一氧化氮合酶在高原地区支气管哮喘发病机制中的作用

目的:探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)在高原地区支气管哮喘发病机制中的作用.方法:采用ELISA法测定30例高原地区支气管哮喘患者和90例低、中高海拔健康人血浆中不同类型NOS(tNOS、iNOS和cNOS)的含量,并进行对比分析.结果:高原低氧环境下支气管哮喘患者的血浆总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和原生型一氧化氮合酶(cNOS)水平分别为(19.67±7.02)U/mL、(14.20 ±9.08)U/mL和(5.47±6.32)U/mL,与3个对照组比较,tNOS、iNOS水平有统计学意义(P均<0.05);而cNOS水平无统计学意义(P>0.05).不同海拔高度的对照组比较,tNOS、iNOS和cNOS水平与海拔高度无直接相关.结论:高原地区支气管哮喘组tNOS和iNOS的活性增高, tNOS含量高的原因与iNOS的水平高有关,提示由iNOS生成的NO参与了哮喘的气道炎症形成.     

偏侧帕金森病猴模型黑质和纹状体一氧化氮合酶表达的变化

目的探讨偏侧帕金森病（PD）猴模型黑质和纹状体一氧化氮合酶（NOS）表达的变化。方法对3只恒河猴经单侧颈内动脉注射1-甲基4-苯基1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）制备成偏侧PD猴模型后,应用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸-黄递酶（NADPH．d）组化染色方法观察偏侧PD猴黑质和纹状体NOS阳性神经元表达的变化,并与正常猴比较。结果偏侧PD猴MPTP毁损侧的黑质和纹状体的NOS阳性神经元数目较毁损对侧和正常猴明显增加（均P〈0．01）,毁损对侧的黑质和纹状体NOS阳性神经元数目与正常猴比较差异无统计学意义。结论偏侧PD猴黑质和纹状体NOS阳性神经元增多,由此引起一氧化氮（NO）合成和释放增多,可能对黑质和纹状体神经元的变性和死亡起重要作用。     

地黄毛蕊花糖苷合酶基因的克隆、亚细胞定位与表达特性分析

目的克隆地黄Rehmanniaglutinosa毛蕊花糖苷合酶基因(Rg Ac S1),分析其亚细胞定位和表达模式。方法在地黄的转录组数据库中通过注释和比对,获得地黄Rg Ac S1的c DNA序列,利用聚合酶链式反应(PCR)方法进行分子克隆。构建绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体,以农杆菌瞬时表达法观测Rg Ac S1的亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测Rg Ac S1基因在地黄块根不同部位的表达模式。结果获得地黄1个莽草酸-O-羟基肉桂酰基转移酶的全长编码序列,c DNA长度为1 659 bp,包含1个1 296 bp的开放阅读框,编码431个氨基酸残基,蛋白质相对分子质量为475 900,具有莽草酸-O-羟基肉桂酰基转移酶的典型结构域,命名为Rg Ac S1。亚细胞定位结果显示Rg Ac S1主要分布在细胞质中,在细胞核中也有分布。q RT-PCR分析表明,Rg Ac S1在地黄的周皮和根毛中表达量较高,在木质部和韧皮部表达量较低。Rg Ac S1基因在地黄品种北京1号、QH1和85-5中非菊花心中表达量均高于菊花心中的表达量,且差异达极显著水平。结论获得地黄Rg Ac S1的c DNA序列,明确了Rg Ac S1的亚细胞定位和时空表达模式,为进一步研究Rg Ac S1基因在毛蕊花糖苷合成过程中的作用奠定基础。     

