人乳头状瘤病毒11型E7抗原HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的功能鉴定

目的 筛选和鉴定人乳头状瘤病毒11型E7抗原(HPVllE7)HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位.方法 预测HPVllE7抗原HLA-A*0201限制性CTL表位并合成相对应的表位多肽和四聚体(tetramer),即HPVllE7 7-15(TLKDIVLDL)、15-23(LQPPDPVGL)、47-55(PLTQHYQIL)、81-89(DLLLGTLNI)和82-90(LLLGTLNIV).从健康HLA-A*0201成人外周血单一核细胞诱导树突状细胞(DC)并负载上述表位多肽,流式细胞技术检测DC成熟分化标记及ELISA法检测DC分泌的IL-12;成熟DC负载各组多肽后观察DC激活T淋巴细胞的效应,ELISA法检测T细胞分泌的IFN-γ;四聚体检测抗原特异性CD8+ T细胞及乳酸脱氢酶(LDH)释放法评价DC诱导的CTL对靶细胞的特异性体外杀伤效应.结果 预测的5条HPVllE7表位多肽均能诱导DC的成熟分化;E7 7-15、82-90和15-23多肽负载的DC能激活T淋巴细胞分泌高水平IFN-γ;E7 7-15多肽负载的DC能刺激特异性tetramer+CD8+细胞增殖且其诱导的CTL对HPVllE7/293细胞产生高效率的特异性杀伤作用(P<0.05).结论 筛选并鉴定出1条HPVllE7HLA-A*0201限制性CTL表位E7 7-15(TLKDIVLDL),负载该表位肽的DC体外可诱导高效、特异性的CTL效应,抗原性较强,有可能作为HPV感染治疗用肽疫苗的候选表位.     

RNA编辑酶ADAR1对淋巴细胞系增殖的影响

目的 探索ADAR1活性升高对淋巴细胞细胞增殖的影响。方法 （1）构建反转录病毒载体；PCR从小鼠cDNA中放大ADAR1全长基因，连入反转录病毒MIEV载体，感染包装细胞后分泌病毒颗粒；（2）病毒颗粒感染T淋巴细胞CTLL2和B淋巴细胞A20，观察细胞增殖的变化；（3）MTT法测定细胞增殖率。结果 ADAR1/MIEV病毒感染淋巴细胞后，使细胞增殖速度减慢。结论 ADAR1在淋巴细胞发挥功能方面起有重要的作用，但哪些物质需要编辑以及具体机制如何，需要进一步研究。     

登革2型病毒E蛋白免疫优势表位的筛选鉴定

目的 用噬菌体展示肽库筛选登革2型病毒(DEN2)E蛋白的抗原表位，并确定该抗原表位性质。方法 以DEN2型特异的E单克隆抗体作为筛选分子，生物淘洗噬菌体随机12肽库，将筛选的噬菌体阳性克隆进行ELISA检测、DNA序列测定及展示肽的氨基酸序列推导，通过噬菌体展示肽序列与DEN2E蛋白的氨基酸一级结构的对比，初步确定E蛋白的抗原表位；用模拟该表位线性序列的合成十肽进行抗体结合试验、噬菌体竞争抑制试验及与DEN感染患者的血清学试验，确定其为免疫优势线性表位。结果 肽库淘洗获得的11个ELISA阳性的噬菌体克隆有相似的结构基序WFKKGSS，其展示肽与DEN2E蛋白390～398 AA序列有3～5个氨基酸相同。对应于DEN2E蛋白390～399AA的合成十肽能与淘洗单抗特异反应，并可抑制噬菌体阳性克隆与该单抗结合。该合成肽与DEN2感染患者血清有较高的免疫反应性。结论 本实验通过噬菌体随机肽库的生物淘洗确定的DEN2E蛋白(E390～398AA)线性序列为免疫优势表位，其对应的合成肽E10可望用于DEN2感染的快速诊断。     

一氧化氮抗柯萨奇病毒作用的研究进展

柯萨奇病毒是人类病毒性心肌炎的主要病原体.目前临床对柯萨奇病毒感染尚无特异、有效的治疗措施.近年来,研究证明一氧化氮可以灭活柯萨奇病毒的2A和3C蛋白酶,从而抑制病毒的装配成熟,为抗柯萨奇病毒开辟了新的生物治疗的思路.     

IL-7对中国HIV/AIDS患者病程的影响

目的 了解IL-7对中国HIV／AIDS患者病程的影响。方法应用超敏感酶免法对66例中国HIV／AIDS感染者及8例健康对照者血浆IL-7水平进行定量检测，分析其与CD^＋T细胞绝对值、血浆病毒载量及HIV表型的相关性；并且在体外研究rhIL-7对人PBMC中T淋巴细胞增殖及CXCR4表达的影响。结果中国HIV／AIDS患者血浆IL-7水平高于健康对照（P〈0．05），与CD4^＋T细胞绝对值负相关（P〈0．01），与血浆病毒载量正相关（P〈0．05）。rhIL-7可在体外促进T淋巴细胞增殖反应及CXCR4表达。结论中国HIV／AIDS患者血浆IL-7水平升高，且与疾病进展密切相关，可作为疾病进展的相关标志之一。     

