正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法

胃黏膜上皮细胞是进行胃生理功能、病变机制、药物治疗等研究的重要工具，已被广泛应用于科学实验。原代培养细胞能反映原始组织的特点，与体内姊妹细胞的生理状态相似，是进行相关研究的理想材料。但胃黏膜上皮细胞对内环境要求较高，分离纯化后并不象肝细胞等易于存活和生长，不少实验因这一环节而不能进行下去，不得不采用从肿瘤组织衍生的各种细胞株，此类细胞株与正常胃黏膜上皮细胞在生长特性、形态结构等方面存在较大差异，不能代表正常胃黏膜上皮。在我国，几乎所有的相关研究都是采用各种细胞株，因此本文较详细全面地介绍了文献报道中较成功的正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法，以期对相关研究有所帮助。     

弓形虫感染对雄性小鼠睾丸细胞周期影响的实验研究

目的　研究弓形虫感染对雄性小鼠睾丸组织细胞周期的影响。方法　应用流式细胞术检测弓形虫感染10 3/ ml、10 4 / ml、10 6 / ml3个剂量组小鼠睾丸组织细胞周期,并设立生理盐水和环磷酰胺对照组。结果　不同剂量的弓形虫感染均可使小鼠睾丸组织细胞各时相的细胞百分数发生变化,并随着剂量的增加,G0 / G1 、S时相的细胞百分数明显减少,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0 .0 5 )。G2 / M时相的细胞百分数逐渐增多,各剂量组与阴性对照组比较差异有显著性(P<0 .0 5 )。结论　弓形虫感染可能抑制小鼠睾丸细胞的DNA合成,可引起G2 期细胞阻滞,从而使细胞的有丝分裂延伸。     

幽门螺杆菌相关性胃炎内镜随访研究

为了解Ｈｐ长期感染是否促进胃粘膜萎缩、肠上皮化生和异型增生的形成与发展，对首次胃镜检查诊断为慢性胃炎而不伴有肠化生和异型增生的１２０例Ｈｐ阳性患者和８７例Ｈｐ阴性患者进行内镜随访。随访时间３～８年，平均４．８年，随访次数２～１０次，活检组织进行Ｈｐ检查、病理学检查和ＡｇＮＯＲｓ，银染及ＰＣＮＡ免疫组化染色。结果Ｈｐ阳性患者其慢性萎缩性胃炎、肠化生、Ⅲ型肠化生和异型增生的发生率显著高于Ｈｐ阴性患者，Ｈｐ阳性胃粘膜ＰＣＮＡ标记指数和ＡｇＮＯＲｓ数也显著高于Ｈｐ阴性胃粘膜。表明Ｈｐ感染可能通过刺激胃粘膜细胞的过度增殖、更新加快，促进萎缩性胃炎和肠化生的形成与发展，从而增加患胃癌的危险性。     

2型糖尿病患者血清C反应蛋白与可溶性细胞粘附分子水平变化的临床意义

目的　探讨 2型糖尿病患者血清 C反应蛋白 (CRP)、可溶性细胞粘附分子水平变化及其与血管并发症的关系。方法　采用 EL ISA法检测 12 7例 2型糖尿病患者 (糖尿病组 )血清 CRP、可溶性血管细胞间粘附分子 - 1(s VCAM- 1)和可溶性细胞间粘附分子 - 1(s ICAM- 1)水平 ,并与 6 4例健康人 (对照组 )进行比较。结果　糖尿病组血清 CRP、s ICAM- 1、s VCAM- 1均明显高于对照组 ,有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;有血管并发症者CRP、s ICAM- 1、s VCAM- 1明显高于无血管并发症者 (P<0 .0 1) ,大血管并发症、微血管并发症和大血管与微血管并发症并存者各指标比较差异均有显著性 (P <0 .0 1)。糖尿病组血清 CRP水平与 s ICAM- 1、s VCAM- 1水平变化呈正相关 (r =0 .5 76～ 0 .6 2 4 ,P <0 .0 1)。结论　血清 CRP、 s ICAM- 1、 s VCAM- 1相互作用、可能参与了糖尿病的发生与发展 ,并与血管并发症的发生与发展有密切关系     

牛磺酸对大鼠培养心肌细胞钙转运功能的作用

以大鼠培养心肌细胞的脂质过氧化损伤模型，采用４５Ｃａ示踪技术，直接进行心肌肌浆网、线粒体钙转运功能的测定，同时观察牛磺酸对心肌过氧化损伤的保护作用。结果表明，牛磺酸能显著改善心肌肌浆网、线粒体钙转运功能，对心肌细胞具有保护作用     