中药调控一氧化氮合酶-一氧化氮系统的研究

一氧化氮(NO)是生物体细胞内及细胞间的重要信号分子,由不同类型一氧化氮合酶(NOS)催化生成,即内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)。生理情况下,组织中eNOS和nNOS持续低水平表达维持正常生理功能。病理情况下,eNOS活性下降,NO生成减少,中药可以通过蛋白质磷酸化调节eNOS活性增加NO浓度以及通过抗氧化作用提高NO的生物利用度。而iNOS在生理情况下不表达,炎症状态下,iNOS被激活产生大量NO,导致组织损伤,加剧炎症进程。中药通过NF-κB和p38MAPK下调iNOS减少NO生成治疗炎症。不少活血化瘀药可以下调iNOS起到抗炎作用,为活血化瘀药治疗炎症提供了试验依据。     

酒大黄对动脉粥样硬化兔血脂和NO 及主动脉iNOS表达的影响

目的:探讨酒大黄对实验性动脉粥样硬化(AS)兔血脂、血清一氧化氮(NO)含量及主动脉诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:将健康雄性新西兰兔32只随机分为4组(n=8):空白对照组(N组)、AS模型组(M组)、酒大黄低剂量组(L组)和酒大黄高剂量组(H组),常规高脂饮食建立动脉粥样硬化模型。治疗给药12周,全自动生化分析仪检测血清脂蛋白的表达水平,硝酸还原酶法检测家兔血清NO水平,免疫组织化学法检测主动脉组织iNOS蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测兔主动脉组织iNOS mRNA的表达。结果:12周末与模型组相比,酒大黄低、高剂量组血清总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL),血清NO含量明显下降(P<0.01或P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)明显升高(P<0.01),酒大黄高剂量组甘油三脂(TG)水平显著降低(P<0.01)。主动脉组织iNOS组化染色及iNOS mRNA的表达均明显减弱(P<0.01或P<0.05)。结论:酒大黄干预能抑制AS兔主动脉iNOS及其mRNA的过度表达,减少NO的产生,降低血脂,有利于延缓动脉粥样硬化进程。     

参芎化瘀胶囊预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶亚型表达的影响

目的：观察参芎化瘀胶囊预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后一氧化氮合酶（NOS）亚型内皮型（eNOS）、神经元型（nNOS）及诱导型（iNOS）表达的影响,探讨参芎化瘀胶囊对大鼠急性脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法: 实验大鼠随机分为：假手术组,缺血再灌注组,参芎化瘀胶囊高、中、低剂量预处理 组（480、240、120 mg?kg－1）,各组又分为缺血2 h 再灌注后3、6、12、24、48、72 h 组,每组6 只。灌胃给药7天,每天1 次,第7 天灌胃2 h 后线栓法制作大脑中动脉阻断（MCAO）再灌注模型。免疫组化方法检测 eNOS、nNOS 和iNOS 蛋白表达。结果：①与假手术组比较,缺血再灌注组各时间点（3、6、12、24、48、72 h）eNOS、nNOS 和iNOS 表达均增强（P<0.05 或P<0.01）;于与缺血再灌注组比较,参芎化瘀胶囊预处理组各 时间点eNOS 表达均增强（P<0.05 或P<0.01）,nNOS 和iNOS 表达均减少（P<0.05 或P<0.01）,其中均以高剂量组效果最为显著。结论：参芎化瘀胶囊预处理对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与调节NOS 分型表达有关。     

Brain ischemia induces serine phosphorylation of neuronal nitric oxide synthase by Ca^2＋ ／ calmodulin-dependent protein kinase II in rat hippocampus

INTRODUCTIONConstitutively expressed nitric oxide synthase(NOS) has three isoforms, including neuronal NOS(nNOS), inducible NOS (iNOS), and endothelial NOS(eNOS), which has been isolated and cloned[1]. NOScatalyzed L-arginine to generate L-citruline and nitricoxide (NO), a gaseous messenger molecule, the over-production of which plays a critical role in glutamate-induced neurotoxicity after ischemia[2]. In mutant micedeficient in nNOS and subsequent NO production, inf-arct s…     

