改良三维试验与PCR法检测川东北地区产“超-超广谱”β-内酰胺酶革兰阴性杆菌

目的:调查川东北地区临床分离革兰阴性杆菌的耐药情况,建立筛选产超-超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)细菌的实验室方法。方法:收集自2008年1月-2009年6月从川北医学院附属医院临床分离的革兰阴性杆菌237株,采用琼脂二倍稀释法测定14种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)值,筛选出对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,运用聚合酶链式反应(PCR)扩增技术检测SSBLs中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型与AmpC基因型。结果:237株革兰阴性菌对多种抗生素存在较高的耐药率。对头孢西丁与头孢他啶同时耐药的革兰阴性杆菌共105株,对这105株革兰阴性杆菌进行改良三维试验与质粒结合实验,筛选出产SSBLs菌株共2株,包括1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌,其质粒编码的ESBLs基因型为SHV、TEM、CTX-M,AmpC基因型为ACT。结论:川东北地区首次发现产SSBLs革兰阴性杆菌;改良三维试验与PCR法可以用于确证耐药菌是否产SSBLs。     

多重聚合酶链反应检测革兰阴性杆菌中质粒介导ampC基因

目的运用多重聚合酶链反应（PCR）检测革兰阴性杆菌的质粒ampC基因,了解该基因在我院的流行情况。方法采用头孢西丁初筛试验筛选出符合头孢菌素酶（AmpC）表型筛选条件的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌共50株,通过热裂解法进行DNA抽提,采用6组ampC特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳区分PCR产物,进一步DNA测序确定其基因型。结果50株试验菌中有8株为阳性,分别为肺炎克雷伯菌5株,大肠埃希菌3株,基因型为CIT型1株,DHA型4株,EBC型3株。结论我院质粒介导ampC基因型主要为DHA型、EBC型和CIT型。多重PCR是特异性高、简便检测质粒ampC基因型的分子生物学方法。     

1 393例痰标本细菌培养及药敏分析

目的 探讨我院痰标本细菌感染的分布及耐药状况.方法 总结我院2007-2008年间1 393例痰标本细菌培养、68株耐药菌产ESBLs酶和AmpC酶检测及药敏结果.结果 从1 393例痰标本中共检出377株病原菌.377株细菌中对第三代头孢菌素2种或以上有中介或耐药的革兰阴性杆菌68株.68株中,ESBLs酶的阳性率为大肠埃希菌38.5%(5/13)、肺炎克雷伯菌48.3%(14/29)、阴沟肠杆菌62.5%(5/8)、铜绿假单胞菌44.4%(8/18);AmpC酶的阳性菌为大肠埃希菌15.4%(2/13)、肺炎克雷伯菌6.9%(2/29)、阴沟肠杆菌37.5%(3/8)、铜绿假单胞菌5.6%(1/18).其他革兰阴性杆菌未检出ESBLs、AmpC. 结论 肺部感染常见病原菌发生变化,ESBLs酶和AmpC酶阳性株发现率越来越高.临床应开展并重视ESBLs、AmpC的检测和耐药率监测,合理使用抗生素.     

广州地区革兰阴性杆菌CTX-M和OXA型广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况.方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增法和DNA测序法进行ESBLs基因序列分析.结果PCR扩增结果显示,CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9群和OXA的总阳性率在本地区临床分离的临床检测ESBLs阳性的革兰阴性杆菌中分别为9.96%、0、35.5%和1.6%,同时检出≥两种ESBLs基因的菌株数64株,阳性率为5.9%;序列分析进一步证实了CTX-M型ESBLs的具体型别,包括CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-M-9、CTX-M-14、CTX-M-17、CTX-M-18、CTX-M-21、CTX-M-24、TOHO-2和TOHO-3,其比例分别为3.23%、3.7%、4.99%、3.32%、2.21%、3.69%、2.95%、4.43%、1.85%和1.48%;其中以CTX-M-9和CTX-M-24阳性率较高;在本地区只检出1种OXA型Bla-OXA-2/PSE-2(1.38%,15/1084);另外,还检出了8株无法具体归类的CTX-M-9型ESBLs,占0.74%;CTX-M型基因主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,分别占42.8%和36.3%,而OXA基因则主要分布于铜绿假单胞菌中,占80%.结论本地区CTX-M类ESBLs也较为常见,其中尤以CTX-M-9和CTX-M-24为主,暂无CTX-M2群ESBLs,可能存在1种或多种新的CTX-M型ESBLs.     

