反相高效液相色谱法测定芦荟中芦荟苷及芦荟大黄素

 目的：建立以高效液相色谱法测定芦荟鲜汁及复方芦荟胶囊中的芦荟苷及芦荟大黄素的方法。方法：A法以甲醇-水（45∶55）为流动相，于354 nm波长处以外标法直接测定样品中芦荟苷；B法先将样品加三氯化铁和盐酸水浴加热回流使芦荟苷水解为芦荟大黄素后在287 nm波长处，以甲醇-水（70∶30）为流动相，以外标法测定。结果：芦荟苷及芦荟大黄素线性范围均为0.04～0.4 μg。在此范围内浓度与峰面积线性关系良好（r=0.9999）。芦荟苷的平均回收率为102.1%（复方芦荟胶囊），RSD为1.37%；芦荟大黄素平均回收率为102.5%（复方芦荟胶囊），RSD为3.6%。结论：该两种方法均比较灵敏、准确，而A法直接测定芦荟苷更为简便、快捷。     

荧光猝灭法快速测定芦荟大黄素血浆蛋白结合率的研究

目的:建立荧光猝灭法快速测定芦荟大黄素血浆蛋白结合率的理论和实验方法学。方法:在模拟人体生理条件下,以牛血清白蛋白(BSA)为荧光剂,芦荟大黄素为荧光猝灭剂,研究激发波长280nm下的荧光光谱。结果:芦荟大黄素和BSA的荧光猝灭是静态猝灭过程,其结合常数K30℃=6.024×104 L.mol-1和K37℃=5.104×104 L.mol-1;结合分子数n30℃=0.9776和n37℃=1.0548;相互作用力主要是静电作用;同时建立了预测血浆蛋白结合率的理论模型,并根据实验数据分析了芦荟大黄素浓度与BSA浓度动态变化时药物血浆蛋白结合率的全程规律。结论:不同蛋白质浓度与药物浓度条件下血浆蛋白结合率处于动态变化中,血浆蛋白结合率随药物浓度的增大而减少。     

CYP1A2低表达增强何首乌水提物及其相关单体成分肝细胞毒性的研究

目的建立CYP1A2低表达人正常肝细胞株,探究何首乌水提物(PMR)及其相关单体成分的肝细胞毒性与CYP1A2低表达的关系。方法运用RNA干扰技术构建稳定转染shCYP1A2的2种人正常肝细胞系L02、HepaRG,RT-qPCR验证干扰效果;PMR及其相关单体成分:二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucopyranoside,EG)、没食子酸(gallic acid,GA)、大黄素(emodin,EM)、大黄素甲醚(physcion,PH)、芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)、大黄酸(rhein,RH)作用CYP1A2敲低的L02及HepaRG细胞48 h,MTT检测细胞活力。结果成功构建了稳定转染shCYP1A2的2种人正常肝细胞系,L02-shCYP1A2、HepaRG-shCYP1A2与相应空质粒对照组相比,CYP1A2 mRNA表达分别下降了59.81%(L02-shCYP1A2)和66.60%(HepaRG-shCYP1A2)。1.5~3 mg/mL PMR作用CYP1A2敲低的L02-shCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.01);2.5~3 mg/mL PMR作用CYP1A2敲低的HepaRG-shCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.05、P<0.01);40~120μmol/L GA作用CYP1A2敲低的L02-shCYP1A2及HepaRGshCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.01、P<0.01);AE作用CYP1A2敲低的HepaRG-shCYP1A2细胞48 h,细胞毒性显著增加(P<0.01)。结论CYP1A2低表达显著增加PMR的肝细胞毒性,推测GA和AE可能为相关的增毒成分。     

Suppression of C-myc expression associates with anti-proliferation of aloe-emodin on gastric cancer cells

Aloe-emodin is a hydroxyanthraquinone found in Aloe vera, as well as in leaves and roots of other plants. The mechanisms of its anticancer effect are largely unknown. The present study investigated its molecular mechanisms. Crystal violet assay showed that aloe-emodin had a long-term anti-proliferation effect on human gastric cancer MGC-803 and SGC-7901 cells. Scratch wound-healing motility assays indicated its anti-migration effect. Aloe-emodin arrested SGC-7901 cells at G2/M phase. More importantly, aloe-emodin inhibited the expressions of protein kinase C and c-myc. In conclusion, the anticancer effect of aloe-emodin on gastric cancer cells involves suppression of c-myc expression.     

