存活素蛋白表达下调对卵巢癌细胞侵袭能力影响的实验研究

目的通过存活素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)转染下调人卵巢癌细胞株SKOV3中Survivin蛋白表达,观察细胞侵袭能力的改变,探讨Survivin蛋白表达可能在调节卵巢癌细胞侵袭能力中的作用。方法用脂质体(LipofectamineTM2000)介导ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,流式细胞学技术检测细胞转染率及其Survivin蛋白表达,Transwell小室检测细胞侵袭能力的改变。结果LipofectamineTM2000介导ASODN人卵巢癌细胞株SKOV3转染,FCM检测转染率>95%。用600 nm/L ASODN转染48 h后,细胞中Survivin蛋白表达明显下调(t=7.8146,P<0.01),侵袭细胞数也明显下降(t=27.416,P<0.01)。结论卵巢癌细胞中Survivin蛋白表达下调,可降低卵巢癌细胞侵袭能力,提示Survivin蛋白可能是影响卵巢癌侵袭能力的重要分子,在卵巢癌转移机制中起关键性作用。     

原癌基因c-erbB_2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨原癌基因c-erbB2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法:建立小鼠卵 母细胞体外培养模型,用不同浓度反义c-erbB2寡脱氧核苷酸(c-erbB2ASODN)和反义c-myb寡脱氧 核苷酸(c-myb ASODN)分别与未成熟卵母细胞共孵育,观察c-erbB2ASODN和c-myb ASODN对 卵母细胞体外成熟的影响。结果:c-erbB2ASODN和c-myb ASODN均能呈剂量依赖方式抑制24h 卵母细胞的GVBD率和PB1排出率,并显著延迟其成熟的时间,而无义tat寡脱氧核苷酸则无此 作用。结论:原癌基因c-erbB2和c-myb均在卵母细胞成熟过程中起着重要的作用。     

CTNNAL1反义寡核苷酸对人支气管上皮细胞增殖和损伤修复的影响

目的 该实验旨在观察CTNNAL1反义寡核苷酸对人支气管上皮细胞增殖和损伤修复的影响.方法 引进人永生化支气管上皮细胞株进行细胞培养,设计合成CTNNAL1反义寡核苷酸和CTNNAL1错义寡核苷酸,分4组转染入人BEC:空白对照组;脂质体-CTNNAL1-ASODN转染组(Lip-CTNNAL1-A-SODN);脂质体-错义CTNNAL1-MSODN转染组(Lip-CTNNAL1-MSODN);脂质体转染组(Lip).荧光定量RT-PCR检测CTNNAL1 mRNA的表达,MTT法检测人BEC的增殖,测定损伤修复指数衡量各组细胞损伤修复速度.结果 CTNNAL1 ASODN能明显抑制人BEC的CTNNAL1 mRNA的表达,CTNNAL1ASODN能抑制人BEC的增殖,延长损伤后修复的速度,且呈剂量依赖性,在1.0μmol/L的CTNNAL1 A-SODN时,抑制作用最明显(P＜0.01).结论 CTNNAL1 ASODN通过沉默人BEC的CTNNAL1 mRNA的表达,抑制人BEC的增殖和损伤修复的速度.     

生存素反义寡核苷酸对血管瘤血管内皮细胞增殖及Caspase-3活性影响研究

目的 观察生存素(Survivin)反义寡核苷酸(ASODN)对人血管瘤血管内皮细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法 实验于2007年12月至2010年2月完成.以靶向Survivin基因中与Caspase-3结合的部位为模板,设计合成ASODN并通过脂质体将其转染至人血管瘤血管内皮细胞中.MTT观察Surv...     

c-Myc反义寡核苷酸对人肝癌Bel-7402细胞增殖的双向调节作用

目的观察c-Myc反义寡核苷酸(c-Myc ASODN)对人肝癌Bel-7402细胞增殖的双重调节作用,探讨c-Myc基因的生物学功能.方法台盼兰拒染细胞计数,CCK-8细胞检测试剂盒检测各组细胞增殖抑制率,计算单纯黄连素组及合用c-Myc ASODN后IC50.结果单纯黄连素及c-Myc ASODN均能明显抑制细胞的增殖(P＜0.05),将黄连素合用c-Myc ASODN后,细胞增殖抑制率低于单用黄连素组,但仍高于c-Myc ASODN组.黄连素作用Bel-7402细胞的IC50值在合用c-Myc ASODN后增加1.42倍.结论c-Myc基因在Bel-7402细胞细胞生长环境良好时可促进细胞的生长,在细胞生长环境不利的情况下则诱导细胞的的凋亡,抑制细胞的生长.依据环境不同,对Bel-7402细胞增殖具有不同的调节作用,c-Myc ASODN通过下调c-Myc基因的表达,在不同的环境下亦表现出不同的生物学效应.c-Myc ASODN与黄连素合用能明显降低Bel-7402细胞对黄连素的敏感性.     

