蛇床子素通过抑制SIRT1的表达增强阿霉素对p53野生型前列腺癌细胞的凋亡诱导活性

目的:探讨中药活性成分蛇床子素对阿霉素抗前列腺癌作用的影响及机制。方法:MTT法检测前列腺癌细胞系LNCaP在阿霉素和蛇床子素处理下的细胞活力。Western blot实验检测阿霉素和蛇床子素对LNCaP细胞中沉默信息调节因子1(SIRT1)、p53、乙酰化p53和Puma的表达水平、细胞色素C的释放水平及caspase-9和caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测阿霉素和蛇床子素对LNCaP细胞凋亡的影响。结果:蛇床子素联合治疗能明显提高阿霉素对p53野生型前列腺癌细胞系LNCaP的杀伤力。蛇床子素处理能显著抑制LNCaP细胞中SIRT1的表达,转染SIRT1过表达质粒后,蛇床子素、阿霉素联合治疗对LNCaP细胞的杀伤力受到显著抑制(P0.05)。蛇床子素联合阿霉素显著升高LNCaP细胞p53蛋白的表达水平和乙酰化水平,转染p53 si RNA后,蛇床子素对阿霉素的协同作用明显减弱。蛇床子素联合阿霉素显著诱导LNCaP细胞细胞色素C从线粒体释放到细胞质中,增强细胞中的caspase-9及下游caspase-3的活性并诱导细胞发生凋亡。结论:蛇床子素通过下调前列腺癌LNCaP细胞中SIRT1的表达促进阿霉素诱导的p53依赖的细胞凋亡。     

miRNA-101-3p靶向调控EZH2蛋白抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的:研究微小RNA-101-3p(miRNA-101-3p)对人胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的调控机制。方法:Real-time PCR检测2种人胃癌细胞和1种胃黏膜细胞中miRNA-101-3p和zeste增强子同源物2(EZH2)的表达水平;采用脂质体瞬时转染技术过表达miRNA-101-3p;流式细胞术检测miRNA-101-3p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;Transwell实验、CCK-8法和台盼蓝染色法检测miRNA-101-3p对胃癌细胞迁移和增殖能力的影响;Western blot法检测EZH2的表达。结果:miRNA-101-3p在胃癌细胞的表达水平显著低于胃黏膜细胞(P0.05);过表达miRNA-101-3p后,流式细胞术结果显示胃癌细胞的S期比例减少,G0/G1期比例增加,早期凋亡率增加(P0.05);CCK-8法、台盼蓝染色法及Transwell实验结果显示胃癌细胞的增殖和迁移能力显著降低(P0.05);Western blot结果显示胃癌细胞中EZH2蛋白的表达明显下降(P0.05)。结论:miRNA-101-3p可能通过靶向负调控EZH2蛋白的表达抑制胃癌细胞的增殖和迁移,进而促进胃癌细胞凋亡。     

人血清白蛋白融合干扰素α2b体外抑制乙肝病毒的实验研究

目的:研究长效干扰素人血清白蛋白融合干扰素(HSA-IFNα2b)对HepG2.2.15细胞增殖、凋亡及其HBsAg与HBeAg表达的影响,探讨其体外抑制乙肝病毒的机制。方法:采用SRB法分析HSA-IFNα2b作用HepG2.2.15细胞3,6 d后对其增殖的影响,酶联免疫分析不同剂量HSA-IFNα2b作用不同时间后HepG2.2.15细胞HBsAg与HBeAg的表达水平,Hochest33342、PI双染法观察细胞的凋亡和死亡,Western Blot印迹检测Bcl-2、Bax的表达。结果:HepG2.2.15细胞的增殖在加HSA-IFNα2b作用3,6 d后都有所抑制,细胞培养上清中HBsAg表达明显下降,并与浓度相关,HSA-IFNα2b浓度为10 000 U.mL-1时,培养6 d后HBsAg的抑制率达87%以上。Hochest33342、PI双染结果显示当HSA-IFNα2b浓度在1 250U.mL-1时可见少量的凋亡细胞,凋亡细胞数随着药物浓度的增大而增多,并有少量死亡细胞出现。Western Blot印迹检测随药物浓度的增加Bcl-2的表达降低而Bax的表达增加。结论:HSA-IFNα2b体外可明显抑制HepG2.2.15细胞的增殖及HB-sAg的表达,并可引起HepG2.2.15细胞的凋亡和死亡。     

