高效液相色谱法同时测定妇炎消胶囊中5种蒽醌成分含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定妇炎消胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。方法采用Diamonsil(TM)C18分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇∶0.1%磷酸溶液(85∶15),流速为1.0 ml/min,柱温为25℃,检测波长为254 nm。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚线性范围分别为0.04～0.40μg、0.09～0.90μg、0.09～0.90μg、0.13～1.30μg、0.174～1.740μg;平均加样回收率(n=5)为97.41%(RSD=2.94%)、100.58%(RSD=0.44%)、98.47%(RSD=1.28%)、97.60%(RSD=1.53%)、96.76%(RSD=3.20%)。结论该方法简便快速,结果准确可靠,能较好地控制产品质量。     

Aloe-emodin induced DNA damage through generation of reactive oxygen species in human lung carcinoma cells

The DNA aggregation was found in aloe-emodin-induced H460 cell apoptosis in this study. Aloe-emodin (40microM)-induced DNA single strand breaks were observed by comet assay. Aloe-emodin induced decreases in the mRNA of DNA repair enzymes such as hMTH1, hOGG1 and APE. Although the activity of the radical-scavenging enzyme SOD was enhanced by aloe-emodin, the effects of aloe-emodin on H460 cell apoptosis were suspected to result from the prooxidant. These results suggest that aloe-emodin induced DNA damage through generation of reactive oxygen species in human lung carcinoma cells.     

HPLC测定结核丸中大黄的5种有效成分含量

目的：建立结核丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量测定方法。方法：采用HPLC法,色谱柱：Agilent-C18（4.6mm×250mm,5μm）;甲醇-0.1%磷酸（80：20）为流动相;检测波长为254nm,流速：1.0mL/min,柱温：室温。结果：含量测定方法学考察表明,五组分均达到基线分离,芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的平均回收率分别为98.6%、106.3%、107.58%、100.7%、97.2%（n=6）。结论：本方法专属性强、重现性好,可用于结核丸的质量控制。     

基于Wnt/β联蛋白信号通路探讨EphB2抑制剂对皮肤鳞状细胞癌的影响及作用机制

【摘要】 目的 采用分子对接法筛选酪氨酸蛋白激酶受体B2（EphB2）小分子抑制剂,研究其对皮肤鳞状细胞癌（CSCC）的影响及可能机制。方法 利用 Schrodinger对接工具预测EphB2蛋白的三维结构及其配体结合位点,通过分子对接进行高通量虚拟筛选EphB2抑制剂,通过体内外实验验证筛出的EphB2抑制剂山奈苷与芦荟大黄素（AE）抗CSCC的作用及机制。体外实验中,将人CSCC细胞系A431、SCL-1及人永生化表皮细胞HaCaT分别分为空白对照组、二甲基亚砜组、AE组与山奈苷组,通过MTT实验（AE浓度：20、40、80、160 μmol/L;山奈苷浓度：12.5、25、50、100 μmol/L）、划痕实验及Transwell小室实验（AE浓度：80 μmol/L,山奈苷浓度：50 μmol/L）分析EphB2抑制剂对CSCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。体内实验中,SPF级BALB/c雌性裸鼠皮下注射0.2 ml A431细胞悬液,待成功长出瘤体以后,随机分为4组（n = 6）,空白对照组、二甲基亚砜组、AE组（腹腔注射AE 20 mg·kg-1·d-1 AE）与山奈苷组（腹腔注射山奈苷25 mg·kg-1·d-1）;每周测量裸鼠的肿瘤大小和体重;连续给药28 d后,剥取裸鼠移植瘤进行HE染色,qRT-PCR与Western blot分析AE和山奈苷对裸鼠移植瘤中上皮钙黏着蛋白、波形蛋白、磷酸化葡萄糖合成激酶3β（p-GSK-3β）、β联蛋白及GSK-3β表达的影响。组间比较采用单因素方差分析及t检验。结果 筛选出对EphB2具有较高抑制活性的两个小分子化合物AA-504/20999031（山奈苷）和AA-466/21162055（AE）。MTT实验结果表明,与HaCaT细胞相比,AE对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性,且随AE浓度升高毒性变强（F = 17.95,P＜0.001）,作用48 h时,IC50分别为124.59 μmol/L和80.85 μmol/L;山奈苷对SCL-1和A431细胞具有强烈的细胞毒性,且随山奈苷浓度升高毒性变强（F = 11.34,P＜0.001）,作用48 h时,IC50分别为119.64 μmol/L和64.96 μmol/L。划痕实验显示,与二甲基亚砜组细胞迁移距离（88.1±1.4） μm相比,AE组和山奈苷组A431细胞迁移距离［（36.7±1.0） μm和（44.7 ± 3.5） μm］显著缩短（F = 52.34,P < 0.001）,而HaCaT细胞迁移距离差异无统计学意义（F = 1.73,P = 0.238）。Transwell小室实验表明,与二甲基亚砜组A431细胞跨膜细胞数量（195.3 ± 5.7）相比,AE组和山奈苷组A431细胞显著抑制（145.0 ± 2.5和94.7 ± 4.1,F = 72.85,P < 0.001）,而对HaCaT细胞则无明显抑制作用（F = 3.91,P = 0.055）。动物实验表明,与二甲基亚砜组裸鼠移植瘤体积（841.88 ± 84.63） mm3相比,AE组和山奈苷组显著下降［（407.42 ± 70.37） mm3与（368.77 ± 62.7） mm3,F = 73.78,P < 0.001］。HE染色证实,AE和山奈苷干预可改善其病理变化。qRT-PCR与Western印迹结果显示,AE和山奈苷明显上调瘤体组织中上皮钙黏着蛋白与p-GSK-3β mRNA和蛋白表达水平（均P < 0.001）,下调波形蛋白、β联蛋白及GSK-3β mRNA和蛋白表达水平（均P < 0.001）。结论 分子对接筛选的小分子抑制剂与EphB2可形成稳定复合物,并通过影响 Wnt/β联蛋白通路诱导的上皮间质转化现象来抑制CSCC进程。     

