白表达的影响

【目的】观察清燥救肺汤对CT26结肠癌细胞增殖及凋亡相关蛋白如增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,细胞外调节蛋白激酶(ERK)、Janus激酶1(JAK1)、信号传导及转录激活因子1(STAT1)磷酸化蛋白表达的影响。【方法】50只雄性BALB/c小鼠,随机分为模型组,化疗组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只。经小鼠右腋下注射CT26细胞以建立结肠癌模型。清燥救肺汤治疗组于造模前2周即开始以15.2、7.6、3.8 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量的清燥救肺汤灌胃给药,化疗组在造模完成后以5-氟尿嘧啶(5-FU)25 mg·kg~(-1)剂量腹腔注射给药(隔日1次),模型组以等体积生理盐水灌胃给药。2周后,处死各组小鼠,取瘤组织,称瘤体质量并计算抑瘤率,Western blot法检测p-ERK、PCNA蛋白表达,免疫组织化学法检测p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。【结果】清燥救肺汤高、中剂量组瘤体质量,p-ERK、p-JAK1蛋白表达显著降低,p-STAT1蛋白表达显著升高,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);清燥救肺汤高、中、低剂量组PCNA蛋白表达明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)。【结论】清燥救肺汤能显著抑制荷CT26小鼠结肠癌细胞增殖,其机理可能与降低p-ERK、PCNA、p-JAK1及升高p-STAT1蛋白表达有关。     

小分子ERK抑制剂的研究进展

细胞外信号调节激酶(ERK)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶。作为RAS-RAF-MEK-ERK信号通路中关键的下游蛋白,其异常活化在肿瘤的发生发展中起着重要作用。选择性ERK1/2抑制剂能够阻断ERK信号通路,同时克服上游靶点突变而导致的耐药性。本文概述了MAPK信号通路的组成、ERK的结构与功能以及ERK信号通路在肿瘤发生发展中的作用,并重点介绍一些具有代表性的处于临床和临床前研究阶段的ERK抑制剂。     

白藜芦醇抑制胃癌细胞株MKN45增殖的机制研究*

目的 通过研究白藜芦醇抑制胃癌MKN45细胞增殖及对丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的影响,探讨白藜芦醇抗胃癌的作用机制。方法 体外常规培养胃癌MKN45细胞,将细胞分为对照组、MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059组（PD98059组）、白藜芦醇低剂量组（100?μmol/L）、 白藜芦醇高剂量组（400?μmol/L）。各组细胞处理1、2和4?h后,MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blotting法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白的表达,细胞免疫化学法检测Ras、Raf、MEK、ERK1/2蛋白荧光强度的变化。结果 与对照组比较,PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞在处理1、2和4?h后,细胞增殖受到抑制（P?<0.05）,且呈时间剂量依赖性;PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞Ras、Raf、MEK和ERK1/2表达下降,差异有统计学意义（P?<0.05）,且白藜芦醇的作用呈剂量依赖性（P?< 0.05）;MEK和ERK1/2蛋白主要定位于细胞质中,且PD98059组、白藜芦醇低剂量组和白藜芦醇高剂量组细胞ERK1/2的荧光强度均减弱。结论 白藜芦醇呈剂量依赖性抑制胃癌细胞株MKN45的增殖,可能与抑制MEK/ERK信号通路,减弱Ras、Raf、MEK和ERK1/2的表达有关。     

滋肾活血法联合低分子肝素改善小鼠复发性流产及对VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路的影响

