bcl-2基因在急性白血病细胞中的表达及其意义

目的 :探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中bcl- 2基因的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后因素的关系。方法 :采用免疫组化SP法检测 5 4例初治AL骨髓细胞的bcl- 2基因的表达情况 ,分析其与FAB分型、临床特征、疗效及预后因素的关系。结果 :(1)AL骨髓细胞中bcl- 2基因的表达显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,bcl- 2基因表达在急性髓系白血病 (AML)与急性淋巴细胞白血病 (ALL)无显著差异 ;(2 )按FAB分型AML各亚型比较 :bcl- 2在M 4及M5中的表达高于M1、M2和M3(P <0 .0 5 ) ;bcl- 2的表达与初诊时的白细胞数呈正相关 (R =0 .4 4 ,P <0 .0 5 ) ,与疗效呈负相关 (R =- 0 .4 0 ,P<0 .0 5 )。结论 :bcl- 2基因在AL骨髓细胞中呈高表达 ,可作为AL疗效观察及预后判断的指标之一。     

δ阿片受体激动剂在全脑缺血再灌注损伤中的神经保护机制

目的观察δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡细胞及磷酸化p38表达的影响,探讨DADLE在全脑缺血再灌注损伤细胞凋亡中的脑保护机制。方法采用二血管加低血压阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组(n=10),模型组(n=10),治疗组(再按DADLE静脉注射不同剂量分为3个亚组2 mg组、3 mg组、5 mg组,n=10),TUNEL法检测凋亡细胞,Western blot检测神经元磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)蛋白的表达。结果 DADLE可显著减少大鼠缺血神经元细胞凋亡,与假手术组比较,缺血后大鼠神经元磷酸化p38 MAPK表达水平增加(P0.05),与模型组比较,治疗组各组磷酸化p38 MAPK表达水平有所降低(LSD-t值依次为0.61、1.61、1.8,P0.05),且其作用呈剂量依赖性。结论δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,抑制磷酸化p38 MAPK的表达,减少细胞凋亡是其脑保护作用机制之一。     

生长分化因子-9和骨形成蛋白-15对多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡的影响

目的探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达对卵丘细胞凋亡的影响。方法收集本院行卵胞质内单精子注射(ICSI)治疗的PCOS组(n=30)和对照组(n=60)患者的卵丘细胞。TUNEL法及流式细胞术检测卵丘细胞凋亡;免疫组织化学方法检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15蛋白表达,运用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统对染色强度定量分析;Real-time PCR技术检测卵丘细胞GDF-9、BMP-15、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL)-2、BCL-2相关X蛋白(BAX)mRNA表达。结果 PCOS组穿刺卵泡数、获卵数高于对照组(P0.01);PCOS组卵丘细胞凋亡率高于对照组(P0.05);GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组卵丘细胞胞质中均呈阳性表达;PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15、BCL-2、BAX mRNA的表达低于对照组(P0.05),BAX/BCL-2比值高于对照组(P0.05)。Pearson相关分析结果显示PCOS患者GDF-9、BMP-15与BCL-2 mRNA表达呈正相关,与BAX mRNA的表达呈负相关。结论 PCOS患者卵丘细胞GDF-9、BMP-15异常表达可能是卵丘细胞凋亡增加的原因之一。     

靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响

目的：探讨靶向survivin的shRNA对人胆管癌细胞体外增殖及凋亡的影响。方法：合成具有互补序列的能够编码短发卡RNA（shRNA）的双链寡核苷酸并构建pSilencer2．1真核表达质粒,经稳定转染QBC939细胞后对转基因后胆管癌细胞的生物学行为进行观察。结果：neo基因稳定表达于转染阳性质粒及阴性对照质粒的QBC939细胞中。通过RT—PCR及westernblot检测证实shRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin表达率分别达68固％和613％。细胞计数及平板克隆形成实验显示转染细胞生长速度及细胞克隆明显减缓（P〈O．01）。流式细胞术测定细胞周期显示转染细胞G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少。DNAladder、透射电镜观察及流式细胞定量研究显示转染细胞凋亡明显增多。结论：靶向survivin的shRNA能有效抑制目的基因的表达,通过增加细胞凋亡在体外抑制人胆管癌细胞的生长,为胆管癌的基因治疗提供一定的实验基础。     