芦荟大黄素对PC12细胞骨架保护作用的实验研究

目的 研究芦荟大黄素(AE)对H2O2及甲醛引起的PC12细胞损伤的保护作用.方法 将PC12细胞分成AE+H2O2干预组、H2O2损伤组、AE+甲醛干预组、甲醛损伤组、AE对照组和正常对照组6组.各组加入相应药物干预2 h后用不同浓度H2O2或甲醛损伤后进行细胞骨架及凋亡染色、LDH检测.结果 AE+H2O2干预组LDH(67.7±5.5)U/L显著低于H2O2损伤组的(92.0±9.9)U/L(P<0.01);AE+甲醛干预组LDH与甲醛损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05);AE+H2O2干预组细胞骨架损伤、凋亡较H2O2损伤组少.结论 AE可通过纠正H2O2诱导的细胞骨架的异常改变,阻滞或延缓PC12细胞的过度凋亡但对甲醛诱导的细胞骨架重排无明显保护作用.     

HPLC法测定增液承气口服液中5种蒽醌类衍生物的含量

目的:建立测定增液承气口服液中5种蒽醌类衍生物(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为EclipseXDBC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(88:12),检测波长为254nm,柱温为30℃,流速为1.0mL·min-1。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5种成分进样量分别在0.067～0.335μg(r=0.9996)、0.070～0.351μg(r=0.9998)、0.068～0.341μg(r=0.9999)、0.070～0.348μg(r=0.9999)、0.038～0.191μg(r=0.9997)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.88%(RSD=0.72%,n=9)、97.52%(RSD=0.96%,n=9)、98.79%(RSD=0.95%,n=9)、97.77%(RSD=1.18%,n=9)、96.34%(RSD=2.00%,n=9)。结论:本方法简便、准确、重复性好,可用于增液承气口服液的质量控制。     

Aloe-emodin relieves zidovudine-induced injury in neonatal rat ventricular myocytes by regulating the p90rsk/p-bad/bcl-2 signaling pathway

Background/AimsZidovudine (3′-azido-2′,3′-deoxythymidine; AZT) is a first-line drug for treatment of human immunodeficiency virus infection (HIV). However, its application is limited by cardiotoxicity due to cardiomyocyte injury. This study investigated whether Aloe-emodin (AE), an anthraquinone compound, protects against AZT-induced cardiomyocyte toxicity.MethodsMTT, JC-1 assays and TUNEL were examined to verify the protective effect of AE against AZT-induced cardiomyocyte injury. Western blotting was performed to explore the anti-apoptotic effect of AE using anti-apoptotic proteins p90rsk, p-bad, and bcl-2 and pro-apoptotic proteins apaf-1, cleaved-caspase-3, and cytochrome c.ResultsWe observed a protective effect of AE against cell viability decrease and TUNEL positive cells increase induced by AZT, which was counteracted by BI-D1870. Western blot analysis found that AE significantly inhibited cardiomyocyte apoptosis by activating p90rsk/p-bad/bcl-2 signaling pathway. Furthermore, BI-D1870 counteracted the anti-apoptotic effect of AE.ConclusionsTaken together, these results indicate that AE attenuated AZT-induced cardiomyocyte apoptosis by activating p90rsk.