龟板提取物对PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨龟板提取物(Plastrum testudinis Extracts,PTE)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用无血清培养PC12细胞同时100μmol/mL 6-OHDA损伤24 h的方法建立PC12细胞凋亡模型。细胞分为正常对照组、6-OHDA组及PTE 3、30μg/mL组四组。在施加处理因素24 h后,MTT比色分析测定细胞光密度值,Ammexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测BCL-X/L的表达水平。用Bio-Rad Quantity One凝胶分析系统对条带进行半定量分析。结果:MTT与流式细胞术结果显示PTE能提高PC12细胞活力,降低PC12细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,PTE 3、30μg/mL组与模型组比较,差异具有统计学意义。Western blot结果显示龟板提取物使BCL-X/L表达增强,并呈剂量依赖性。结论:龟板提取物具有抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的作用,其作用机制可能与上调BCL-X/L的表达有关。     

垂体中叶素对肾脏缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨垂体中叶素（IMD）对肾脏缺血再灌注（I/R）大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及相关机制。 方法 健康雄性Wistar大鼠24只随机分为假手术组、I/R组、空质粒组、IMD质粒组。动物右肾切除后,采用超声微泡法,将空质粒或IMD质粒转染入左肾,1周后制作肾脏I/R模型。TUNEL法测定细胞凋亡;半定量RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达水平;比色法检测caspase-8、-9的活性;Western印迹法检测caspase-3蛋白的表达水平。 结果 与假手术组相比,I/R组细胞凋亡率增高,Bax、Fas mRNA表达增加,bcl-2 mRNA表达下降,caspase-8、-9活性增强,caspase-3蛋白表达增加（均P < 0.05）。与I/R组相比,IMD转染组细胞凋亡率明显降低,Bax、Fas的mRNA表达下降,bcl-2的mRNA表达增加,caspase-8、-9活性减弱,caspase-3蛋白表达减少（均P < 0.05）。转空质粒组与I/R组比较,各指标差异均无统计学意义。 结论 IMD能上调bcl-2表达,降低bax、Fas的表达,降低caspase-8、-9活性,从而抑制肾脏I/R损伤所诱导的凋亡。     

晚期糖基化终产物通过氧化应激引起人骨髓间充质干细胞凋亡

目的 观察不同剂量晚期糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)对体外分离培养的人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响,为临床上提高干细胞移植治疗糖尿病心肌病后供体干细胞的存活率提供新的依据.方法 采用全骨髓法从人的骨髓标本中分离培养骨髓间充质干细胞,以含10%FCS的L-DMEM 培养细胞,0.25%的胰酶消化后按1:2 比例传代接种培养,对第3代细胞应用流式细胞仪检测细胞表面标志CD44、CD105和CD34.在骨髓间充质干细胞中加入不同浓度的AGE-BSA,作用24 h后加入CCK-8溶液,37℃5%CO2培养箱培养1 h,用酶标仪在450 nm处测定吸光度值.采用Annexin V/PI 双染法进行染色,避光作用20 min后,将细胞置于流式细胞仪上检测细胞凋亡率.同时对细胞内活性氧水平进行测定,并且测定细胞内的丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性.结果 传代后的骨髓间充质干细胞呈鱼群样或漩涡状排列,细胞为长梭形,贴壁紧密,形态较为一致.细胞表面标志CD105(间充质干细胞相对特异性标志)及CD44(黏附分子,基质细胞表达)呈阳性表达,阳性率分别为98.9%、97.8%;CD34(造血干细胞/祖细胞及内皮细胞阳性)呈阴性表达,表达百分率为0.8%.与对照组相比,20、50、100和200 mg/L AGE-BSA均不同程度地抑制骨髓间充质干细胞的增殖,促进其凋亡,随着作用浓度的增加,细胞内活性氧含量、丙二醛含量明显增加,而细胞匀浆中超氧化物歧化酶的活性却受到了抑制,具有剂量依赖效应.结论 晚期糖基化终产物通过促进骨髓间充质干细胞内活性氧生成、减少抗氧化酶生成,增强氧化应激,破坏细胞内环境稳定性,从而抑制骨髓间充质干细胞增殖,促进细胞凋亡.     

早期激素性股骨头坏死的细胞凋亡研究

目的:观察细胞凋亡在SANFH骨标本上的存在情况。方法:采用TUNEL标记法,研究SANFH股骨头局部细胞凋亡情况。结果:激素性骨坏死标本上,存在大量凋亡的骨细胞及成骨细胞,模型组与对照组家兔股骨头骨细胞凋亡指数比较,有显著性差异(P<0.01),模型组与对照组家兔股骨头空骨陷窝率比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:家兔SANFH病程中,骨坏死是通过激素诱导骨细胞及成骨细胞的凋亡和坏死共同作用的结果方式进行的。