Comparison of bacterioplankton communities in three heavily polluted streams in China

Objective To compare the bacterioplankton communities in streams exposed to pollution of different types. Methods The bacterioplankton communities in three selected heavily polluted streams were investigated by using terminal‐restriction fragment length polymorphism (T‐RFLP) analysis in combination with 16S rRNA gene clone library analysis. Results Both T‐RFLP and 16S rRNA gene clone library revealed a great difference in bacterioplankton community composition in the different streams. Conclusion This work ...     

牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达

目的 :克隆牛蛙核糖核酸酶 (RC RNase)基因 ,构建重组原核表达载体 ,利用大肠杆菌系统表达RC RNase蛋白。　方法 :采用RT PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆RC RNase基因 ,并进行序列测定 ;将RC RNase基因插入到 6×His表达载体 pRSET A中 ,构建成表达质粒pRSET RC RNase ,用异丙基巯基半乳糖 (IPTG)在大肠杆菌BL2 1(DE3)中诱导表达 ,并以免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定。　结果 :扩增出一条约 380bp的基因片段 ,双酶切鉴定和序列测定的数据与预期结果一致。经IPTG诱导 ,融合蛋白 (His) 6 RC RNase在大肠杆菌中得到成功表达 ,SDS PAGE上出现相对分子质量约为 16 0 0 0的一条新生蛋白带 ,经蛋白印迹验证为表达蛋白。薄层扫描显示 ,表达产物占菌体总蛋白的 12 .5 % ,主要以包涵体形式存在。　结论 :正确克隆出RC RNase基因 ,并在大肠杆菌中得到成功诱导表达 ,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了基础。     

牙龈卟啉单胞菌菌毛相关外膜蛋白pgmA基因的克隆和表达

目的:克隆牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)pgmA基因,构建pgmA基因表达载体,鉴定其表达产物的免疫性.方法:采用高保真PCR分别从牙龈卟啉菌ATCC 33277和47A-1菌株中扩增pgmA基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET32a的pgmA表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达,采用兔抗融合蛋白血清的Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性,采用ELISA 检测65株临床分离牙龈卟啉单胞菌与PgmA融合蛋白抗血清的反应情况.结果:所克隆的牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277与47A-1菌株pgmA基因的核苷酸序列同源性为100%,与报道的相应核苷酸序列同源性为98.98%,氨基酸序列同源性高达99.18%.pET32a-pgmA-BL21DE3系统的PgmA融合蛋白表达量为细菌总蛋白的50%左右.PgmA融合蛋白免疫家兔能获得相应抗体并与PgmA蛋白发生结合反应.ELISA结果证实92.3%的牙龈卟啉菌临床菌株(60/65)能与PgmA融合蛋白抗血清发生结合反应.结论:本研究成功地构建了Pg pgmA高效表达系统,所表达的PgmA融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为Pg检测试剂盒和Pg疫苗的候选抗原.     

人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及体外转染的生物学活性测定

目的：构建人淋巴细胞趋化因子(HLptn)真核表达质粒，在膀胱肿瘤细胞株BIU-87中表达重组质粒，并检测趋化活性。方法：用RT-PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增HLptn含编码区序列的cDNA，克隆至pGM-T Easy T载体，测序正确后，将目的片段插入pcDNA3．1( )载体，获得阳性克隆pcDNA3．1( )．HLptn；用脂质体介导其转染BIU-87细胞，用Western-blot检测转染后细胞中HLptn的表达；取转染后的上清液，采用Boyden小室法检测表达的HLptn趋化CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞的生物学活性。结果：克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第225位碱基不同，系同义突变，构建了真核重组表达载体pcDNA3．1( )-HLptn；转染的BIU-87细胞表达HLptn，其培养上清对CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞具有趋化活性。结论：成功构建的HLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU-87中表达。     

含脂氧素A4受体同源基因真核表达载体的构建与转染系膜细胞

目的构建小鼠脂氧素A4受体同源基因(LRHG)的真核表达载体,克隆后转染小鼠肾小球系膜细胞,观察LRHG编码的脂氧素A4受体样蛋白(LRLP)在系膜细胞中的表达.方法应用PCR方法,以小鼠睾丸cDNA为模板,扩增出LRHG基因片段,插入质粒pGEM-T中,转化入大肠杆菌JM109.扩增阳性重组质粒,经酶切后纯化并测序鉴定目的片段.构建含6×组氨酸(His)基因的真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,转化入大肠杆菌JM109扩增,酶切后再测序鉴定目的片段,抽提质粒后转染系膜细胞,进行Western blot鉴定LRLP的表达.结果测序鉴定表明,克隆的LRHG序列与GenBank中LRHG原序列100%符合,应用抗6×His抗体进行Western blot鉴定系膜细胞中有LR-LP的表达.结论成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/LRHG-his,并转染了肾小球系膜细胞,获得了稳定的表达.     