目的 通过观察滋肾活血法联合低分子肝素对复发性流产小鼠流产率及蜕膜中血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体2/磷酸化的细胞外调节蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶（VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK）信号通路的影响,以探讨其作用机制。方法 68只未孕CBA/J雌鼠,26只DBA/2雄鼠,8只BALB/c雄鼠,按雌：雄=2：1,建立CBA/J×DBA/2习惯性流产小鼠模型50只,随机数字法分为模型组（蒸馏水）、LMWH组（1000U/kg）、滋肾活血方低剂量（3.9g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方中剂量（11.7g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方高剂量（35.1g/kg）+LMWH（1000U/kg）组,每组10只;建立CBA/J×BALB/c正常妊娠小鼠模型10只作为正常对照组（蒸馏水）。按照人鼠体表面积换算每日滋肾活血方灌胃药量和LMWH注射量,给药干预2周。计算各组小鼠胚胎丢失率;免疫组化法测定小鼠蜕膜中VEGF蛋白的表达;蛋白质印迹法（Western blot）测定小鼠蜕膜中VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK表达。结果 与正常对照组比较,模型组胚胎丢失率上升（38.38%比7.29%,P<0.05）,该组免疫组化VEGF蛋白平均光密度值降低[（0.22±0.07）比（0.23±0.01）,P<0.01],该组WB结果显示VEGF、VEGFR-2蛋白表达下降[VEGF：（2.01±0.08）比（2.90±0.06）;VEGFR-2：（2.62±0.01）比（3.15±0.08）,P均<0.05]。与模型组比较,LMWH组、滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组和滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率下降（23.76%、16.83%、12.75%、10.10%比38.38%,P均<0.05）,免疫组化结果显示上述4组的VEGF蛋白平均光密度值上升[（0.24±0.04）、（0.29±0.02）、（0.32±0.06）、（0.33±0.10）比（0.22±0.07）,P均<0.05],WB结果显示上述4组的VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升[VEGF：（3.13±0.09）、（2.93±0.73）、（3.31±0.18）、（3.38±0.15）比（2.01±0.08）;VEGFR-2：（3.19±0.02）、（3.53±0.10）、（3.77±0.12）、（3.83±0.09）比（2.62±0.01）;p-ERK：（1.57±0.35）、（1.79±0.06）、（1.73±0.07）、（1.75±0.06）比（1.39±0.04）;ERK：（3.82±0.08）、（4.22±0.09）、（4.24±0.04）、（4.19±0.27）比（3.42±0.14）,P均<0.05]。与LMWH组比较,滋肾活血方低剂量+LMWH组胚胎丢失率无明显差异（P＞0.05）,滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率降低更显著（P均<0.05）;免疫组化结果显示VEGF蛋白平均光密度值在滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组上升（P均<0.05）;WB结果显示上述3组的VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升（P均<0.05）,VEGF蛋白表达无明显差异（P均>0.05）。结论 滋肾活血法联合LMWH能够改善复发性流产小鼠妊娠结局,其机制可能与激活VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路有关。     

心肌缺血／再灌注损伤中细胞凋亡的信号转导通路

心肌缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion inju- ry)是心血管病理生理学中一个重要的病生理过程。它涉及许多临床常见疾病和情况,包括冠状动脉痉挛、心肌梗死后溶栓或介入治疗、冠状动脉旁路移植术、体外循环下心脏手术以及心脏骤停后心肺复苏等。1960年Jennings等通过犬的冠状动脉结扎试验,第一次观察到了心肌缺血/再灌注损伤现象,并指出组织缺血缺氧性损伤不但发生于缺血当时,更主要是发生于恢复血液灌注之后。1972年Kerr等首次从形     

全脑缺血再灌注后磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响

目的：全脑缺血再灌注后磷酸化ERK（p-ERK）蛋白的表达与细胞凋亡的关系及应用ERK通路抑制剂PD98059后对其表达的影响，以探讨ERK通路在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：健康雄性SD大鼠90只，随机分为三组：缺血再灌注组（IR，n=30）：采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型，6min缺血后给予再灌注。假手术组（PO，n=30）：只暴露血管而不夹闭，PD98059组（PD，n=30）：缺血前20min经尾静脉注入PD98059，另两组予以生理盐水行干预。各组动物于再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死，将脑组织切片进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL检测。结果：HE染色结果PD组变化显著，细胞破坏更严重，于各时间点细胞形态变化较IR组更为明显；IR组p-ERK在海马CA1区锥体细胞未见表达，CA3区于再灌注后2h有弱表达，于再灌注6h达高峰后逐渐下降，至再灌注后48h未见表达，PD组表达弱于IR组（P〈0．05）；IR组中CA1区2h即有散在的凋亡细胞，24h～48h达峰值，PD组各时点于各区凋亡细胞计数多于IR组（P〈0．05）。结论：ERK信号转导通路在脑缺血再灌注中参与了缺血后神经元的保护，发挥抗凋亡作用。     