HPLC法测定枳实导滞丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量

目的:建立枳实导滞丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:Waters Symmery C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）,流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液（85:15）,检测波长:254nm,流速:1.0ml·ml^-1。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的线性范围分别为0.011～0.226μg（r=0.9998）、0.005～0.092μg（r=0.9999）、0.010～0.194μg（r=0.999 9）、0.011～0.212μg（r=0.9999）、0.005～0.102μg（r=0.9998）;浓度范围内进样量与峰面积线性关系良好。平均回收率分别为97.47%（RSD=1.56%）、99.57%（RSD=0.91%）、100.66%（RSD=1.09%）、101.97%（RSD=1.60%）、101.54%（RSD=1.58%）（n=6）。结论:所建方法简单、快速、准确,可用于枳实导滞丸的质量控制。     

芦荟大黄素的提取分离与含量测定

目的:建立芦荟大黄素的提取方法及含量测定方法.方法:采川葡聚糖凝胶分子筛及重结品的方法对芦荟中芦荟大黄素进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构,并建立其薄层色谱(TLC)定性鉴别及高效液相色谱含量测定方法.结果:从芦荟中分离并鉴定出芦荟大黄素.TLC鉴别斑点清晰;芦荟大黄素进样浓度在17.2～258μg.mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9996),平均回收率为99.32%,RSD=1.48%(n=9).结论:本方法简便、准确,可用于芦荟大黄素的质量控制.     

高效液相色谱法同时测定止嗽化痰丸中5种蒽醌类成分含量

目的 应用高效液相色谱法同时测定止嗽化痰丸中5种蒽醌类活性成分的方法,以利于制剂的质量控制.方法 流动相为乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为254 nm,柱温30℃.结果 5种蒽醌类成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.7％(RSD=1.25％、n=5),99.2％(RSD=1.17％、n=5),99.6％(RSD=1.32％、n=5),98.9％(RSD=0.95％、n=5),99.2％(RSD=1.13％、n=5).结论 高效液相色谱法操作简便,结果准确、可靠,重复性好,可用于止嗽化痰丸的质量控制.     

大黄素等5种蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性(英)

目的：检测大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性。方法： 在96孔培养板中加入不同浓度的衍生物,在倒置显微镜下观察HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞形成合胞体的数量,并用ELISA的方法检测培养上清中HIV-1 p24的抗原水平,得到相应的50%抗HIV-1有效浓度（EC50）。结果： 大黄素等蒽醌衍生物有较好的体外抗HIV-1活性,表现为：(1) 抑制HIV-1ⅢB感染诱导的合胞体形成, EC50均值分别为(11.44±0.93)μmol/L (大黄素),(51.28±2.86)μmol/L (大黄酸),(90.58±2.30)μmol/L (大黄酚),(8.59±0.38)μmol/L (大黄素甲醚) 和(0.89±0.08)μmol/L (芦荟大黄素);（2）抑制HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞p24抗原产生, EC50均值分别为(11.61±0.56)μmol/L (大黄素),(12.35±4.73)μmol/L (大黄酸),(39.63±2.87)μmol/L (大黄酚), >250 μmol/L (大黄素甲醚) 和(2.75±0.20)μmol/L (芦荟大黄素)。 结论： 大黄素等5种蒽醌衍生物具有不同水平的体外抗HIV-1活性,其中以芦荟大黄素的抑制活性最强。     

HPLC同时测定胆宁片中5种蒽醌类成分的含量

目的:探讨HPLC同时测定胆宁片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5种活性成分的含量.方法:采用HPLC,色谱柱:Shimadzu VP-ODS柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为254nm,柱温30℃.结果:5种成分分别在0.042～0.840μg(r=0.9996)、0.168-3.352 μg(r=0.9998)、0.084～1.680 μg(r=0.9997)、0.093～1.852μg(r=0.9999)和0.174～3.488μg(r=0.9994)内成良好线性关系,平均回收率分别为99.8%(RSD=1.34%,n=5)、99.8%(RSD=1.72%,n=5)、100.0%(RSD=0.89%,n=5)、99.5%(RSD=0.97%,n=5)和100.2%(P,SD=1.04%,n=5).结论:本法操作简便,结果准确,可靠,重复性好,可用于同时测定胆宁片中5种蒽醌类成分的含量.     

Aloe-emodin-induced apoptosis in human gastric carcinoma cells.

The purpose of this study was to investigate the anticancer effect of aloe-emodin, an anthraquinone compound present in the leaves of Aloe vera, on two distinct human gastric carcinoma cell lines, AGS and NCI-N87. We demonstrate that aloe-emodin induced cell death in a dose- and time-dependent manner. Noteworthy is that the AGS cells were generally more sensitive than the NCI-N87 cells. Aloe-emodin caused the release of apoptosis-inducing factor and cytochrome c from mitochondria, followed by the activation of caspase-3, leading to nuclear shrinkage and apoptosis. In addition, exposure to aloe-emodin suppressed the casein kinase II activity in a time-dependent manner and was accompanied by a reduced phosphorylation of Bid, a downstream substrate of casein kinase II and a pro-apoptotic molecule. These preclinical studies suggest that aloe-emodin represents a suitable and novel chemotherapeutic drug candidate for the treatment of human gastric carcinoma.