心肌缺血预适应状态下肌浆网功能变化的研究进展

心肌缺血预适应(IPC)是对抗心肌缺血再灌注损伤的一种内源性保护途径。近年 来研究表明,心肌肌浆网可能是IPC发挥心肌保护作用的重要靶点之一,IPC通过对肌浆 网上的钙转运蛋白功能的调节,延缓了缺血再灌注损伤导致的细胞内钙超载的发生。而 IPC可能是通过钙/钙调素依赖性蛋白激酶 Ⅱ、腺苷受体以及蛋白激酶C等途径作用于肌 浆网。     

从钙超载角度探讨通脉养心丸心肌保护作用的机制

目的从抑制钙超载的角度探讨通脉养心丸抗细胞凋亡保护心肌的作用机制。方法采用大鼠心肌细胞原代培养方法获得正常心肌细胞并建立缺氧损伤细胞模型,采用FLIPR Calcium 4试剂盒检测药物对胞浆内钙离子浓度变化的影响;Annexin V/PI双染法检测心肌细胞总凋亡率。结果缺氧损伤组心肌细胞胞浆内钙离子浓度显著升高(P<0.01),通脉养心丸各剂量组变化不显著;再次加药后,通脉养心丸各剂量组胞浆内钙离子浓度均显著低于缺氧损伤组(P<0.01)。缺氧损伤组心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01),通脉养心丸4 g/kg、8 g/kg剂量组可显著降低心肌细胞凋亡率(P<0.01)。结论抑制心肌细胞钙超载是通脉养心丸抗心肌细胞凋亡保护心肌的作用机制之一。     

Calcium overload is a critical step in programmed necrosis of ARPE-19 cells induced by high-concentration H₂O₂

Objective Oxidative stress plays an important role in retinal pigmental epithelium （RPE） death during aging and the development of age-related macular degeneration.Although early reports indicate that reactive oxygen species （ROS） including H2O2 can trigger apoptosis at lower concentrations and necrosis at higher concentrations,the exact molecular mechanism of RPE death is still unclear.The purpose of this study was to investigate the molecular pathways involved in RPE death induced by exogenous ROS,especially at higher concentrations.Methods Cultured ARPE-19 cells were treated with H2O2 at different concentrations and cell viability was measured with the MTT assay.Cell death was morphologically studied by microscopy using APOPercentage assay and PI staining.Furthermore,the impact of oxidative stress on ARPE-19 cells was assessed by HO-1 and PARP-1 Western blotting and by the protection of antioxidant EGCG.Calcium influx was determined using the fura-2 calcium indicator and the role of intracellular calcium overload in ARPE-19 cell death was evaluated following cobalt treatment to block calcium effects.Results H2O2 reduced the viability of ARPE-19 cells in a concentration-dependent manner,which was presented as a typical s-shaped curve.Cell death caused by high concentrations of H2O2 was confirmed to be programmed necrosis.Morphologically,dying ARPE-19 cells were extremely swollen and lost the integrity of their plasma membrane,positively detected with APOPercentage assay and PI staining.24-hour treatment with 500 ？mol/L H2O2 induced remarkable up-regulation of HO-1 and PARP-1 in ARPE-19 cells.Moreover,antioxidant treatment using EGCG effectively protected cells from H2O2-induced injury,increasing cell viability from 14.17%±2.31% to 85.77%±4.58%.After H2O2 treatment,intracellular calcium levels were highly elevated with a maximum concentration of 1200nM.Significantly,the calcium channel inhibitor cobalt was able to blunt this calcium influx and blocked the necrotic pathway,rescuing the ARPE-19 cell from H2O2-induced death.Conclusions At high concentrations,H2O2 induces ARPE-19 cell death through a regulated necrotic pathway with calcium overload as a critical step in the cell death program.     