神经生长因子对一氧化氮介导的大鼠脑皮质神经元毒性的影响

研究神经生长因子（ＮＧＦ）对一氧化氮（ＮＯ）介导的大鼠脑皮质神经无毒性的影响。方法：用原代培养的大鼠胎鼠脑皮质神经细胞,测定ＮＯ含量及原生型一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）基因表达,并研究ＮＧＦ对细胞缺氧／缺糖损伤的影响。结果：细胞缺氧／缺糖培养 ２４ ｈ后,细胞死亡率明显增高,ＮＯ大量释放。 ＮＧＦ １００ μｇ／Ｌ显著提高细胞生存力,降低ＮＯ释放,但其对硝普钠（ＳＮＰ）３００ μｍｏｌ／Ｌ引起的ＮＯ大量释放及细胞死亡率升高无明显影响。 ＮＧＦ５０、１００ μｇ／Ｌ显著降低细胞缺氧／缺糖引起的 ｃＮＯＳ ｍＲＮＡ的高表达。结论：ＮＯ介导了细胞缺氧／缺糖损伤,ＮＧＦ通过抑制ｃＮＯＳ活性,降低ＮＯ释放来保护神经元免受缺氧／缺糖损伤。     

肉苁蓉抗运动性疲劳机制的实验研究

目的观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏乳酸脱氢酶同工酶、糖原及一氧化氮合酶3（NOS3）的影响，探讨其抗运动性疲劳的作用机制。方法将昆明种小鼠随机分为正常对照组、运动对照组和肉苁蓉实验组。正常对照组和运动对照组每只每日灌胃生理盐水0．2mL，肉苁蓉实验组每只每日灌胃肉苁蓉水煎液0．2mL（3g／kg），共15d；末次给药1h后，运动对照组和肉苁蓉实验组小鼠尾部负重5％游泳90min，10h后连同正常对照组小鼠处死取肝脏，一部分用中性甲醛固定制备石蜡切片，一部分制成肝细胞匀浆检测乳酸脱氢酶活性；常规腿染色观察肝脏组织结构，糖原染色法显示肝脏糖原，S-P免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏NOS3的表达。结果运动对照组与正常对照组比较，乳酸脱氢酶活性高（P〈0．05），肝脏结构损伤严重，糖原含量减少，NOS3表达下降（P〈0．05）；肉苁蓉实验组与运动对照组比较，乳酸脱氢酶活性降低，主要是乳酸脱氢酶5（LDH5）下降，肝小叶结构较清晰，糖原丰富，NOS3表达上调（P〈0．05）。结论肉苁蓉可降低LDH5活性，上调NOS3的表达，促进肝糖原合成，发挥肝脏保护和促进体能恢复作用。     

一氧化氮和水杨酸依次介导内生真菌诱导子促进苍术细胞中苍术素生物合成的信号转导

目的 研究介导内生真菌诱导子促进苍术悬浮细胞中苍术素生物合成的信号分子及信号转导途径,并探讨诱导子对苍术素合成途径关键酶活性的影响。方法 采用植物细胞悬浮培养法,考察内生真菌诱导子处理下苍术细胞中一氧化氮（NO）、水杨酸（SA）及苍术素量的变化。结果 内生真菌诱导子通过诱导苍术细胞中一氧化氮合酶（NOS）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）以及乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的活性,显著促进苍术细胞的NO迸发、SA和苍术素的合成。NOS抑制剂PBITU可以阻断诱导子对NO、SA和苍术素合成的促进作用,外源NO供体SNP及外源SA单独处理也能促进苍术素的合成,说明NO和SA是参与苍术素合成的信号分子,且NOS是参与诱导子诱发苍术细胞NO迸发的主要途径。NO猝灭剂cPITO可以有效清除诱导子诱发苍术细胞的NO迸发,显著阻断诱导子对苍术细胞中SA和苍术素合成的促进作用,外源SNP可以逆转cPITO对PAL、ACC活性以及SA、苍术素合成的抑制作用,表明NO是介导内生真菌诱导子诱发苍术细胞中苍术素和SA生物合成所必需的上游信号分子。结论 NO主要通过SA信号途径介导内生真菌诱导子激活ACC,显著促进苍术细胞中苍术素的生物合成。