整合素受体介导bcl-2反义核酸对人结肠癌细胞的靶向作用

目的:用聚乙烯亚胺-整合素配体复合物(PEI-RGD)介导的bcl-2反义核酸作用于结肠癌细胞caco-2,观察其对细胞的靶向作用。方法:用流式细胞仪测定细胞对荧光标记的反义核酸的摄取率和平均荧光强度,并在相差/光显微镜下观察摄入情况。结果:使用PEI-RGD介导的反义核酸与单独使用反义核酸的caco-2细胞摄入率和荧平均荧光强度存在明显差异(P<0.05)。与正常肝细胞LO2相比较,用PEI-RGD介导法显著提高结肠癌细胞caco-2对bcl-2反义核酸的摄入,且有统计学意义(P<0.05)。结论:阳离子复合物PEI-RGD可以增加caco-2对bcl-2反义核酸的摄入,具有靶向作用。     

HLA-G反义寡核苷酸对绒癌细胞免疫逃逸的影响

采用非经典MHCI类免疫耐受分子HLA G反义基因 ,封闭和阻断肿瘤细胞上HLA G分子的释放 ,逆转肿瘤细胞的免疫抑制作用 ,为肿瘤生物治疗提供新的理论和实验依据。利用反义核酸技术 ,合成HLA G反义寡核苷酸 (ASODN ) ,硫代化修饰与脂质体形成复合物 ,转导入表达HLA G的绒毛膜癌细胞系JEG 3。采用RT PCR方法检测HLA GmRNA表达水平的变化。流式细胞术检测细胞表面HLA G蛋白表达水平的变化 ;ASODN处理后 ,对JEG 3诱导外周血单个核细胞凋亡的影响 ;MTT法检测ASODN作用后 ,JEG 3作为第 3种抑制细胞对同种异体混合淋巴细胞反应的影响。结果表明 ,HLA GASODN可显著抑制JEG 3细胞HLA GmRNA和蛋白水平的表达 ,逆转HLA G分子诱导的免疫效应细胞的凋亡作用 ,逆转HLA G分子对同种异体混合淋巴细胞反应的抑制作用     

以jetPEI-RGD为载体的125I-(αv)ASODN投递对人肝癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨以jetPEI-RGD为转染载体的.125I-(αv)ASODN投递在体外对HepG2细胞侵袭力的影响.方法:125I标记整合素αv亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物jetPEI-RGD为载体,通过受体介导的转染方式进入HepG2细胞,利用Boyden小室侵袭模型评估复合物对HepG2细胞侵袭力的影响,并许算实验组和各对照组的抑制率.结果:jetPEI-RGD/125I-(αv)ASODN组、jetPEI-RGD/(αv)ASODN组、jetPEI-RGD组、125I-(αv)ASODN组、(αv)ASODN组和Na125I组的抑制率分别为(52.60±4.11)%、(39.73±3.40)%、(30.05±5.19)%、(14.14±2.94)%、(12.79±2.68)%和(0.91±2.91)%,相对于其他各实验对照组,jetPEI-RGD/125I-(αv)ASODN组减低了HepG2细胞的侵袭能力(P<0.01).结论:以jetPEI-RGD为载体投递125I-(αv)ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力.     

PAI-1反义寡核苷酸对肾间质细胞抑制作用的实验研究

目的研究纤维蛋白溶解酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)对大鼠肾间质细胞(NEK293)的抑制作用。方法采用RT-PCR、Western blot检测脂质体介导的PAI-1ASODN目的基因及蛋白的表达;通过细胞生长试验、流式细胞仪检测PAI-1 ASODN转染前后NEK293细胞增殖和凋亡的变化。结果PAI-1ASODN转染后可见NEK293中PAI-1mRNA及蛋白表达明显下调,与对照组相比较,可明显抑制细胞的增殖。诱导其凋亡(P<0.05)。结论PAI-1反义寡核苷酸具有明显抑制肾间质细胞增殖和诱导其凋亡的作用,转染脂质体介导的PAI-1 ASODN有望成为治疗肾纤维化的有效方法。