大鼠库普弗细胞分离培养方法的改良

目的建立一种稳定、高效的大鼠库普弗细胞(KCs)分离培养方法。方法采用大鼠肝脏离体链酶蛋白酶E消化和胶原酶循环灌注消化。低速离心去除肝细胞,Histodenz不连续密度梯度离心和选择性贴壁的方法分离KCs。采用ED2 CD163、兔抗大鼠溶酶体膜相关蛋白2(LAMP2)免疫细胞化学．latex-beads吞噬实验和电镜观察来鉴定 KCs。结果KCs得率为5×107个,活率为98％,经鉴定ED2阳性细胞大于98％,LAMP2阳性细胞大于99％,吞噬试验及电镜观察证明分离所得为KCs。结论改良的分离培养方法稳定、高效,为进一步的研究打下了基础。     

苦瓜蛋白对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠半胱天冬酶3活性及凋亡的抑制作用

为研究苦瓜蛋白对凋亡的关键酶半胱天冬酶 3及凋亡的调节作用 ,用已经建立起来的方法从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白。将BALB/C小鼠分为 4组 :病毒对照组、正常对照组、药物对照组和药物治疗组 ,分别在第 0天、第 3天、第 7天和第 14天各处死 5只小鼠 ,第 2 1天全部处死动物 ,心肌组织半胱天冬酶 3活性测定按照CAL BIOCHEM公司的试剂说明书进行 ,并稍加改正 ,凋亡鉴定按照Oncogene公司的TdT DNA裂解片断末端原位标记试剂说明书进行。结果发现 ,①病毒对照组第 7天开始出现半胱天冬酶 3活性 (0 .6 3± 0 .2 1pmol/min ,n =5 ) ,第 14天的活性 (10 .9± 1.5pmol/min ,n =5 )显著高于第 7天 ,第 2 1天的活性 (12 .6± 1.3pmol/min ,n =5 )又高于第 14天。②药物治疗组 ,只有一个第 2 1天的标本有半胱天冬酶 3活性 (0 .4 1pmol/min) ,其它两组均未检测到此酶的活性。③DNA裂解片断末端原位标记法发现 ,病毒对照组在第 7天心肌中有少数细胞凋亡 ,第 14天、第 2 1天凋亡细胞明显增多 ,在非病变区域可发现单个凋亡的心肌细胞。治疗组未发现凋亡细胞 ,其它两组也未发现凋亡细胞。结果提示 ,CVB3病毒性心肌炎中发现有明显的凋亡现象 ,凋亡和半胱天冬酶 3发现于第 7天 ,且随着时间增加而逐渐加重(增强 ) ;苦瓜蛋白可显     

Ad-p27mt转染重组腺病毒治疗裸鼠内人胃癌的分子机制

目的:研究Ad-p27mt转染重组腺病毒对人胃癌细胞凋亡的作用及机制.方法:Ad-p27mt转染重组腺病毒导入胃癌细胞株SGC-7901内;流式细胞仪检测凋亡染色体亚二倍体峰值,了解Ad-p27mt对人胃癌组织凋亡的作用;TUNEL法检测DNA片断,在Ad-p27mt组和Ad-LacZ组中分析细胞的凋亡.结果:Ad-p27mt成功转入人胃癌细胞SGC-7901内,转化率达100%.流式细胞仪检测发现在感染后18h出现G1-S相前出现凋亡染色体亚二倍体峰值,并且DNA电泳出现凋亡特征性的条带;TUNEL法检测Ad-p27治疗组与对照组的凋亡率分别是92.3%±3.76%和2.01%±0.15%,两组的差异有显著性(P<0.01).结论:重组腺病毒转染的人p27突变基因能诱导裸鼠体内人胃癌细胞SGC-7901的凋亡.     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞原癌基因c-fos表达的影响

目的　探讨血管紧张素 - (1- 7) [Ang- (1- 7) ]对血管紧张素 (Ang )诱导心肌细胞原癌基因 c- fos表达的影响。方法　在 Ang 诱导培养的新生 SD大鼠心肌细胞中应用 Ang- (1- 7) ,用 TRIzol试剂法提取心肌细胞总 RNA,用特异性 c- fos引物 (GAPDH作内参 )和 Super Script一步法 RT- PCR试剂盒进行逆转录 -聚合酶链式反应 ,RT-PCR产物在琼脂糖凝胶上电泳 ,用 GSD凝胶成像系统拍摄打印 ,条带用计算机图像分析系统扫描定量。结果　 Ang 作用心肌细胞 3 0 min后 ,心肌细胞原癌基因 c- fos表达较对照组 c- fos表达明显增加 (P<0 .0 1) ,而当用 Ang- (1- 7)与 Ang 联合作用时 ,Ang 诱导心肌细胞 c- fos基因表达作用明显受到抑制 (P<0 .0 1)。予 A- 779预处理后 ,Ang- (1- 7)抑制 Ang 诱导的心肌细胞原癌基因 c- fos的表达作用消失 ,而 A- 779其本身对心肌细胞原癌基因 c- fos表达无明显影响。结论　 Ang- (1- 7)可抑制 Ang 诱导的心肌细胞原癌基因 c- fos的表达 ,其作用能被A- 779阻断