应激对大鼠海马CREB、ERK活性的影响

目的探讨不同时段的应激对大鼠海马环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、细胞外信号调节激酶(ERK)活性的影响。方法将成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为5组:对照组(A)、应激1次组(B)、应激1周组(C)、应激2周组(D)和应激4周组(E),每组动物6只。应激模型为强迫大鼠游泳,每天15min。采用Westernblot检测各组大鼠海马CREB、ERK的磷酸化及总蛋白(p-CREB和t-CREB、p-ERK/MAPK和ERK/MAPK)水平。结果B和C组大鼠海马组织的p-CREB水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05);D和E组大鼠海马组织的p-CREB明显低于对照组(P<0.05)。各应激组t-CREB水平与对照组比较均差异无显著性(P>0.05)。C、D和E组大鼠海马p-ERK44和p-ERK42的水平显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);B组大鼠海马p-ERK44和p-ERK42的水平与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。各应激组和对照组大鼠海马ERK44和ERK42的总蛋白水平比较均差异无显著性(P>0.05)。结论慢性应激降低大鼠海马CREB的活性,短时间和慢性应激均能降低大鼠海马ERK的活性。     

脊髓缺血再灌注中ERK1／2作用的初步研究

目的:研究细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases1/2,ERK1/2)在脊髓缺血再灌注中的作用及机制.方法:观察不同时间段脊髓缺血再灌注标本的形态学改变,Westem blot检测脊髓标本中ERK1/2的磷酸化,免疫组织化学染色分析磷酸化ERK1/2(pERK1/2)在神经细胞内的定位表达.结果:脊髓缺血30 min/再灌注2 h ERK1/2发生磷酸化,并持续至再灌注24 h;对照组、脊髓缺血30 min/再灌注5 min至再灌注1 h,免疫组织化学染色未检测到pERK1/2在运动神经细胞内表达,脊髓缺血30 min/再灌注2 h至再灌注24 h,pERK1/2在运动神经细胞胞浆及胞核内均表达,且胞浆内表达异常显著.结论:脊髓缺血再灌注时ERK1/2发生磷酸化,pERK1/2过度滞留于细胞浆可能与脊髓缺血再灌注损伤引发的神经细胞凋亡有关.     

人肝癌组织中ERK2和PI3K的表达研究

目的应用免疫组化方法检测原发性肝癌组织中PI3K和ERK2的表达，并探讨其在肝癌发生发展过程中临床病理意义。方法采用免疫组织化学法，检测50例肝癌、15例非癌肝组织中的PI3K和ERK2表达情况。结果ERK2、PI3K阳性表达率在肝癌组织明显高于非癌肝组织，与患者年龄、性别、肿瘤组织分化程度、病理分型、AFP值、肝硬化、肝内转移、癌栓、大体形态、肿块最大径等临床病理特征参数没有相关性。但在高分化肝癌中，两者的表达评分有相关性。结论ERK和PI3K途径在肝癌发生过程中均存在异常且两者可能存在某种协调关系。     

颐脑解郁方对抑郁大鼠脑内ERK通路的影响

目的:观察抑郁大鼠脑内细胞外信号调节激酶(ERK)通路的表达及颐脑解郁方的干预作用。方法:建立抑郁模型,采用蛋白印迹(Western Blot)实验方法,研究ERK1/2在抑郁模型大鼠脑内左前额叶皮质、海马的表达及颐脑解郁方的干预作用。结果:模型组大鼠海马、前额皮质的ERK1/2表达明显下降,与正常组相比较,有显著性差异(P0.05,P0.01);颐脑解郁方干预后可上调ERK1/2在脑内的表达,与模型组相比有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论:抑郁模型大鼠脑内ERK1/2表达降低,颐脑解郁方可使之明显上调,颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与上调ERK1/2信号转导通路有关。