产超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究

目的了解我院临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型.方法采用Microscan微生物鉴定仪、微量肉汤稀释法,测定临床分离的肺炎克雷伯菌对21种抗菌药物的敏感性;采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分析超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型.结果肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感,对环丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、阿莫西林/舒巴坦、阿米卡星、头孢噻肟和头孢哌酮的耐药率分别为36.6%、38.3%、56.7%、63.4%、81.7%、86.7%、96.6%、98.3%和98.3%,对其他药物的耐药率为100%;60株肺炎克雷伯菌全部扩增出TEM基因,有25株细菌检出CTX-M-Ⅰ群基因,有54株细菌扩增出DHA基因,而PER和MIR(ACT-1)全部为阴性;且有21株肺炎克雷伯菌同时携带CTX-M-Ⅰ群、DHA和TEM基因.结论我院临床分离的肺炎克雷伯菌为多重耐药菌,同时存在CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶和DHA-1型质粒介导的AmpC酶,尚未发现PER型超广谱β-内酰胺酶和MIR型质粒介导的AmpC酶.     

产超广谱β-内酰胺酶细菌的临床分布及耐药特征

目的 了解本地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌的临床分布及耐药特性。方法 采用双纸片扩散法对临床分离的革兰阴性杆菌(G^-B)进行ESBLs确证试验，并将ESBLs产生株的临床分布及其对常用抗菌药物的耐药性进行分析。结果 在613株G^-B中，共检出产ESBLs上细菌108株，检出率为17．6％。ESBLs产生株主要见于大肠埃希菌(45／155，29．0％)和肺炎克雷伯菌(39／133，29．3％)；标本来源主要为痰液标本，其次为尿液标本和创面分泌物；科室分布以重症监护病房(ICU)和呼吸科最多，其次为肾内科和神经内科：ESBLs产生株对大多数常用抗菌药物呈现高度耐药，敏感性较高的只有亚胺培南、哌拉西林／三唑巴坦等抗菌药物。结论 产ESBLs细菌临床分布广泛，对大多数抗菌药物呈现多重耐药，需引起临床的高度重视。     

2010年临床腹腔感染患者病原菌的分布及耐药性分析

目的 了解我院2010年腹腔感染的病原菌分布情况及其耐药性.方法 应用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定,采用微量肉汤稀释法进行药物敏感试验.结果 共分离菌株242株,其中革兰阳性球菌80株(33.1%),革兰阴性杆菌146株(60.3%),真菌16株(6.6%);分离率最高的前5位病原菌为大肠埃希菌(71株,29.3%)、屎肠球菌(26株,10.7%)、肺炎克雷伯菌(21株,8.6%)、铜绿假单胞菌(16株,6.6%)和表皮葡萄球菌(13株,5.4%).大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性菌分别为34株、4株.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分别为5株、15株.结论 我院腹腔感染主要病原菌以大肠埃希菌为代表的革兰阴性菌为主,肠球菌和葡萄球菌为革兰阳性菌中的主要致病菌.细菌耐药形势仍很严峻,应采取更加积极有效的措施控制耐药菌的增多与传播.     

产AmpC酶的大肠埃希菌中PBP4的检测及分析

目的检测产AmpCβ-内酰胺酶(简称AmpC酶)的大肠埃希菌中编码非必需青霉素结合蛋白4(PBP4)的基因dacB mRNA表达水平,探讨PBP4在产AmpC酶的革兰阴性菌耐药机制中的作用。方法收集上海市第六人民医院2003至2010年间部分产AmpC酶的大肠埃希菌34株,聚合酶链反应(PCR)扩增dacB基因和ampC基因,实时定量PCR检测dacB mRNA表达水平,并分为dacB mRNA表达上调组与dacB mRNA表达下调组,实时定量PCR方法检测ampC mRNA表达水平。微量肉汤稀释法药敏试验检测抗菌药物的敏感性。结果 34株大肠埃希菌中,26株(76.47%)dacB mRNA表达水平上调,dacB mRNA表达水平上调组ampC mRNA表达水平高于下调组,P<0.05。结论推测大肠埃希菌临床菌株中PBP4高表达有助于产生AmpC酶的高表达,从而引起细菌耐药性的增加。     

变形杆菌临床分离株的耐药性分析及其AmpC酶的检测

目的检测从临床标本中分离的146株变形杆菌对14种抗菌药物的体外活性以及产AmpC酶情况。方法药敏检测采用M-H肉汤微量稀释法,对头孢西丁耐药株以改良三维试验检测其产AmpC酶情况。PCR法检测AmpC基因型别,并进行了DNA测序分析。结果亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、氨曲南和三代、四代头孢菌素敏感率>80%。改良三维试验检测出单产AmpC酶奇异变形杆菌2株,检出率为1.4%(2/146)。DNA测序结果发现,2株变形杆菌所产AmpC酶均为CMY-2,基因序列已在基因库注册,授权号:EF534292。结论在变形杆菌中发现2株携带AmpC酶,其基因型为cmy-2。亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、氨曲南和三代、四代头孢菌素可作为治疗变形杆菌感染的首选药物。