血浆PTH/PTHrP、钙离子浓度变化与胆囊胆固醇结石形成相关的研究

目的：进一步探讨了血浆中甲状旁腺激素（PTH）及其相关蛋白（PTHrP）、钙离子和胆汁中钙离子在胆囊胆固醇结石形成中的可能机制,为胆囊胆固醇结石防治提供理论根据和临床参考。方法：随机选择胆囊胆固醇结石患者45例为研究对象,同期同院随机选择健康体检人群35例,同期同院非胆囊结石患者（息肉组）30例。PTH采用ELISA检测,PTHrP采用RIA试剂盒（DSL-8100）,血清中Ca^2＋和胆汁中Ca^2＋用自动生化分析仪检测,胆囊结石利用叶氏化学分析。结果：胆石组血清Ca2＋较正常组明显增高（P〈0.05）,其血清PTH比正常组PTH明显降低,PTHrP相应比正常组PTHrP明显增高（P〈0.05）。胆石组胆汁Ca^2＋比息肉组胆汁中Ca^2＋明显增高（P〈0.05）。结论：其各种浓度变化在胆囊胆固醇结石形成中存在相互影响,从而影响了胆汁代谢的异常,胆囊收缩功能的异常和胆汁中的成核因子三个基本环节发生共同致石作用。     

硫化氢对氧糖剥夺/复氧诱导小鼠脑皮层神经元损伤的体外观察

目的 探讨硫化氢（H₂S）对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）诱导神经元损伤的影响。方法 小鼠皮层神经元用无糖厄尔氏平衡盐溶液（EBSS）于2% O₂、5% CO₂、93% N₂ 37℃培养4h,换用neurobasal + B27培养基于37℃ 5%CO₂培养箱中继续培养12h,建立OGD/R模型。以硫氢化钠(NaHS)作为H₂S的供体,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率;用fura-2/AM和显微荧光成像系统检测神经元胞质钙离子浓度（［Ca ²⁺ ］i）;利用比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率;碘化丙啶（PI）染色检测细胞损伤。 结果 200、300与600 μmol/L NaHS预处理30min再OGD/R,神经元存活率显著提高（n=4）;300 μmol/L NaHS预处理后再OGD/R,［Ca ²⁺］i（n=5）、LDH释放率（n=4）和细胞损伤率（n=6）均低于OGD/R组,且使用10 μmol/L钙螯合剂BAPTA也降低OGD/R诱导的LDH释放率和细胞损伤率。 结论 H₂S减轻OGD/R所致皮层神经元损伤,其机制与H₂S抑制OGD/R诱导神经元钙超载有关。     

莱菔硫烷对阿尔茨海默病样损伤小鼠的神经保护作用

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对阿尔茨海默病(AD)样损伤小鼠的神经保护作用,为防治AD提供理论依据。 方法 健康成年C57BL/6J雄性小鼠按体重随机分为3组,每组10只。模型组和干预组小鼠饮用含铝水(浓度为0.4 g/100 ml),并隔日皮下注射200 mg/kg D-半乳糖,此外,干预组小鼠每日1次灌胃给予25 mg/kg SFN,模型组小鼠每日1次灌胃等量蒸馏水,同时设立溶媒对照组。每日1次观察小鼠的一般状况,并每周称重1次,90 d后采用Morris水迷宫方法检测小鼠的认知能力,刚果红染色法检测脑组织老年斑(SP)沉积情况,Real-time PCR法检测大脑皮层Gβ2 mRNA水平,流式细胞术检测大脑皮质细胞内游离Ca²⁺水平。 结果 在整个受试期间各组小鼠均未见异常表现及死亡,各组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,模型组小鼠认知能力下降(P<0.05),大脑皮质及海马SP斑块数量均增多(P<0.01),大脑皮质Gβ2 mRNA水平降低(P<0.05),大脑皮质细胞内游离Ca²⁺浓度升高(P<0.05)。与模型组相比,SFN能提高小鼠的认知能力(P<0.05),减少大脑皮质和海马SP斑块数量(P<0.01),提高大脑皮质Gβ2 mRNA水平(P<0.05),降低大脑皮质细胞内游离Ca²⁺浓度。 结论 SFN可明显减少AD模型小鼠脑组织SP沉积,改善认知能力,其作用机制可能与SFN调控G蛋白表达,防止细胞内钙超载有关。     