红景天对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天(Rhodiola)对体外培养肝癌QGY-7703的直接抑制作用及可能机制。方法:通过液体培养法、克隆形成法、3H-TdR掺入法与MTT比色法分别检测给药后肿瘤细胞的增殖情况、克隆形成率、DNA合成抑制率及生存率来探讨红景天的抑瘤效应。结果:与红景天共育24h的细胞伸展不良,胞体回缩,贴附型细胞不贴壁,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显。给药组肿瘤细胞增殖缓慢甚至停滞,出现细胞脱落、胞浆内颗粒状物堆积等形态学改变,克隆形成数明显少于对照组,cpm和A值明显降低即3H-TdR掺入率减少,生存率下降。结论:红景天对体外培养肝癌细胞均具有直接杀伤作用。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白在HepG2细胞中的表达

目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1( )中 ,用脂质体包裹后转染肝癌细胞系HepG2 ,通过G4 18筛选获得稳定转染细胞系 ,并通过间接免疫荧光法检测HepG2中丙型肝炎病毒核心区蛋白的表达。结果 :克隆的基因全长 5 94bp ,并经测序和重组质粒双酶切证实为所需目的基因 ;经间接免疫荧光验证实转染了目的基因的HepG2细胞中有丙型肝炎核心区蛋白的表达。结论 :丙型肝炎病毒核心区蛋白能在HepG2细胞中稳定表达。     

Population structure of Neisseria meningitidis ST-9493 identified in Colombian isolates

IntroductionNeisseria meningitidis is associated with invasive infections causing high mortality rates. The objective of this study was to describe the population structure of Colombian invasive isolates with ST-9493, a potentially emerging clonal group in the country.MethodsThe complete genomes of 34 invasive isolates of serogroup B with ST-9493 and its variants at one or two loci were sequenced by Illumina to describe the phenotypic and genotypic characteristics of these isolates.ResultsThe relationship of a clonal group associated with ST-136 CC41/44 was phylogenetically established, identifying two main clades composed of isolates from an outbreak or endemic. The most frequent alleles and peptides included porA 17, porB 44, fHbp 2.24, NHBA 10, and the FetA F5-17 variant. Most of the isolates were susceptible to the antibiotics evaluated.ConclusionThis study shows that meningococcal isolates with ST-9493 are an autochthonous clonal group with population dynamics and the capacity to cause endemic and epidemic meningococcal disease in Colombia.     

人肝再生增强因子cDNA的克隆及其酵母双杂交载体的构建

目的：获取人肝再生增强因子（hALR)阅读框的cDNA及构建其酵母双杂交系统的“诱饵”质粒。方法：利用RT－PCR方法，从人胎肝组织中扩增出一约380bp的DNA片段，重组入pGBKT7载体中，构建成pGBKT7-hALR，然后研究此重组质粒在酵母AH109中的表达情况并用于筛选人肝cDNA文库，结果：获得的378bp的DNA序列与文献报道的人ALR序列一致；转化的酵母细菌在选择性培养基SD／-Trp上培养65小时，长出约Φ1mm大小的白色菌落，而在SD／－Trp/-His上不生长；酵母提取液的Western blot分析，证实ALR基因在AH109以融合蛋白的形式表达，并具有免疫活性；初步得到hALR相互作用的阳性克隆。结论：pGBKT7-hALR对宿主菌AH109没有毒性作用，也没有自身激活报告基因，可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。     

人CD28基因的分子克隆及其痘苗病毒载体介导的真核表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人Ｊｕｒｋａｔ细胞克隆了ＣＤ２８ｃＤＮＡ，将ＣＤ２８全编码区基因片段重组入ＰＵＣ质粒，测序证实所获得的为人ＣＤ２８基因。以痘苗病毒天坛株为载体，构建表达人ＣＤ２８的重组痘苗病毒株，并在重组病毒感染的细胞膜上表达人ＣＤ２８膜抗原，拟用该抗原免疫小鼠以制备抗ＣＤ２８的抗体。