转小鼠TNFα基因大鼠脑缺血时细胞凋亡、c-JUN、p-JUN与p-JNK表达的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）过度表达时对细胞凋亡、c-JUN、p-JUN与p-JNK表达的影响。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,用TNFct、TUNEL、c-JUN、p-JUN与p-JNK免疫组化染色观察SD大鼠与转小鼠TNFQ基因大鼠缺血1h再灌注24h时的细胞凋亡、c-JUN、p-JUN与p-JNK的表达。结果：与SD大鼠相比,转小鼠TNFα基因大鼠缺血1h再灌注24h后．脑组织凋亡细胞显著增多,c—JUN、p-JUN与p-JNK过度表达显著,以上指标变化均显著高于SD大鼠。结论：TNFα的过度表达加剧缺血性脑损伤,其机制可能为c-JUN、p-JUN与p-JNK的过度表达。     

杨梅素对HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨杨梅素对人肝癌细胞系 HepG2凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度的杨梅素孵育HepG2细胞,在不同时间分别采用倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;采用乳酸脱氢酶（LDH）活力定量测定试剂盒测定细胞上清液LDH活性;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡途径关键蛋白的表达。结果杨梅素对HepG2细胞的凋亡诱导作用呈现剂量和时间依赖性。杨梅素作用于HepG2细胞,随杨梅素浓度增加,细胞凋亡率增加。与正常对照组相比,100μmol/L杨梅素作用于HepG2细胞24 h后,细胞存活率明显降低[（100.02±5.97）%vs.（71.60±3.75）%,P=0.006];早、晚期细胞凋亡率明显升高[（10.19±2.61）%vs.（2.52±2.05）%,P=0.003;（11.71±3.34）%vs.（3.69±1.13）%,P=0.004],差异均有统计学意义。随杨梅素浓度增加,线粒体途径的促凋亡因子BAX蛋白表达量增加,而抗凋亡因子BCL-2蛋白表达量降低。结论杨梅素能够诱导HepG2细胞凋亡,可能具有潜在的抗肝癌活性;线粒体途径在此过程中起重要作用。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在视网膜毛细血管周细胞凋亡中的活性及意义

目的探讨糖基化终产物（AGE）在糖尿病视网膜病变（DR）发生中的作用。方法培养的牛视网膜毛细血管周细胞分别与不同浓度（0．47、1．88、7．50μmol／L）的AGE共同培养4d后,分别检测细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性及caspase-3抑制剂Z—DEVD-fmk对周细胞凋亡及凋亡调节基因Bcl-2／Bax比率的影响。结果AGE能以剂量依赖的方式诱导培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡（r=0．867,P〈0．01）、增加细胞内caspase-3的活性,而选择性caspase-3抑制剂Z—DEVD—fmk能明显抑制AGE作用下的周细胞凋亡及提高凋亡调节基因Bcl-2／Bax的比率。结论凋亡是DR中视网膜毛细血管周细胞选择性丧失的机制之一,caspase-3活性的增加是AGE诱导周细胞发生凋亡的关键因素。     

茶多酚通过调节Akt通路诱导胰腺癌细胞凋亡

目的 观察茶多酚主要成分没石子儿茶素没石子酸酯( EGCG)诱导人胰腺癌Panc-1细胞凋亡过程中对Akt信号途径的调节作用.方法 以不同浓度EGCG (6.3、12.5、25.0、50.0 μmol/L)处理Panc-1细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法检测其生长抑制作用,用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡,用Western blot技术检测细胞中Akt分子(60 x103)的变化及Bad分子(23×103)的变化.结果 EGCG以时间及剂量依赖的方式抑制Panc-1细胞增殖并诱导Panc-1细胞凋亡(P<0.05).同时ECCG剂量依赖性降低了p-Akt( ser473)和p-Bad(ser136)蛋白的含量,而Akt总蛋白和Bad总蛋白无明显改变(P<0.05).结论 EGCG可通过抑制Akt信号通路并减轻该通路对Bad蛋白的阻断作用而诱导胰腺癌细胞凋亡.     

低硒致乳鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的　为进一步探讨低硒与心肌损伤的关系,以及细胞凋亡是否参与心肌损伤及其机制。方法　用低硒合成饲料喂养昆明鼠,五周后交配,取其子代 ３ 周龄乳鼠心肌组织,采用ＴＵＮＥＬ法、透射电镜及免疫组化法等技术检测凋亡细胞及其相关基因。结果　低硒乳鼠心肌细胞有凋亡现象存在,而补硒组却未见类似现象。结论　低硒可以引起子代乳鼠心肌细胞发生凋亡