人参皂苷Rg1对大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧后钙内流的影响北大核心CSCD

目的观察人参皂苷Rg1对大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧后钙内流的影响,并探讨其可能的脑保护机制。方法建立大鼠海马神经元缺糖影复糖氧模型,随机分为正常对照组、模型组和人参皂苷Rg1干预组（5、20、60μmol／L）。复糖氧后24h以Fluo-3 AM荧光染色法观察各组海马神经元细胞内钙离子浓度变化,以Hoechst染色法检测细胞凋亡,并检测细胞四甲基偶氮唑盐（MTT）代谢率。结果与模型组比较,人参皂苷Rg1中、高剂量组海马神经元细胞内钙离子浓度降低,凋亡细胞减少,MTT代谢率升高,人参皂苷Rg1低剂量组变化不明显。结论脑缺血后神经元细胞内钙超载与脑损伤关系密切,人参皂苷Rg1可通过减少缺糖氧神经元细胞内钙内流,发挥脑保护作用。     

针灸对心肌细胞钙超载保护机制的研究进展

钙离子(Ca~(2+))作为细胞内普遍存在的第二信使,其相关的信号转导通路参与了机体内多种生理活动和病理变化的信号转导,具有广泛和重要的生理学作用,但其具体机制尚未被完全阐明。目前在心肌损伤的机制研究中,钙超载学说已得到医学学术界的公认,越来越多的研究证明钙超载是引发心肌细胞损伤的重要原因之一。笔者查阅了近10年国内外相关的文献资料发现,针灸对心肌细胞钙超载的保护机制主要有细胞膜Ca~(2+)转运途径、肌浆网膜Ca~(2+)转运途径及线粒体途径(即能量代谢途径)等。     

血管紧张素Ⅱ对豚鼠乳头肌电生理的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否具有直接的心脏毒性作用及致心律失常作用.方法采用标准微电极技术记录心肌细胞的单相动作电位,评价AngⅡ对豚鼠乳头肌心肌细胞的电生理作用及其致心律失常作用.结果AngⅡ可以致多种机制的心律失常,AngⅡ(10-5mol/L)灌注1min,动作电位Vmax,APA,APD90,RMP与对照状态比较分别为10.8±4.2∶16.3±7.2V/s,76.8±24.9∶106.7±17.7mV,235.4±58.3∶303.0±73.8ms,61.5±18.2∶92.0±14.8mV,P均<0.05,灌注3分钟APD30及APD50、ERP显著缩短,与对照状态比较分别为98.1±42.2∶124.9±44.0ms,145.5±25.4∶168.7±43.2ms,174.0±22.0∶252.0±24.0ms,P<0.05.结论AngⅡ可以降低动作电位幅度,静息膜电位及Vmax,缩短动作电位时程及有效不应期,具有致心律失常的作用.     

丹参酮对氯化钾及N-甲基-D-门冬氨酸诱导PC12细胞钙超载损伤的保护作用

目的：探讨丹参酮对PC12细胞钙超载损伤模型的保护作用及机制。方法：采用组织培养法,以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株PC12细胞为材料,制备KCl及NMDA诱导的钙超载损伤模型。结果：形态学检查发现丹参酮对两种不同类型的钙超载损伤模型中的PC12细胞具有明显保护作用。MTT法活细胞测定提示丹参酮可显著提高损伤模型中细胞存活数,降低细胞释放的LDH活性,并显著减少胞内钙离子浓度,结论：丹参酮对钙超载所致PC12细胞损伤有显著的保护作用。