EB病毒转化B淋巴细胞影响因素的研究

人外周血Ｂ淋巴细胞膜上有ＥＢ病毒 (ＥＢＶ)受体 ,在体外可被ＥＢＶ转化为Ｂ淋巴母细胞样细胞系 (ＬＣＬ) ,ＬＣＬ具有永生性 ,能在体外长期传代生长 ,且能保持较稳定的遗传学性状。因而ＬＣＬ可被广泛应用于医学生物学研究的许多领域 ,如进行基因组遗传物质结构的分析 ,某些细胞生物学性状的检测等。目前建立ＬＣＬ的方法主要有环孢霉素Ａ法、微量全血法及冻存全血法。但微量全血法和冻存全血法因具有操作简单 ,所需标本量少的优点 ,而被广泛采用。我们就影响微量全血法转化效果的因素作了初步探讨。实验中共收集血标本 78份 ,其中正常人 …     

NF-κB在人肝细胞肝癌中的表达及与HBV X蛋白的关系

目的：研究核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中的表达及其与乙型肝炎病毒（HBV ）X蛋白的关系。方法；用免疫组织化学S－P法，检测52例人肝细胞肝癌组织中核转录因子NF－-κB及HBV X蛋白的表达；用脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染入人肝癌细胞系HCC－9204，检测肝癌细胞内核转录因子NF－-κB的表达。结果：52例人肝细胞肝癌组织均有核转录因子NF－-κB的广泛表达，并且在11例HBV X蛋白阳性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于细胞胞质和胞核，而在41例HBV X蛋白阴性的肝癌组织，核转录因子NF－-κB位于肝癌细胞的胞质。将HBV x基因真核表达载体pcDNA3.1-HBX转染 入人肝癌细胞系HCC－9204，并在稳定表达X蛋白 的肝癌细胞，核转录因子NF－-κB定位于其胞质和胞核，而未进行基因转染的亲体细胞，核转录因子NF－-κB仅定位于细胞质，细胞核无核转录因子NF－-κB的表达。结论：核转录因子NF－-κB在人肝细胞肝癌组织中广泛表达，人肝细胞肝癌中存在着核转录因子NF－-κB的异常激活，并且核转录因子NF－-κB的异常激活与HBV X蛋白有关，X蛋白激活核转录因子NF－-κB， 使其从细胞转位于细胞核，这可能在HBV相关的人原发性肝癌肝癌的发生中起一定作用。     

ELISA检测TT病毒及感染状况报告

ＴＴ病毒（ＴＴＶ）是近几年来新发现的一种与输血相关的新型病毒。近年来报道甚多，但在贵州地区至今尚无有关捐血人群ＴＴＶ感染方面的报道。笔者采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），对贵阳地区近年来部分捐血人群进行ＴＴＶ实验检测，旨在了解贵阳地区捐血人群的ＴＴＶ感染情况，并提供有实用价值的资料。１ 材料和方法１．１材料 调查对象：贵阳地区捐血者１９９９年６月至２００１年４月共３３５例。实验标本全部来自血液中心街头流动采用血车及来我中心捐血者。及时分离血清置－２０℃冻存保存备检。ＥＩＪＳＡ读数仪为ＫＭ＿2型（…     

塞姆利基森林病毒翻译增强序列对HIV Gag DNA疫苗抗原表达和免疫原性的调节

目的 研究塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus，SFV）衣壳蛋白5’翻译增强区对基于该病毒复制子的HIV Gag DNA疫苗抗原表达水平和免疫原性的影响：方法将SFV衣壳蛋白（capsid，C蛋白）基因的5’端102bp翻译增强区插入到SFT复制子DNA疫苗载体pCMV-Rep的SFV亚基因启动子下游，得到DNA疫苗载体pCMV-RepC。将删除ATG的HIV-1 gag基因插入pCMV-RepC，使gag编码区与翻详增强区融合，得到DNA疫苗质粒pCMV-RepC-gag。同时，构建携带未融合翻译增强序列的DNA疫苗质粒pCMV-Rep-gag。Western blot检测翻译增强序列对Gag表达水平的影响。用上述两种DNA疫苗分别免疫BALB／c雌性小鼠，ELISA检测Gag特片的抗体反应，ELISPOT和细胞内因子染色技术检测细胞免疫应答。结果衣壳蛋白5’翻译增强区增强了Gag表达水平，对体液免疫应答没有显著影响，但显著增强了特异性细胞免疫应答水平。结论SFVC蛋白翻译增强区能显著提高SFV复制子DNA疫苗的抗原表达和抗原特异性细胞免疫反心。     

痘苗病毒载体与肿瘤基因治疗（下）——重组痘苗病毒载体介导的肿瘤基…

目前采用同源重组构建了多种表达外源基因的重组痘苗病毒载体，包括ＩＬ－２，ＩＬ－３，ＩＬ－４，ＩＬ－５，ＩＬ－６，ＩＦＮα，ＩＦＮγ，ＧＭ－ＣＳＦ，ＴＮＦ，ＩＬ－１０等细胞因子基因及ｐ９７，ＣＥＡ，ＭＵＣ１等肿瘤抗原基因，并应用于肿瘤基因治疗的体内外实验取得了明显的疗效。应用痘苗病毒载体进行ｉｎ ｖｉｖｏ基因治疗可望成为肿瘤基因治疗的一种新模式。